Name: En Ovo Xenoinjerto de células de leucemia linfoblástica aguda (LLA) derivadas de pacientes (PDX-ALL) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Aprende a establecer xenoinjertos in ovo de células de leucemia linfoblástica aguda derivadas de pacientes. Este método rápido permite evaluar respuestas a fármacos y estudios mecanicistas en biología del cáncer.

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<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+evidence+that+tumors+are+angiogenesis+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent.</a> J Natl Cancer Inst. 82 (1), 4-6 (1990).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Dumartin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netrin-1+mediates+early+events+in+pancreatic+adenocarcinoma+progression%2C+acting+on+tumor+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Netrin-1 mediates early events in pancreatic adenocarcinoma progression, acting on tumor and endothelial cells.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1595-1606 (2010).</li>
<li>Aguirre-Ghiso, J. A., Estrada, Y., Liu, D., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK+activity+as+a+determinant+of+tumor+growth+and+dormancy%3A+Regulation+by+p38%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">ERK activity as a determinant of tumor growth and dormancy: Regulation by p38.</a> Cancer Res. 63 (7), 1684-1695 (2003).</li>
<li>Baroni, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribonomic+and+short+hairpin+RNA+gene+silencing+methods+to+explore+functional+gene+programs+associated+with+tumor+growth+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Ribonomic and short hairpin RNA gene silencing methods to explore functional gene programs associated with tumor growth arrest.</a> Methods Mol Biol. 383, 227-244 (2007).</li>
<li>Lopez-Rivera, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+nitric+oxide+synthase+drives+mTOR+pathway+activation+and+proliferation+of+human+melanoma+by+reversible+nitrosylation+of+TSC2%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inducible nitric oxide synthase drives mTOR pathway activation and proliferation of human melanoma by reversible nitrosylation of TSC2.</a> Cancer Res. 74 (4), 1067-1078 (2014).</li>
<li>Balke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+short-term+in+vivo+model+for+giant+cell+tumor+of+bone%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A short-term in vivo model for giant cell tumor of bone.</a> BMC Cancer. 11, 241(2011).</li>
<li>Balke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+characterization+of+osteosarcoma+growth+on+the+chick+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane.</a> BMC Res Notes. 3, 58(2010).</li>
<li>Sys, G. M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CAM-assay+as+a+xenograft+model+for+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The CAM-assay as a xenograft model for sarcoma.</a> J Vis Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Chick+Chorioallantoic+Membrane+%28CAM%29+assay+as+an+efficient+xenograft+model+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) assay as an efficient xenograft model of hepatocellular carcinoma.</a> J Vis Exp. (104), e52411(2015).</li>
<li>Pontel, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lymphoblastic+leukemia+necessitates+GSH-dependent+ferroptosis+defenses+to+overcome+FSP1-epigenetic+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Acute lymphoblastic leukemia necessitates GSH-dependent ferroptosis defenses to overcome FSP1-epigenetic silencing.</a> Redox Biol. 102408, (2022).</li>
<li>Oriol, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+after+relapse+of+acute+lymphoblastic+leukemia+in+adult+patients+included+in+four+consecutive+risk-adapted+trials+by+the+PETHEMA+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Outcome after relapse of acute lymphoblastic leukemia in adult patients included in four consecutive risk-adapted trials by the PETHEMA Study Group.</a> Haematologica. 95 (4), 589-596 (2010).</li>
<li>Xin, Q., Chen, Z., Wei, W., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lymphoblastic+leukemia%3A+Recapitulating+the+human+disease+to+evaluate+drug+efficacy+and+discover+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lymphoblastic leukemia: Recapitulating the human disease to evaluate drug efficacy and discover therapeutic targets.</a> Biochem Pharmacol. 198, 114970(2022).</li>
<li>Gilmore, M. J., Prentice, H. G., Blacklock, H. A., Janossy, G., Hoffbrand, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+rapid+isolation+of+bone+marrow+mononuclear+cells+using+Ficoll-Metrizoate+and+the+IBM+2991+blood+cell+processor%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">A technique for rapid isolation of bone marrow mononuclear cells using Ficoll-Metrizoate and the IBM 2991 blood cell processor.</a> Br J Haematol. 50 (4), 619-626 (1982).</li>
<li>Boyer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+to+estimate+leukemia+stem+cells+in+primary+acute+myeloid+leukemia+and+in+patient-derived+xenografts%2C+at+diagnosis+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry to estimate leukemia stem cells in primary acute myeloid leukemia and in patient-derived xenografts, at diagnosis and follow-up.</a> J Vis Exp. (133), e56976(2018).</li>
<li>Kang, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+loss-of-function+genetic+screening+identifies+opioid+receptor+mu1+as+a+key+regulator+of+L-asparaginase+resistance+in+pediatric+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Genome-wide loss-of-function genetic screening identifies opioid receptor mu1 as a key regulator of L-asparaginase resistance in pediatric acute lymphoblastic leukemia.</a> Oncogene. 36 (42), 5910-5913 (2017).</li>
<li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HAP1+loss+confers+L-asparaginase+resistance+in+ALL+by+downregulating+the+calpain-1-Bid-caspase-3%2F12+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">HAP1 loss confers L-asparaginase resistance in ALL by downregulating the calpain-1-Bid-caspase-3/12 pathway.</a> Blood. 133 (20), 2222-2232 (2019).</li>
<li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agujas de 34 g</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Citómetro de flujo Attune NxT</td><td>Termo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jeringa BD Perisafe (32 G)</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Albúmina de suero bovino (BSA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Referencia A9647</td><td></td></tr><tr><td>Medio de congelación celular</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12648010</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga (Centrífuga Allegra X-22R)</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guantes desechables</td><td>Guantes de examen de nitrilo Royal Touch300</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Leica MZ16FA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de huevos, Incubadora rodante Vevitts 120</td><td>Vixest Trading Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol etílico (95%)</td><td>VWR Internacional</td><td>BDH1158-4LP</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Solución de Ficoll (Ficoll?? Paque Plus)</td><td>MilliporeSigma</td><td>GE17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo FITC-CD10</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-46656 FITC</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo FITC-CD4</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-19641 FITC</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Taladro manual (Dremel3000)</td><td>Bosch</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK293T&nbsp;</td><td>ATCC, VA, ESTADOS UNIDOS</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>Hemocitómetro</td><td>VWR internacional, Hausser Scientific</td><td>15170-263</td><td></td></tr><tr><td>Sal de heparina sódica de la mucosa intestinal porcina</td><td>Millipore Sigma</td><td>H3149</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de ensayo heparinizados</td><td>BD Vacutainer&nbsp;</td><td>BD 366480</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamina 3000</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>L3000008</td><td></td></tr><tr><td>Kit de títulos de lentivirus multiplex (kit de títulos de lentivirus qPCR)</td><td>Abm</td><td>LV900</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl (chloride_ de amonio</td><td>Millipore Sigma</td><td>Referencia A9434</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertido Olympus IX71</td><td>Olimpo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo PE-CD19</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-19650 PE</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo PE-CD8</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-1177 PE</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina (10,000 U/mL)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Sigma</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas (volumen ajustable)</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>A1113803</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Cinta adhesiva</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placas estériles de 6 pocillos</td><td>VWR internacional, Corning</td><td>22250-140</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga estériles</td><td>Axygen Inc, Corning</td><td>AXYMCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Matraces de cultivo estériles (75T)</td><td>VWR Internacional</td><td>10062-872</td><td></td></tr><tr><td>Tubos estériles Falcon (15 ml)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Tubos estériles Falcon (50 ml)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Filtro estéril (0,45 &micro; m)</td><td>VWR Internacional</td><td>76778-974</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas estériles</td><td>VWR Internacional</td><td>82027-404</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de vidrio estériles</td><td>VWR internacional</td><td>48300-031</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta estériles</td><td>VWR Internacional</td><td>76322-136, 76322-134, 76322-154</td><td></td></tr><tr><td>Jeringas estériles</td><td>Jeringa BD</td><td>309628?</td><td></td></tr><tr><td>Azul de tripano</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>T10282</td><td></td></tr></tbody></table>

