Name: In vitro Exposiciones al cannabis de las células epiteliales pulmonares en la interfaz aire-líquido (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Aprende a exponer células epiteliales pulmonares a vapor de cannabis en interfaz aire-líquido con dosimetría en tiempo real mediante microbalanza de cristal de cuarzo. Este protocolo estandarizado mejora la reproducibilidad en toxicología por inhalación.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo de centrífuga de 15 ml, gradilla (gradilla de poliestireno), estéril</td><td>Montreal Biotech Inc.</td><td></td><td></td>MBI601051C</tr><tr><td>viales de vidrio de 30 ml</td><td>Thomas Scientific</td><td>1755F32</td><td></td></tr><tr><td>A549 células</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-antimicótico (100x)</td><td>Wisent</td><td>450-115-EL</td><td></td></tr><tr><td>Molinillo de hierbas de cannabis&nbsp;</td><td>Genchi</td><td>https://www.amazon.ca/Genchi-Grinder-Crystal-Threads-Premium/dp/B094WX443Y/ref=sr_1_10?crid=A1EV93N8PW1V&dib=eyJ2Ijo iMSJ9.WX_vMBLeAHzc6JplZiba8i w7k_cGpHrEm0VunfiDZqO0U1mT NA0Tr8j5nGMqrGq1BW75hAV8Fr3 SDCGH7O7zwsmmCWOxvdAEN4 97Npj07w0FHMuNDtuKZ3hKv9d8 vauHRtueWaDqYEPOCIAy956bGf PwXu2Gp9nCWVhFCo1gHqgeh1N nrWwD3lJ_r_wx2GoauoNdVw9eH A2QYc1tx3XKMidd2YkVRF_ABYL ZJd0EIDxi22hBnzaM4KklLO6Ep0v OGb1QifhM062KUvTTY9PAOUn8F -O1V0qNYQiRk6SQo2WId2wOHS Mz_zo4YCbkDQf2rNGy81iXhuBzV qu9LhvOcI1xnPUd-JPLx_4rZdSC92 Q_QZODiSxBhH-ellca78LW2iV4XXU vIr-fVWIKdhrS49MD7KV1lCjdBcT_ K3l4bT0mBgZB1_Qpgf_5tmrj-kf.-ctY GDLXKn-ovr6On-5g1G0_oK5mrHdj CN3LXumyu8Q& dib_tag=se& palabras clave=hierba%2Bgrinder& qid=1736346511& sprefix=herb%2Bgrinder%2Caps% 2C168& sr = 8-10 y th=1</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno de placenta humana, tipo IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7521</td><td></td></tr><tr><td>Costar 12 mm transwell, 0,4 &micro; Membrana de poliéster de poro m Insertos</td><td>Stemcell Technologies</td><td>38023</td><td></td></tr><tr><td>Kit de detección de citotoxicidad (LDH)</td><td>Roche</td><td>11644793001</td><td></td></tr><tr><td>Davinci MIQRO-C vaporizador de hierbas secas</td><td>DAVINCI</td><td>https://davincivaporizer.com/products/davinci-miqro-c</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34869</td><td></td></tr><tr><td>Medio DMEM</td><td>Wisent</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>Flor de cannabis seca</td><td>Soci&eacute; t&eacute; qu&eacute; b&eacute; coise du cannabis</td><td>https://www.sqdc.ca/en-CA/dried-cannabis?&fn1=CannabinoidBalanceLookup Value&fv1=THC</td><td>Contenido de cannabinoides: 17&ndash; 23% de THC < 0,1% de CBD</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Wisent</td><td>080-150</td><td>FBS</td></tr><tr><td>flexiWare&nbsp;</td><td>SCIREQ</td><td>https://www.scireq.com/downloads/</td> <td>Versión 8.4.1</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Wisent</td><td>450-134-XL</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>100063&nbsp;</td><td></td></tr><tr>Paquete <td>de exposición</td> in vitro <td>Glutamax</td><td>ThermoFisher Scientific</td> 35050061 <td></td></tr><tr><td>inExpose expoCube&nbsp; &nbsp;</td><td>SCIREQ</td><td>IX-XCP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Infinite 200 PRO</td><td>TECAN</td><td>30125944</td><td></td></tr><tr><td>metanol de grado LC/MS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>106035</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>T175 EasYFlask, TC Surface, Tapa de filtro</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>159910</td><td></td></tr><tr><td>T75 EasYFlask, TC Surface, Tapa de filtro</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td>156499</tr><tr><td>Bromuro de tetrazolio azul de tiazolilo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M 2128</td><td>MTT</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108603</td><td></td></tr><tr><td>Baño limpiador ultrasónico</td><td>VWR</td><td>18303</td><td>Baño de sonicador</td></tr><tr><td>Organizador semanal de píldoras</td><td>HealthSmart</td><td>640-8223-0000</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro exposiciones al cannabis de las células epiteliales pulmonares en la interfaz aire-líquido

