Name: Tomografía de microscopía electrónica de transmisión de barrido en virología: imágenes 3D de muestras congeladas a alta presión y sustituidas por congelación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Aprende tomografía STEM en virología para visualizar cambios celulares en 3D usando congelación a alta presión y sustitución por congelación. Este protocolo mejora la imagen de células infectadas por virus.

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<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Struct Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
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<li>Tonnemacher, S., Folly-Klan, M., Gazi, A. D., Schaefer, S., Pénard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccinia+virus+H7-protein+is+required+for+the+organization+of+the+viral+scaffold+protein+into+hexamers%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Vaccinia virus H7-protein is required for the organization of the viral scaffold protein into hexamers.</a> Sci Rep. 12 (1), 13007(2022).</li>
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<li>Hackstadt, T., Chiramel, A. I., Hoyt, F. H., Williamson, B. N., Dooley, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+Golgi+apparatus+and+contribution+of+the+endoplasmic+reticulum+to+the+SARS-CoV-2+replication+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Disruption of the Golgi apparatus and contribution of the endoplasmic reticulum to the SARS-CoV-2 replication complex.</a> Viruses. 13 (9), 1798(2021).</li>
<li>Horstmann, H., Körber, C., Sätzler, K., Aydin, D., Kuner, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+section+scanning+electron+microscopy+%28S3EM%29+on+silicon+wafers+for+ultra-structural+volume+imaging+of+cells+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Serial section scanning electron microscopy (S3EM) on silicon wafers for ultra-structural volume imaging of cells and tissues.</a> PLoS ONE. 7 (4), e35172(2012).</li>
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<li>Höög, J. L., Schwartz, C., Noon, A. T., O'Toole, E. T., Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+interphase+microtubules+in+fission+yeast+analyzed+by+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Organization of interphase microtubules in fission yeast analyzed by electron tomography.</a> Dev Cell. 12 (3), 349-361 (2007).</li>
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<li>Snijder, E. J., Limpens, R. W. A. L., de Wilde, A. H., de Jong, A. W. M., Zevenhoven-Dobbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unifying+structural+and+functional+model+of+the+coronavirus+replication+organelle%3A+tracking+down+RNA+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Biol%22%5BJournal%5D)">A unifying structural and functional model of the coronavirus replication organelle: tracking down RNA synthesis.</a> PloS Biol. 18 (6), e3000715(2020).</li>
<li>Welsch, S., Miller, S., Romero-Brey, I., Merz, A., Bleck, C. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+and+three-dimensional+architecture+of+the+dengue+virus+replication+and+assembly+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Composition and three-dimensional architecture of the dengue virus replication and assembly sites.</a> Cell Host Microbe. 5 (4), 365-375 (2009).</li>
<li>Cortese, M., Goellner, S., Acosta, E. G., Neufeldt, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+characterization+of+Zika+virus+replication+factories%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural characterization of Zika virus replication factories.</a> Cell Rep. 18 (9), 2113-2123 (2017).</li>
<li>Milrot, E., Lazar, S., Schuster, O., Makdasi, E., Schmaya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+from+the+infection+cycle+of+VSV-%CE%94G-spike+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Insights from the infection cycle of VSV-ΔG-spike virus.</a> Viruses. 14 (12), 2828(2022).</li>