en ovo xenoinjerto de células de leucemia linfoblástica aguda (lla) derivadas de pacientes (pdx-all)

In Ovo Xenografting of Patient-Derived Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) Cells (PDX-ALL)

Para determinar si el injerto de células ALL humanas en embriones de pollo en desarrollo fue exitoso, se amplificaron lentivirus incompetentes para la replicación de2ª generación que transportaban mCherry y se utilizaron para marcar líneas celulares B- y T-ALL, SEM y MOLT316,17, respectivamente. Como se muestra en la Figura 1A, ~ 50% de las células B (dos paneles superiores izquierdos) y T (dos paneles superiores derechos)...

En Ovo Xenoinjerto de células de leucemia linfoblástica aguda (LLA) derivadas de pacientes (PDX-ALL)

This study introduces a rapid, cost-effective, and efficient method for in ovo xenografting of patient-derived acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells, ...

in-ovo-xenografting-patient-derived-acute-lymphoblastic-leukemia-all

Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Este video describe la técnica para crear un modelo de xenoinjerto derivado de un paciente de pez cebra. En el protocolo de muestra, evaluamos la eficacia de los fármacos Gemcitabina y Navitoclax en el modelo de xenoinjerto de tumor pancreático.

Xenoinjerto derivado de paciente de pez cebra (zPDX): un modelo de cáncer

Se describe aquí un método para producir citoquina exógena en ratones de xenoinjerto derivados de pacientes (PDX) mediante inyección intraperitoneal semanal de una línea celular de estroma transducida por citoquinas. Este método amplía la utilidad de PDX y proporciona la opción para el suministro transitorio o sostenido de citoquinas exógenas en una multitud de modelos PDX.