In vitro Cannabis Exposures of Lung Epithelial Cells at the Air-Liquid Interface

Durante los experimentos con el sistema expoCube, cuatro pocillos reciben la exposición al vapor de cannabis, cuatro pocillos están expuestos al aire acondicionado como controles de vehículos y los cuatro pocillos restantes están completamente cerrados como controles negativos (Figura 1C)17. Esta configuración permite una comparación precisa entre las condiciones tratadas, del vehículo y negativas. El sistema se humidifica para crear un ambiente adecuado para los cultivos celulares (Figura 2), y la regulación de la temperatura dentro del sistema mejora la deposición de partículas a través de la termoforesis, lo que permite la entrega eficiente de compuestos vaporizados alas células. Para cuantificar la exposición, medimos la cantidad de Δ9-THC como marcador de la deposición de vapor de cannabis en el sitio de exposición de la célula. Esta cuantificación es crucial para optimizar los tiempos de exposición y las dosis, lo que permite a los investigadores ajustar los períodos de exposición activa para lograr las dosis deseadas en los experimentos de cultivo celular (Figura 3). Al calcular la proporción de Δ9-THC recolectado en el filtro de flujo de exposición a la cantidad depositada en los pocillos individuales, podemos estimar la dosis real entregada a las células (Tabla 1). Esta dosis calculada informa el rango de exposición deseado, lo que ayuda a determinar los parámetros óptimos para estudiar las respuestas celulares al vapor de cannabis de una manera consistente y medible. Esto se puede realizar con otros cannabinoides, dependiendo del perfil de cannabinoides de la cepa de cannabis seleccionada. Además, se puede realizar un análisis QCM para medir la deposición de vapor de cannabis en tiempo real. La figura 4 muestra la deposición de vapor de cannabis durante un curso de tiempo de 30 minutos en el que el vaporizador y el material de cannabis se cambiaron cada 5 minutos. Cada pocillo mostró un aumento constante de masa a lo largo del tiempo, lo que indica una deposición efectiva y continua de partículas enteras de vapor de cannabis.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig01.jpg"> 
Figura 1: Esquema del sistema de exposición in vitro/ex vivo ALI/Transwell para la exposición al vapor de cannabis en el ALI. (A) El vaporizador DaVinci MIQRO se utilizó para generar vapor de cannabis. Esta muestra se humedece y se transporta a través del muestreador isocinético hasta el sitio de exposición. La unidad de control permite ajustar las salidas de flujo de aire y los gradientes de temperatura. (B) Fotografías de la configuración del sistema de exposición. (C) El interior del expoCube está compartimentado en tres filas: una fila de prueba para la exposición al vapor de cannabis, una fila de control del vehículo de aire acondicionado y la fila de control negativo cerrada que permanece intacta por cualquier flujo de aire. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig02.jpg"> 
Figura 2: Perfil de humedad relativa (%) registrado a lo largo del tiempo. Estos datos muestran los niveles de humedad relativa cuando se activan los Aeronebs, alcanzando y manteniendo una humedad media del 75%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig03.jpg"> 
Figura 3: Cuantificación de la deposición de Δ 9-THC mediante análisis LC/MS tras exposiciones de 30 minutos al vapor de cannabis. (Un-C) Se midió la deposición de δ9-THC en cada pocillo después de tres exposiciones independientes de vapor de 30 minutos, cada una utilizando 1,5 g de un cultivar de cannabis con alto contenido de THC. Los niveles de Δ9-THC se cuantificaron mediante LC/MS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig04.jpg"> 
Figura 4: Mediciones de QCM de la deposición de vapor de cannabis en el sistema de exposición in vitro/ex vivo ALI/Transwell durante un régimen de exposición de 30 minutos. (A-D)Cada gráfico representa la deposición acumulada de partículas de vapor de cannabis en los pozos 1-4, con la masa medida en microgramos (μg) a lo largo del tiempo. La tasa de deposición demuestra una acumulación constante en todos los pozos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Deposición del filtro de flujo primario (μg)</td>
			<td>Deposiciones de pozos (μg)</td>
			<td>Porcentaje de caudal primario depositado en el pozo (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Exposición 1</td>
			<td rowspan="4">2142.3</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.6</td>
			<td>0.22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Exposición 2</td>
			<td rowspan="4">2726.5</td>
			<td>4.1</td>
			<td>0.15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.9</td>
			<td>0.14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.6</td>
			<td>0.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Exposición 3</td>
			<td rowspan="4">2400</td>
			<td>3.6</td>
			<td>0.15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.8</td>
			<td>0.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>0.21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>0.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Promedio</td>
			<td>2422.9</td>
			<td>4.3</td>
			<td>0.18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desviación estándar</td>
			<td>292.8</td>
			<td>0.4</td>
			<td>0.03</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1. Comparación de la deposición de Δ9-THC en el sistema de exposición in vitro/ex vivo ALI/Transwell entre el filtro de flujo de exposición y el sitio de exposición de la célula.

