Procedimiento sencillo y eficaz para la hemostasis en arterias de ratón

Esta investigación desarrolla un método para sellar las punciones arteriales mientras se preserva el flujo sanguíneo. Investiga si el vendaje de grasa previene la isquemia tras una punción arterial. Un desafío experimental clave en este procedimiento es lograr una hemostasia efectiva tras la punción arterial sin causar oclusión arterial.

Para empezar, coloca al ratón anestesiado sobre la camilla quirúrgica. Tras confirmar la anestesia, retirar el vello de las regiones cervical y craneal utilizando un depilador. Desinfecta la piel expuesta con yodo de povidona, seguido de etanol al 75% para eliminar cualquier residuo.

Coloca el ratón sobre una almohadilla térmica ajustada a 37 grados Celsius y mantenlo así durante todo el proceso experimental. Recoloca el ratón en posición supina sobre la almohadilla térmica. Tras realizar una incisión cervical media, extirpe un injerto subcutáneo de tejido adiposo subcutáneo de tres por tres por un milímetro para uso futuro.

Realizar una disección contundente de la glándula submandibular, el músculo hioides esternal y el músculo esternocleidomastoideo para exponer ambas arterias carótidas comunes. Luego libera cuidadosamente la arteria carótida común para exponer las arterias carótidas interna y externa. Coloca la pinza vascular uno en el extremo distal de la arteria carótida común y luego coloca la pinza vascular dos en el extremo proximal de la arteria.

A continuación, perfora la arteria carótida común entre las dos pinzas usando una aguja calibre 23. Después de retirar la aguja, envuelva la arteria carótida común en el lugar de la punción utilizando la superficie cortada o el lado no serosa de la almohadilla grasa previamente extraída. Coloca una sutura 4-0 debajo de la arteria envuelta en grasa.

Ata suavemente una sola pasada sobre la superficie grasa para aplicar presión y asegurar el contacto entre la almohadilla grasa y la pared del vaso. Luego ajusta la ligadura gradualmente para equilibrar la presión y lograr la hemostasia. Eleva la arteria carótida común distal usando un hisopo de algodón humedecido.

Libera la pinza vascular uno y retira lentamente el hisopo para permitir un retorno gradual del flujo sanguíneo hacia el lugar de la punción. Ahora, comprueba el flujo sanguíneo en el lugar de la punción. Si se observa sangrado activo, se vuelve a aplicar una pinza vascular en la arteria carótida común distal.

Después de un minuto, libera lentamente la pinza vascular uno. Si el sangrado persiste, reposiciona la almohadilla grasa o aprieta ligeramente la ligadura para aumentar la presión hasta lograr la hemostasia completa. Eleva la arteria carótida común proximal usando un hisopo de algodón humedecido.

A continuación, libera la pinza vascular dos y retira lentamente el hisopo para permitir un flujo sanguíneo controlado hacia el lugar de la punción. Si se produce sangrado, reaplica la pinza vascular dos en la arteria carótida común distal. Ahora, aprieta ligeramente el único movimiento de la sutura para aumentar la presión y espera un minuto.

Luego eleva la arteria carótida común proximal y libera la pinza vascular dos rodando lentamente el hisopo húmedo hacia el lugar de la punción. Añade otro lanzamiento usando la misma sutura para formar un doble nudo sobre el lanzamiento inicial, mejorando la fijación de la almohadilla grasa y promoviendo una hemostasia equilibrada. Confirma que las arterias carótidas comunes a ambos lados de la almohadilla grasa están rellenas y mantienen un diámetro constante del vaso, lo que indica una restauración exitosa del flujo sanguíneo.

Finalmente, sutura la incisión cervical y aplica un antiséptico en la zona de la herida. Las imágenes de contraste de speckle con láser antes y después de la operación y las mediciones de unidades de perfusión tanto en ratones simulados como operados no mostraron cambios significativos, lo que confirmó que el flujo sanguíneo cerebral no se vio comprometido por la técnica de hemostasia arterial. El examen histológico del tejido cerebral mediante tinción de hematoxilina y eosina a los siete, 14 y 28 días postoperatorios en ratones operados y en ratones simulados mostró arquitectura tisular intacta en la corteza, hipocampo y tálamo sin cambios patológicos.

La tinción de Nissl mostró alineación neuronal organizada, estructura celular normal y cuerpos de Nissl preservados en todos los grupos y puntos temporales, indicando que no hay daño estructural debido al cierre arterial. El método actual tiene como objetivo sellar el lugar de la punción tras el procedimiento, manteniendo el flujo sanguíneo normal, evitando así la isquemia postoperatoria.