Mapeo espacial mejorado de capas musculares gástricas de ratón utilizando una técnica modificada de Swiss Roll

Nuestra investigación se centra en mejorar la forma en que preparamos y analizamos el estómago leve para la imagen. Hemos adaptado la Técnica Swiss Roll, desarrollada originalmente para el intestino murino, de modo que todas las principales regiones gástricas, incluyendo el fondo de ojo, el corpus y el antro, puedan integrarse juntas en una sola sección criogénica. Esto nos permite visualizar la estructura del estómago y la composición celular lado a lado, manteniendo una orientación espacial precisa y una alta calidad de imagen.

El estómago es un órgano complejo con tejidos delicados. Pequeños errores pueden dañar las células o distorsionar la disposición, lo que hace que la imagen de alta resolución y la tinción inmunológica sean inconsistentes. Nuestra técnica Swiss Roll soluciona esto manteniendo todas las regiones, incluido el duodeno y el esófago, intactas en un solo bloque criogénico, haciendo los experimentos más fiables y reproducibles.

Para empezar, utiliza tijeras para cortar a lo largo del mesenterio ventral del duodeno y el estómago hasta el alfiler en el corpus. Con una pipeta de transferencia llena de PBS, elimina cualquier alimento residual de la luz gástrica. Estira suavemente el abdomen abierto para conseguir una orientación plana.

Vuelve a sujetar el pañuelo plano tras la breve fijación. Con tijeras, recorta el abdomen a lo largo del contorno discontinuo para crear una forma uniforme adecuada para enrollar. Coloca el tejido gástrico recortado sobre papel filtro humedecido con PBS.

Enrolla el pañuelo en una configuración de rollo suizo y asegura que se inserte un palillo por el centro. Una vez enrollado, inserta una aguja de calibre 30 para asegurar su forma. Luego dobla la aguja en un ángulo de 90 grados para estabilizar el estómago enrollado.

Fija el tejido enrollado en paraformaldehído al 4% a cuatro grados Celsius durante seis horas. Luego retira suavemente la aguja estabilizadora. Incrusta el tejido en un compuesto a temperatura óptima de corte utilizando moldes base desechables.

Luego congela el moho sobre hielo seco. Una vez completamente congelado, guarda el moho a menos 80 grados Celsius. El nuevo método permitió incluir el fondo de ojos, el corpus, el antro, una parte del esófago y el duodeno dentro de una única sección murina de rollo suizo gástrico.

La tinción de hematoxilina y eosina del rollo suizo gástrico reveló una arquitectura bien conservada en el fondo de ojos, corpus, antro, esófago y duodeno, con capas claramente visibles de mucosa, submucosa y muscular. La tinción inmunofluorescente mostró expresión de KIT y ANO1 en células intersticiales de Cajal y expresión de beta tubulina tres en neuronas entéricas, confirmando la preservación celular en el rollo suizo gástrico. La expresión de KIT también se detectó en células paneth y goblet en la mucosa gástrica, mientras que ANO1 se expresó fuertemente en células epiteliales columnares fundas.

Se observó la expresión de beta tubulina 3 en células secretoras gástricas, endocrinas y de mucosidad, además de neuronas entéricas. La tinción con cadena pesada de miosina 11 confirmó la presencia de células musculares lisas y miofibroblastos en la mucosa gástrica, mientras que la tinción con E-cadherina mostró células epiteliales y la tinción KIT marcó nuevamente las células intersticiales de Cajal. La técnica de la carretera suiza puede avanzar en la investigación sobre cambios específicos de región en el tejido gástrico.

A diferencia de los métodos tradicionales que integran la región por separado, la Técnica Suiza procesa todas las regiones gástricas bajo condiciones idénticas, ahorrando tanto tiempo como reactivos. Esto lo convierte en una plataforma práctica y escalable para el análisis integral del tejido gástrico tanto en salud como en enfermedad.