In vitro Exposiciones al cannabis de las células epiteliales pulmonares en la interfaz aire-líquido

Cannabis is used by an estimated 192 million people around the world. Most people use cannabis through the inhalation of cannabis smoke, which contains ...

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Investigación

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Células epiteliales pulmonares pueden ser aislados de las vías respiratorias de los ratones y se cultivan en la interfaz aire-líquido como un modelo de epitelio respiratorio diferenciados. Un protocolo es descrito para el aislamiento, el cultivo y la exposición de estas células al humo del cigarrillo convencional, con el fin de estudiar la respuesta molecular a esta toxina ambiental.

Aislamiento de ratón las células epiteliales respiratorias y la exposición al humo del cigarrillo Experimental de la interfaz de aire líquido

Este protocolo está diseñado para demostrar método de exposición de cultivos de células a productos químicos tóxicos inhalados. La exposición de diferenciada interfaz aire-líquido (ALI) cultivos de células epiteliales de las vías respiratorias proporciona un modelo único de la exposición de las vías respiratorias a los gases tóxicos tales como el cloro. En este manuscrito se describe el efecto de la exposición al cloro en las culturas de la interfaz aire-líquido de las células epiteliales y la...

In vitro modelo de cultivo celular para Toxic inhalado Prueba química

El objetivo de este protocolo es exponer modelos organotípicos de tejido bronquial y nasal en 3D humanos al humo de cigarrillo (CS) convencional en la interfaz aire-líquido. A continuación, se investiga el impacto de la CS en los tejidos mediante un ensayo de actividad del citocromo P450, una medición del latido de los cilios y un enfoque de biología de sistemas.

