Name: Mapeo espacial mejorado de capas musculares gástricas de ratón utilizando una técnica modificada de Swiss Roll (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: Aprende a visualizar la estructura gástrica completa en ratón mediante la técnica Swiss Roll modificada. Este método permite analizar todas las regiones del estómago en una sola sección con inmunofluorescencia de alta calidad.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>#5SF Pinzas</td><td>HERRAMIENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>albúmina sérica bovina &nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Fuente de luz LED ColdVision MC-LS</td><td>SCHOTT</td><td>MC-LS</td><td></td></tr><tr><td>Confocal software&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>Software de imagen Nikon NIS-Elements</td><td></td></tr><tr><td>Crioseal XYL</td><td>Epredida</td><td>9312-4</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol, dilactato)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Platos de disección, grandes</td><td>Sistemas Vivos&nbsp; Instrumentación</td><td>SKU: DD-90</td><td></td></tr><tr><td>Anti-cabra para burros AF647 pAb</td><td>Tecnologías de la vida</td><td>A21447</td><td>Lote: 1739289 RRID:AB_2535864</td></tr><tr><td>Anti-ratón Donkey AF555 pAb</td><td>Tecnologías de la vida</td><td>A31570</td><td>Lote: 1774719 RRID:AB_2536180</td></tr><tr><td>Anti-conejo Donkey AF488 pAb</td><td>Tecnologías de la vida</td><td>A21206</td><td>Lote: 2668665 RRID:AB_2535792</td></tr><tr><td>E-cadharina (dilución 1:400)</td><td>BD Biociencias</td><td>610181</td><td>lote: 25510 RRID:AB_397580</td></tr><tr><td>Eosina</td><td>ELITechGroup</td><td>$SS-071C</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas recubiertas de epoxi</td><td>HERRAMIENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>11210-10</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>459828-4L</td><td></td></tr><tr><td>TUBO FLEXIBLE 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td></td></tr><tr><td>Esponjas de gasa</td><td>Fisherscientific</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras finas endurecidas</td><td>HERRAMIENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Epredia</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>KIT (0.2 & micro; g/mL; dilución 1:1000)</td><td>R& Sistemas D</td><td>AF1356</td><td>Lote: IEO0217101 RRID: AB_354750</td></tr><tr><td>SPRAY DE SOLUCIÓN DE LENTES DE 1 OZ</td><td>Nikon</td><td>77013066</td><td></td></tr><tr><td>Vidrio de la cubierta del microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541016</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio</td><td>CardinalHealth</td><td>M6133A</td><td></td></tr><tr><td>Minutien Pins</td><td>HERRAMIENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>MYH11 (dilución 1:400)</td><td>Tecnologías Biomédicas</td><td>BT-562</td><td>RRID:AB_10013421</td></tr><tr><td>Esmalte de uñas</td><td>COLORES PECAMINOSOS</td><td>7.33855E+11</td><td></td></tr><tr><td>Aguja 30 g x 1/2 pulgada. &nbsp;</td><td>BD Biociencias</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Hojas de filo simple Personna</td><td>La Compañía de Cuchillas de Rasurar</td><td>76247-652</td><td></td></tr><tr><td>Solución de bloqueo IgG para ratón con ratón ReadyProbes (30x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R37621</td><td>Lote: 3226230</td></tr><tr><td>Montaje antifundido de diamante SlowFade (Soporte de montaje)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S36972</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de tinción de 10 láminas StainTray</td><td>Simport Scientific</td><td>M918-2</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico 0,8x-5x</td><td>Nikon</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S9378-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Superficie-Amps X-100 (Triton X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28314</td><td></td></tr><tr><td>TMEM16A (ANO1: dilución 1:400)</td><td>Abcam</td><td>ab53212&nbsp;</td><td>Parcela: GP3295656-1 RRID: AB_883075</td></tr><tr><td>Pipeta de transferencia</td><td>Halcón</td><td>357575</td><td></td></tr><tr><td>TUBB3 (dilución 1:400)</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>4466</td><td>Parcela: 5 RRID: AB_1904176</td></tr><tr><td>Xilenos&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P-1GAL</td><td>MUCHO 206238</td></tr></tbody></table>

mapeo espacial mejorado de capas musculares gástricas de ratón utilizando una técnica modificada de swiss roll

Enhanced Spatial Mapping of Mouse Gastric Muscle Layers Using a Modified Swiss Roll Technique