<li>Schauflinger, M., Bergner, T., Neusser, G., Kranz, C., Read, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+permanganate+is+an+excellent+alternative+to+osmium+tetroxide+in+freeze-substitution%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Potassium permanganate is an excellent alternative to osmium tetroxide in freeze-substitution.</a> Histochem Cell Biol. 157 (4), 481-489 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Hexadeceno</td><td>Merck KGaA</td><td>8220640500</td><td></td></tr><tr><td>200 rejillas de cobre con barras paralelas</td><td>Plano GmbH</td><td>G2014C</td><td></td></tr><tr><td>37 & deg; Cámara de secado en C</td><td>Binder GmbH</td><td>9010-0323</td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td>VWR international GmbH</td><td>20066330</td><td></td></tr><tr><td>DDSA</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>13710</td><td></td></tr><tr><td>Cuchillo de diamante</td><td>Diatome Ltd</td><td>https://www.diatomeknives.com/ultra-35</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Embed-812 Resina</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>Herramientas EM</td><td>TVIPS GmbH</td><td>Software TVIPS: EM-Tools; https://www.tvips.com/imaging-software/em-tools/</td><td></td></tr><tr><td>Etanol al 100%</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00983.2511</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro</td><td>VWR international GmbH</td><td>516-0812</td><td></td></tr><tr><td>Flaschen mit Schnappdeckelglas 11 mL</td><td>VWR international GmbH</td><td>548-0625</td><td></td></tr><tr><td>Formvar</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>15830-25</td><td></td></tr><tr><td>Unidad de sustitución por congelación Leica EM AFS2</td><td>Leica Microsystems GmbH</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/sample-preparation-for-electron-microscopy/p/leica-em-afs2/</td><td></td></tr><tr><td>Glod Sol 25 nm</td><td>Reactivos y Reactivos de Oro de AURION Immuno Accesorios</td><td>425.011</td><td></td></tr><tr><td>Oro de pino y oslash; 2000 y MU; m</td><td>Science Services GmbH</td><td>GA2000-Au</td><td></td></tr><tr><td>Graiticules Buchstaben-Netzchen Kupfer</td><td>Plano GmbH</td><td>NH6C</td><td></td></tr><tr><td>Placa calefactora</td><td>MEDAX GmbH & Co. KG</td><td>12501</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de vaporización de alto vacío BAF 300</td><td>BAL-TEC AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Congelador de alta presión Wohlwend HPF Compact 01</td><td>Oficina de Ingeniería M. Wohlwend GmbH</td><td>https://www.wohlwend-hpf.ch/index.html</td><td></td></tr><tr><td>Tanque de nitrógeno líquido</td><td>H.Erben GmbH</td><td>94500</td><td></td></tr><tr><td>Nitrógeno (fluido)</td><td>VWR international GmbH</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>NMA</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>19000</td><td></td></tr><tr><td>Tetróxido de osmio</td><td>ChemPur Feinchemikalien und Forschungsbedarf GmbH</td><td>006051</td><td></td></tr><tr><td>Horno a 120 °C; C</td><td>Binder GmbH</td><td>9010-0194</td><td></td></tr><tr><td>PELCO easi-Glow</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>91000</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lisin 0,1% en q/v. Solución</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>18026</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de bloqueo seguro 0,5 mL</td><td>Eppendorf SE</td><td>0030 121.023</td><td></td></tr><tr><td>Recipientes de muestra (cápsulas Beem)</td><td>Plano GmbH</td><td>G360-1</td><td></td></tr><tr><td>Diámetro del disco de zafiro 3 x 0,16 mm</td><td>Oficina de Ingeniería M. Wohlwend GmbH</td><td>500</td><td></td></tr><tr><td>Ultramicrotomo Leica EM UC7</td><td>Leica Microsystems GmbH</td><td>https://www.leica-microsystems.com/de/produkte/em-probenvorbereitung/p/leica-em-uc7/</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de uranilo</td><td>Riedel de Ha&euml; n AG</td><td>31697</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de luz ultravioleta</td><td>Dinies</td><td>ELG100S</td><td></td></tr></tbody></table>