Evaluación del Impacto de la exposición repetida de Organotípicos 3D bronquiales y nasales Modelos Tissue Culture Whole humo del cigarrillo

Se describe un protocolo fácil diseñado específicamente para alcanzar precisas y controladas las concentraciones de sevoflurano o isoflurano en vitro con el fin de mejorar nuestra comprensión de los mecanismos implicados en la lesión pulmonar epitelial y poner a prueba la novela terapias para el síndrome de dificultad respiratoria aguda.

In Vitro Método de Control de concentraciones de Gases halogenados en cultivos de células epiteliales alveolares

Aquí, presentamos un protocolo para realizar exposiciones de aerosol celular portable y medir la respuesta celular. El método utiliza las células, cultivadas en la interfase aire-líquido, imitando en vivo fisiología. Respuesta celular a aerosoles de nanopartículas de cobre se observó como el estrés oxidativo a través de la generación de especies reactivas de oxígeno y la citotoxicidad como liberación de lactato deshidrogenasa.

Un nuevo portátil In Vitro exposición Cassette para el muestreo de aerosoles

Presentamos un sistema de exposición in vitro robusto, transferible y predictivo para el cribado y seguimiento de partículas transmitidas por el aire relativas a su citotoxicidad pulmonar aguda mediante la exposición de células pulmonares humanas cultivadas en la interfaz aire-líquido (ALI).

Evaluación de la toxicidad aguda por inhalación de partículas transmitidas por el aire mediante la exposición de células pulmonares humanas cultivadas en la interfaz aire-líquido

Aquí se describe un protocolo para estudiar cómo el extracto de humo de cigarrillo afecta la colonización bacteriana en las células epiteliales pulmonares.

Estudio de los efectos del humo del cigarrillo en la infección por pseudomonas en células epiteliales pulmonares

Descrito es el método de cultivo celular y exposición de un modelo bronquial in vitro para la exposición realista y repetida a partículas para pruebas de toxicidad.

Un modelo epitelial bronquial de interfaz aire-líquido para la exposición realista y repetida por inhalación a partículas en el aire para pruebas de toxicidad

El presente protocolo describe células alveoidales alveoidales pluripotentes derivadas de células madre pluripotentes inducidas por humanos (iAT2). Estas células pueden cultivarse como esferas autorrenovadoras en cultivo 3D o adaptarse al cultivo de interfaz aire-líquido (ALI).

Generación de esferas 3D y cultivos de interfaz aire-líquido 2D de células epiteliales alveolares pluripotentes inducidas por humanos derivadas de células madre pluripotentes de tipo 2

En este trabajo describimos un modelo in vitro para aislar y diferenciar células epiteliales murinas de las vías respiratorias, centrándonos en su aclimatación al extracto crónico de humo de cigarrillo (CSE). El modelo podría utilizarse para caracterizar de forma exhaustiva el impacto multiómico de la CSE, lo que posiblemente proporcione información sobre las respuestas celulares bajo una exposición crónica al humo.

Modelo in vitro para el estudio de la diferenciación y los cambios de las células epiteliales de las vías respiratorias murinas estimuladas con extracto de humo de cigarrillo

Los cartuchos de vaporizador de destilado de cannabis son dispositivos que funcionan con baterías y que aerosolizan extractos que contienen altas concentraciones de cannabinoides. La ausencia de modelos preclínicos establecidos para estos productos crea desafíos en el estudio de sus efectos fisiológicos. Para abordar esta brecha, se ha desarrollado un modelo murino de inhalación preclínica estandarizado para destilados de cannabis vaporizados.

Desarrollo de un modelo preclínico de inhalación para probar destilados de cannabis vaporizados

Aprende a exponer células epiteliales pulmonares a vapor de cannabis en interfaz aire-líquido con dosimetría en tiempo real mediante microbalanza de cristal de cuarzo. Este protocolo estandarizado mejora la reproducibilidad en toxicología por inhalación.

In vitro Exposiciones al cannabis de las células epiteliales pulmonares en la interfaz aire-líquido

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