Name: Establecimiento de modelos in vitro del cultivo de ganglios de la raíz dorsal: enfoques complementarios para investigar la diafonía entre el cáncer y los nervios (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T16:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: Aprenda a establecer cultivos 3D y 2D de ganglios de la raíz dorsal en ratón para investigar la migración guiada por nervios en cáncer. Este protocolo reduce el uso animal y permite obtener datos tisulares y de célula única.

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</ol>

<table><tbody><tr><td><Herramientas>Fuerte</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70 &micro; m Filtro de células</td><td>Progene</td><td>71-229483-ULT</td><td>Se utiliza para filtrar la suspensión celular</td></tr><tr><td>Portaobjetos con fondo de vidrio de 8 pocillos</td><td>IBidi, Múnich, Alemania</td><td>80807</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 - Pinzas Finas</td><td>Herramientas de ciencia fina, Foster City, EE. UU.</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Dumont #5</td><td>Herramientas de ciencia fina, Foster City, EE. UU.</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tijeras finas</td><td>Herramientas de ciencia fina, Foster City, EE. UU.</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de patrón</td><td>Herramientas de ciencia fina, Foster City, EE. UU.</td><td>91121-12</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte</td><td>Herramientas de ciencia fina, Foster City, EE. UU.</td><td>91500-09</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Reactivos</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x solución salina tamponada con fosfato</td><td>Sigma, St. Louis, Estados Unidos</td><td>D8662-500ML</td><td>Se utiliza para disolver enzimas</td></tr><tr><td>Suplemento B-27 (50x)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>17504044</td><td>Se utiliza a una concentración del 2% en medios F12</td></tr><tr><td>Colágeno bovino tipo I</td><td>Corning Incorporated, Nueva York, EE. UU.</td><td>354231</td><td>Utilizado para recubrir placas, solución de trabajo 50 y micro; g/ml en HCl 0,01 M</td></tr><tr><td>Colgenasa tipo IV</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Estados Unidos</td><td>C4-BIOC</td><td>Disolver en PBS a 1,25 mg/ml, alícuota, almacenar a -20 ° C</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche, Basilea, Suiza</td><td>4942078001</td><td>Disolver en PBS a 2,5 mg/ml, alícuota, almacenar a -20 &grados; C</td></tr><tr><td>ADNasa I</td><td>Roche, Basilea, Suiza.</td><td>11284932001</td><td>Añadido a la concentración final de&nbsp; 0,2 mg/ml durante la disociación</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Estados Unidos</td><td>F1051</td><td>Se utiliza a una concentración del 10% en medios F12</td></tr><tr><td>HBSS (Solución salina equilibrada de Hank)</td><td>Sigma, St. Louis, Estados Unidos</td><td>H6648-500ML</td><td>Preparado con penicilina-estreptomicina al 1%</td></tr><tr><td>Factor de crecimiento de Matrigel reducido</td><td>Corning Incorporated, Nueva York, EE. UU.</td><td>356231</td><td>Descongelar a 4 ° C durante la noche, mantener en hielo</td></tr><tr><td>Mezcla de nutrientes F-12 Jamón</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Estados Unidos</td><td>N6658-500ML</td><td>Medio basal para la preparación de medios de cultivo suplementados</td></tr><tr><td>Papaína</td><td>Roche, Basilea, Suiza.</td><td>10108014001</td><td>Disolver en PBS a 30 U/mL, alícuota, almacenar a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (100x)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Estados Unidos</td><td>P4333-100ML</td><td>Se utiliza a una concentración del 1% en los medios</td></tr><tr><td>Solución azul de tripano</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Estados Unidos</td><td>T8154-100ML</td><td>Para evaluar la viabilidad celular</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>12605-028</td><td>Para recolectar células cancerosas</td></tr><tr><td><fuerte>Anticuerpos</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-anticuerpo de tubulina III</td><td>Abcam (Cambridge, Reino Unido)</td><td>AB15568</td><td>Dilución 1:200</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>A-11008</td><td>Dilución 1:2000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>A-21442</td><td>Dilución 1:2000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>A-21245</td><td>Dilución 1:2000</td></tr><tr><td>Anticuerpo NeuN</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Estados Unidos</td><td>MAB377</td><td>Dilución 1:100</td></tr><tr><td><fuerte>Tintes fluorescentes y Sondas</fuertes></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ActinGreen 488 Reactivo ReadyProbes (faloidina)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>Referencia R37110</td><td>Dilución 1:40</td></tr><tr><td>CellTrace Calceína Rojo-Naranja</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>C34851</td><td>Rastreador celular utilizado para visualizar neuronas bajo microscopio de fluorescencia</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.</td><td>H3570</td><td>Dilución 1:5000</td></tr></tbody></table>

establecimiento de modelos in vitro del cultivo de ganglios de la raíz dorsal: enfoques complementarios para investigar la diafonía entre el cáncer y los nervios

Establishing In Vitro Models of Dorsal Root Ganglia Culture: Complementary Approaches for Investigating Cancer-Nerve Crosstalk

Nuestro protocolo describe el aislamiento de células primarias derivadas de DRG de ratón y el establecimiento de dos modelos de cultivo complementarios: DRG disociado y cultivos de DRG montados enteros, que nos permiten investigar las interacciones entre células nerviosas y cancerosas a diferentes niveles de complejidad. Una ventaja clave de este protocolo es que ambos tipos de cultivo se pueden generar utilizando DRG aislados del mismo animal, lo que minimiza la variabilidad interanimal ...