Utilizando el nuevo método, los rollos suizos gástricos murinos incluyeron las tres regiones principales del estómago: fundo, corpus y antro, junto con una pequeña porción del esófago y el duodeno en una sola sección. Incluir todo el estómago en una sola sección permite un análisis regional exhaustivo (Figura 1). La tinción por hematoxilina y eosina (H&amp;E) de imágenes completas de los rollos suizos del estómago demostró una arquitectura gástrica bien conservada en todas las regiones, permitiendo una visualización clara de las capas mucosa, submucosa y muscular (Figura 3). La Figura 4 muestra una tinción inmunofluorescente representativa de células intersticiales de Cajal (ICC; células marcapasos que generan ondas lentas rítmicas subyacentes a la motilidad intestinal fásica; identificadas por KIT y ANO1), neuronas entéricas (neuronas del sistema nervioso entérico que coordinan la motilidad gastrointestinal; identificadas por inmunotinción TUBB3) y núcleos (DAPI). En la mucosa gástrica, la KIT también se expresa en las células de Paneth y caliz, como se informópreviamente 9,10,11. ANO1 también se expresa fuertemente en el epitelio gástrico, especialmente en las células epiteliales columnares del fondo de ojos, lo que es coherente con su papel en el transporte de cloruro y la secreciónmucosa 11. Además, TUBB3 se expresa en ciertas células endocrinas gástricas y células secretoras de moco, según datos del Atlas de ProteínasHumanas 12,13. La Figura 5 muestra una tinción inmunofluorescente representativa de células musculares lisas marcadas por MYH11, células epiteliales de la mucosa gástrica marcadas por E-cadherin y ICC marcadas por KIT. MYH11 también se expresa en miofibroblastos en la mucosa gástrica, como se informó previamenteen 14. En conjunto, estos resultados de inmunofluorescencia confirman que nuestro protocolo preserva la arquitectura del tejido.
<img alt="Figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1: Preparación del "Swiss roll" del estómago de ratón para criosección. (A) Todo el estómago se coloca inmediatamente después de la extracción en un plato de disección recubierto de silicona negra lleno de solución fisiológica con suero amortecido con fosfato (PBS) para preservar la integridad del tejido. (B) El estómago se abre a lo largo del punto medio del duodeno. (C) El estómago se estira suavemente y se sujeta en el plato para que quede plano sin aplicar una tensión excesiva. Una línea discontinua roja está delineada a lo largo del papel para indicar dónde debe recortarse y facilitar el enrollado. (D) El estómago abierto y fijo se coloca sobre papel filtro humedecido con PBS en preparación para enrollarlo en una configuración compacta. La flecha roja muestra la dirección en la que se mueve el estómago. (E) Las piezas de tejido se incrustan en un compuesto a temperatura óptima de corte (O.C.T.) y se congelan sobre hielo seco en preparación para la criosección. (F) Los bloques congelados se almacenan a −80 °C y se crioseccionan a 5 μm de espesor para su análisis posterior. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.</a>
<img alt="Figura 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
Figura 2: Configuración de adquisición de ND y visualización de saturación durante la imagen de la pila Z. (A) Ajustes del láser y del detector configurados en el software de imagen confocal para imágenes espectrales multicanal. Se utilizan cuatro fluoróforos: 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), Alexa Fluor 488 (AF488), Alexa Fluor 555 (AF555) y Alexa Fluor 647 (AF647), cada uno emparejado con láseres de excitación y detectores de emisión correspondientes. El gráfico espectral muestra las curvas de excitación y emisión, permitiendo ajustar el sistema para minimizar la diafonía y optimizar la detección de señales. (B) Los ajustes de exposición se ajustan individualmente para cada fluoróforo para evitar la saturación de píxeles y preservar el detalle en regiones de alta intensidad. (C) Configuración de adquisición de imagen grande (por ejemplo, 6 × 6 campos) permite visualizar todo el rollo suizo gástrico; El tamaño del campo de imagen debe ajustarse según el tamaño y la compacidad del tejido enrollado. (D) Ventana de adquisición de ND que muestra la configuración de parámetros de la pila Z. El rango Z se define seleccionando las posiciones superior e inferior del músculo gástrico, con ocho pasos configurados para capturar la profundidad completa del tejido para el análisis tridimensional (3D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig2large.jpg" target="_blank">Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.</a>
<img alt="Figura 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig3.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
Figura 3: Imagen de un rotillo suizo de estómago de ratón teñido de hematoxilina y eosina. El escaneo de mosaicos demuestra la capacidad de visualizar todo el Swiss roll gástrico de una ratona C57BL/6J hembra de 8 semanas. Se indican regiones anatómicas principales, incluyendo el esófago (línea punteada roja), esfínter esofágico inferior (línea punteada morada), fundus (línea punteada negra), cuerpo (línea punteada azul), antro (línea punteada verde) y duodeno (línea punteada naranja). Barra de escala: 1000 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig3large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.</a>
<img alt="Figura 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
Figura 4: Imágenes confocales de un rollo suizo de un estómago murino entero: ANO1, KIT, TUBB3. Paneles superiores: Imágenes confocales cosidas representativas de un rollo suizo gástrico de una ratón C57BL/6J hembra de 8 semanas, mostrando inmunotinción para ANO1 (verde), KIT (cian), TUBB3 (amarillo) y núcleos (azules). Se visualiza todo el estómago enrollado, incluyendo el fondo de piel, el corpus y el antrum. Barras de escala: 1000 μm. Paneles inferiores: Vistas ampliadas de la región delimitada por el cuadro blanco discontinuo en los paneles superiores, que resaltan detalles celulares de las células intersticiales de Cajal (ANO1+ y KIT+; flechas amarillas) y neuronas entéricas (TUBB3⁺; flechas rojas). Barras de escala: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig4large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.</a>
<img alt="Figura 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig5.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 5"> 
Figura 5: Imágenes confocales de un rollo suizo de un estómago murino entero: MYH11, KIT, E-cadherina. Paneles superiores: Imágenes confocales cosidas representativas de un rollo suizo gástrico de una ratón C57BL/6J hembra de 8 semanas, mostrando inmunotinción para MYH11 (verde), KIT (cian), E-cadherin (amarillo) y núcleos (azul). Se visualiza todo el estómago enrollado, incluyendo el fondo de piel, el corpus y el antrum. Barras de escala: 1000 μm. Paneles inferiores: Vistas ampliadas de la región delimitadas por la caja blanca discontinua en los paneles superiores. Las líneas blancas de punteos delimitan el epitelio mucoso (E-cadherina) y la capa muscular (MYH11). Las flechas blancas indican células intersticiales KIT+ de Cajal (ICC). Barras de escala: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig5large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.</a>