tomografía de microscopía electrónica de transmisión de barrido en virología: imágenes 3d de muestras congeladas a alta presión y sustituidas por congelación

Scanning Transmission Electron Microscopy Tomography in Virology: 3D Imaging of High-pressure Frozen, Freeze-substituted Samples

Tomografía de microscopía electrónica de transmisión de barrido en virología: imágenes 3D de muestras congeladas a alta presión y sustituidas por congelación

Electron microscopy (EM) and especially three-dimensional (3D) EM techniques have become established methods in structural virology. Investigation of ...

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Investigación

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Medicine

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El protocolo describe un método de alto rendimiento para la determinación de estructuras de proteínas de membrana con la crio-tomografía electrónica y procesamiento de imágenes 3D. Que cubre los detalles de la preparación de muestras, la recopilación de datos, procesamiento e interpretación de datos, y concluye con la producción de un objetivo representante para la aproximación, la pandemia del VIH-1 glicoproteína de la envoltura. Estos procedimientos de cálculo han sido diseñados de una manera...

Determinación de estructuras moleculares de glicoproteínas de la envoltura del VIH con Cryo-tomografía electrónica y automatizada promedio Sub-tomografía

Se describe un método de microscopía correlativa que combina alta velocidad de microscopía de luz fluorescente de células vivas 3D y la crio-tomografía electrónica de alta resolución. Se demuestra la capacidad del método correlativo por imágenes dinámicas, pequeñas partículas de VIH-1 que interactúan con las células HeLa de acogida.

Microscopía correlativa para el análisis estructural en 3D de Interacciones Dinámicas

Se presenta un protocolo de cómo recoger y electrones proceso de crio-tomografías de toda la mitocondria. La técnica ofrece una detallada comprensión de la estructura, función y organización de grandes complejos de proteínas de membrana en membranas biológicas nativas.

La visualización de la ATP sintasa dímeros en mitocondrias por Electron Cryo-tomografía

La unión de viriones a una superficie es un requisito para la obtención de imágenes de viriones individuales mediante imágenes de fluorescencia de súper resolución o microscopía de fuerza atómica (AFM). Aquí se demuestra un método de preparación de la muestra para la adhesión controlada de viriones a las superficies de vidrio adecuado para su uso en AFM y super-resolución de imágenes de fluorescencia.

Preparación de muestras para microscopía de fuerza atómica de virión único e imágenes de fluorescencia de súper resolución

Este informe describe un protocolo de preparación de muestras y condiciones de imagen específicas para realizar tomografía electrónica de transmisión de barrido de muestras biológicas gruesas.

Preparación y observación de muestras biológicas mediante el escaneo de grueso Electrónica de Transmisión de Positrones

Este protocolo describe cómo visualizar la compactación de ADN transitoria en cianobacterias. Cultivo sincrónico, monitoreo por microscopía de fluorescencia, congelación rápida y alta tomography del cryo-electrón de voltaje se utilizan. Se presenta un protocolo para estas metodologías, y se discuten avances y futuras aplicaciones.

Visualización de compactación del ADN en cianobacterias por Tomography del Cryo-electrón de alta tensión

Aquí, se presenta un protocolo que describe los pasos de preparación de la muestra y recolección de datos requeridos en la tomografía de rayos X criobla (SXT) para obtener imágenes de la ultraestructura de células crioconservadas enteras a una resolución de medio paso de 25 nm.

Una descripción cartográfica 3D de la célula mediante tomografía de rayos X cryo soft

Presentamos un protocolo para la preparación de láminas de especímenes biológicos congelados por inmersión mediante micromecanizado de haz de iones crioenfocado para estudios estructurales de alta resolución de macromoléculas in situ con tomografía crio-electrónica. El protocolo presentado proporciona pautas para la preparación de láminas de alta calidad con alta reproducibilidad para la caracterización estructural de macromoléculas dentro de las Saccharomyces cerevisiae.

Preparación y micromecanizado Crio-FIB de Saccharomyces cerevisiae para Crio-Tomografía Electrónica

Aquí se describen los protocolos para preparar conjuntos de virus adecuados para el análisis de EM líquido y crio-EM a nanoescala utilizando microscopía electrónica de transmisión.

Avance de imágenes de alta resolución de ensamblajes de virus en líquido y hielo

La tomografía crio-STEM proporciona un medio para visualizar orgánulos de células intactas sin incrustación, seccionamiento u otras preparaciones invasivas. La resolución 3D obtenida se encuentra actualmente en el rango de unos pocos nanómetros, con un campo de visión de varios micrómetros y un espesor accesible del orden de 1 μm.

Visualización de orgánulos in situ mediante tomografía crio-STEM

Aprende tomografía STEM en virología para visualizar cambios celulares en 3D usando congelación a alta presión y sustitución por congelación. Este protocolo mejora la imagen de células infectadas por virus.

Tomografía de microscopía electrónica de transmisión de barrido en virología: imágenes 3D de muestras congeladas a alta presión y sustituidas por congelación (Video) | JoVE Journal

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