Expresión de citoquina exógena en los xenoinjertos derivados del paciente mediante inyección con una línea de células estromales transducidas por citoquinas

Contorneamos un protocolo para detectar la expresión simultánea de marcadores de células madre de leucemia en las células de la leucemia mieloide aguda primaria por citometría de flujo. Mostramos cómo cuantificar tres poblaciones progenitoras y una supuesta población de LSC con el aumento del grado de maduración. Se confirmó la presencia de estas poblaciones en paciente correspondientes-derivado-xenoinjertos.

Citometría de flujo para estimar las células madre de leucemia la leucemia mieloide aguda primaria y el paciente-derivado-xenoinjertos, diagnóstico y seguimiento hasta

Aquí, presentamos un protocolo para la preparación y la administración estereotáxicas de linfocitos humanos alogénicos en ratones inmunodeficientes con los tumores cerebrales primarios humanos ortotópico. Este estudio proporciona una prueba de concepto para la viabilidad y la eficacia antitumoral de inmunoterapias celulares entregados intrabrain.

Estereotáctica transferencia adoptiva de células inmunes citotóxicas en modelos murinos de xenoinjertos de Glioblastoma Multiforme de Orthotopic humanos

Este protocolo describe los procedimientos de optimización en un modelo de xenoinjerto tumoral doble etiquetado con fluorescencia doble basado en virus utilizando peces cebra larvales como huéspedes. Este modelo heterogéneo de xenoinjerto imita la composición tisular del microambiente del cáncer de páncreas in vivo y sirve como una herramienta más precisa para evaluar las respuestas de los medicamentos en modelos personalizados de xenoinjerto derivado del paciente de pez cebra.

Modelo de xenoinjerto heterogéneo derivado del paciente del cáncer de páncreas utilizando larvas de pez cebra como anfitriones para la evaluación comparativa de fármacos

Describimos una célula mononuclear de sangre periférica humana (PBMC), modelo de ratón xenoinjerto humanizado basado para la investigación traslacional de inmunooncología. Este protocolo podría servir como una guía general para establecer y caracterizar modelos similares para la evaluación de la terapia I-O.

Un modelo de xenoinjerto humanizado de sangre periférica humana (PBMC) para la investigación de inmunooncología traslacional (I-O)

Aquí presentamos un protocolo para probar la eficacia de las terapias dirigidas seleccionadas en base a la composición genómica de un tumor. El protocolo describe la identificación y validación de reordenamientos estructurales del ADN, injerto de tumores de los pacientes en ratones y pruebas de respuestas a los fármacos correspondientes.

Pruebas de terapias dirigidas en cáncer mediante análisis de alteración estructural del ADN y xenoinjertos derivados del paciente

Aquí, describimos un protocolo en el que se utiliza un modelo de xenoinjerto derivado de pacientes con leucemia linfoblástica aguda como estrategia para evaluar y monitorear las toxicidades asociadas a las células T del receptor de antígeno quimérico dirigido a CD19.

Evaluación de los efectos tóxicos asociados a las células T del receptor de antígeno quimérico mediante un modelo de ratón de xenoinjerto derivado de pacientes con leucemia linfoblástica aguda

Este protocolo proporciona instrucciones paso a paso para generar y solucionar problemas de xenoinjertos de leucemia linfoblástica aguda (LLA) humana a partir de líneas celulares y material fresco del paciente en embriones de pez cebra inmunosuprimidos transitoriamente, junto con pautas para la evaluación de la respuesta a los medicamentos mediante citometría de flujo. La tubería experimental también se puede adaptar para tumores sólidos.

Predicción rápida de la respuesta a fármacos in vivo mediante injertos de células de leucemia en embriones de pez cebra

Este protocolo describe un método eficiente y no quirúrgico para la implantación ortotópica de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de mama en ratones. La técnica consiste en la disociación enzimática del tumor seguida de una inyección directa en las almohadillas de grasa mamaria, lo que permite una implantación de alto rendimiento. La validación exhaustiva garantiza la fidelidad del modelo, lo que facilita estudios rigurosos en varios subtipos de cáncer de mama.

Disociación de alto rendimiento e implantación ortotópica de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de mama

Aquí, se describe un método basado en citometría de fosfoflujo para analizar la señalización aguas abajo de las vías mTORC1, JAK/STAT5 y MAPK en células de leucemia mieloide humana aguda xenoinjertadas en ratones y obtenidas de aspirados de médula ósea. Los niveles de p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 y p-ERK1/2 se miden simultáneamente utilizando un citómetro de flujo espectral de última generación con alta sensibilidad.

Citometría de fosfoflujo intracelular de xenotrasplantes derivados de pacientes con leucemia mieloide aguda

Aprende a establecer xenoinjertos in ovo de células de leucemia linfoblástica aguda derivadas de pacientes. Este método rápido permite evaluar respuestas a fármacos y estudios mecanicistas en biología del cáncer.

En Ovo Xenoinjerto de células de leucemia linfoblástica aguda (LLA) derivadas de pacientes (PDX-ALL)

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