Mapeo espacial mejorado de capas musculares gástricas de ratón utilizando una técnica modificada de Swiss Roll

Spatial "omics" technologies provide unprecedented opportunities to study the biology and interactions of individual cells of the gastric neuromuscular ...

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Las células intersticiales de Cajal (ICC) son las células marcapasos del tracto gastrointestinal (GI). Se forman redes complejas entre las células del músculo liso y fibras post-ganglionares neuronal para regular la contractilidad del GI. A continuación, presentamos los métodos de inmunofluorescencia transversal y todo el montaje de visualización de redes murino de la CPI.

La visualización de las células intersticiales de Cajal (ICC) de red en ratones

La medición in vivo de las contracciones del músculo liso a lo largo del tracto gastrointestinal de animales de laboratorio sigue siendo una técnica poderosa, aunque infrautilizada. Las galgas extensométricas flexibles de doble elemento no están disponibles comercialmente y requieren fabricación. Este protocolo describe la construcción de galgas extensiométricas fiables y económicas para la implantación aguda o crónica en roedores.

Fabricación e Implantación de miniatura Galgas Extensiométricas Dual-elemento de medición<em&gt; En Vivo</em&gt; Gastrointestinal contracciones en los roedores.

Este artículo demuestra procedimientos quirúrgicos de reflujo gastroesofágico con ratones. Estos modelos son herramientas útiles para la investigación sobre los mecanismos y el tratamiento de la enfermedad por reflujo gastroesofágico y potencialmente el esófago de Barrett y el adenocarcinoma de esófago.

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Se describe el uso de un dispositivo simple para cortar y 'enrollar' intestinos de ratón para preparar rápidamente preparaciones de montaje completo.

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Las técnicas de grabación de vídeo y mapeo espacio-temporal (STmap) recientemente disponibles permiten visualizar y cuantificar los patrones de propagación y mezcla de la motilidad intestinal. El objetivo de este protocolo es explicar la generación y el análisis de STmaps utilizando el sistema de Monitorización de la Motilidad GastroIntestinal (GIMM).

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A continuación describen los resultados de la gastrectomía en manga vertical en ratones. Se trata de un tipo de cirugía de pérdida de peso que consiste en la extracción de aproximadamente el 70% del estómago.

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Este estudio presenta un método de imagen en 3D que utiliza tejidos intestinales de montaje completo y microscopía multifotónica para cuantificar el moco secretado, lo que permite un análisis volumétrico preciso y la visualización de la dinámica del moco en respuesta a estímulos como el cloruro de carbamoilcolina.

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Mapeo espacial mejorado de capas musculares gástricas de ratón utilizando una técnica modificada de Swiss Roll

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