Establecimiento de modelos in vitro del cultivo de ganglios de la raíz dorsal: enfoques complementarios para investigar la diafonía entre el cáncer y los nervios

The contribution of the nervous system to the tumor microenvironment and the importance of neural invasion as a route for cancer dissemination are being ...

establishing-vitro-models-dorsal-root-ganglia-culture-complementary

Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

En este video, demostramos el procedimiento para desarrollar un modelo de invasión de células de cáncer perineural in vitro mediante el cultivo conjunto de células de cáncer neurotrópico y ganglios de raíz dorsal de ratón. El modelo se puede utilizar para realizar ensayos de cáncer, produciendo resultados rápidos y reproducibles.

Establecimiento de un modelo de cocultivo tridimensional de ganglios de raíz dorsal murina y células cancerosas: un modelo in vitro para estudiar la invasión de células cancerosas perineurales

En este video, demostramos un método in vitro para el co-cultivo de DRG y células cancerosas para estudiar el neurotropismo y la invasión neuronal.

Modelado de la invasión neuronal cancerosa in vitro: un método para el cocultivo de ganglios de la raíz dorsal y células cancerosas

Los astrocitos fenotípicamente salvajes y las células madre neurales recolectadas de ratones modificados con alelos oncogénicos condicionales floxados y transformados a través de la recombinación mediada por Cre viral se pueden utilizar para modelar la patogénesis del astrocitoma in vitro e in vivo mediante la inyección ortotópica de células transformadas en cerebros de compañeros de camada singénicos e inmunocompetentes.

Modelado astrocitoma Patogénesis In Vitro Y En Vivo Uso cortical astrocitos o células troncales nerviosas de ratones condicionales, Genéticamente Manipulados

Modelos de cultivo celular proporcionan un control detallado de las condiciones ambientales y por lo tanto constituyen una plataforma poderosa para dilucidar numerosos aspectos de la biología de las células neuronales. Se describe un método rápido, barato y fiable para aislar, disociar, y la cultura neuronas sensoriales de los embriones de pollo. También se proporcionan detalles de la preparación de sustratos y inmunocitoquímica.

Aislamiento y cultivo de neuronas sensoriales disociadas De embriones de pollo

Ganglios de la raíz dorsal (DRG) son estructuras que contienen las neuronas sensoriales del sistema nervioso periférico. Cuando disociado, pueden ser co-cultivadas con células madre-SC como derivadas de tejido adiposo (ASC), que proporciona un valioso modelo para estudiar la regeneración in vitro en los nervios y la mielinización, imitando el entorno en vivo en el sitio de la lesión.

Ganglios de raíz dorsal neuronas y las células madre derivadas de la adiposa diferenciada: Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-cultivo modelo para estudiar la regeneración de los nervios periféricos

Este artículo de video muestra el uso del modelo de ganglios de la raíz dorsal (DRG)/células cancerosas en el adenocarcinoma ductal pancreático.

En Vitro Modelado de canceroso Neural Invasion: Modelo del ganglio de la raíz dorsal

La invasión perineuronal es un fenotipo agresivo para carcinomas de células escamosas de cabeza y cuello y otros tumores. El modelo de membrana corioalantoica de polluelos se ha utilizado para estudiar angiogénesis, invasión de cáncer, y metástasis. Aquí demostramos cómo este modelo se puede utilizar para evaluar la invasión perineural in vivo.

El modelo Chick Chorioalantoic Membrane In Vivo para evaluar la invasión perineural en el cáncer de cabeza y cuello

En el sistema de cocultivo de los ganglios de la raíz dorsal y las células de Schwann, se puede estudiar la mielinización del sistema nervioso periférico. Este modelo proporciona oportunidades experimentales para observar y cuantificar la mielinización periférica y estudiar los efectos de compuestos de interés en la vaina de mielina.

Mielinización in vitro de axones periféricos en un cocultivo de explantes de ganglio de raíz dorsal de rata y células de Schwann

Hemos desarrollado una metodología para evaluar si las neoplasias del sistema nervioso en ratones modificados genéticamente recapitulan con precisión la patología de sus homólogos humanos. Aquí, aplicamos estas técnicas histológicas, criterios patológicos definidos y metodologías de cultivo a neurofibromas y tumores malignos de la vaina de los nervios periféricos que surgen en el modelo de ratón P 0-GGFβ3.

Identificación, diagnóstico y clasificación de tumores malignos de la vaina de los nervios periféricos en modelos de ratón modificados genéticamente

Este protocolo proporciona una técnica para cosechar y cultivar ganglios de raíz dorsal explantados (DRG) de ratas Sprague Dawley adultas en un dispositivo multicompartimento (MC).

Cosecha, incrustación y cultivo de ganglios de la raíz dorsal en dispositivos multicompartimentales para estudiar las características neuronales periféricas

Aprenda a establecer cultivos 3D y 2D de ganglios de la raíz dorsal en ratón para investigar la migración guiada por nervios en cáncer. Este protocolo reduce el uso animal y permite obtener datos tisulares y de célula única.

Establecimiento de modelos in vitro del cultivo de ganglios de la raíz dorsal: enfoques complementarios para investigar la diafonía entre el cáncer y los nervios (Video) | JoVE Journal

Establecimiento de modelos in vitro del cultivo de ganglios de la raíz dorsal: enfoques complementarios para investigar la diafonía entre el cáncer y los nervios

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