Name: Ensayo MeRIP-qPCR para detectar niveles de modificación m6A de ARN específico en células osteosarcoma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T13:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 16 s
Description: Aprende a detectar modificaciones m⁶A en ARN específico mediante MeRIP-qPCR en células de osteosarcoma. Este método sensible permite estudiar niveles de metilación en transcritos como c-Myc con bajo coste.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+m6A+RNA+methylation+and+noncoding+RNA+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">The interplay between m6A RNA methylation and noncoding RNA in cancer.</a> J Hematol Oncol. 12 (1), 121(2019).</li>
<li>Zhu, Z. M., Huo, F. C., Zhang, J., Shan, H. J., Pei, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+m6A+modification+and+alternative+splicing+during+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between m6A modification and alternative splicing during cancer progression.</a> Clin Transl Med. 13 (10), e1460(2023).</li>
<li>Hu, T., Wang, G., Wang, D., Deng, Y., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+methylation+modification%3A+Potential+pathways+to+suppress+osteosarcoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">m6A methylation modification: Potential pathways to suppress osteosarcoma metastasis.</a> Int Immunopharmacol. 145, 113759(2025).</li>
<li>Nagarajan, A., Janostiak, R., Wajapeyee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dot+blot+analysis+for+measuring+global+N6-methyladenosine+modification+of+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Dot blot analysis for measuring global N6-methyladenosine modification of RNA.</a> Methods Mol Biol. 1870, 263-271 (2019).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+in+strategies+to+profile+transcriptomic+m6A+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Current progress in strategies to profile transcriptomic m6A modifications.</a> Front Cell Dev Biol. 12, 1392159(2024).</li>
<li>McIntyre, A. B. R., Gokhale, N. S., Cerchietti, L., Jaffrey, S. R., Horner, S. M., Mason, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limits+in+the+detection+of+m6A+changes+using+MeRIP%2Fm6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Limits in the detection of m6A changes using MeRIP/m6A-seq.</a> Sci Rep. 10 (1), 6590(2020).</li>
<li>Meyer, K. D., Saletore, Y., Zumbo, P., Elemento, O., Mason, C. E., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+mRNA+methylation+reveals+enrichment+in+3%27+UTRs+and+near+stop+codons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of mRNA methylation reveals enrichment in 3' UTRs and near stop codons.</a> Cell. 149 (7), 1635-1646 (2012).</li>
<li>Zheng, H. X., Zhang, X. S., Sui, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+profiling+of+N6-methyladenosine+%28m6A%29+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Advances in the profiling of N6-methyladenosine (m6A) modifications.</a> Biotechnol Adv. 45, 107656(2020).</li>
<li>Matsuzawa, S., Wakata, Y., Ebi, F., Isobe, M., Kurosawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+monoclonal+antibodies+against+N6-methyladenosine+for+the+detection+of+RNA+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of monoclonal antibodies against N6-methyladenosine for the detection of RNA modifications.</a> PLoS One. 14 (10), e0223197(2019).</li>
<li>Law, J., Günther, S., Watanabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptome+mapping+of+N6-methyladenosine+using+m6A+immunoprecipitation+with+high-throughput+sequencing+in+skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptome mapping of N6-methyladenosine using m6A immunoprecipitation with high-throughput sequencing in skeletal muscle stem cells.</a> Methods Mol Biol. 2640, 431-443 (2023).</li>
<li>Mathur, L., Jung, S., Jang, C., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+m6A+RNA+modification+by+LC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of m6A RNA modification by LC-MS.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100724(2021).</li>
<li>Slama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+enrichment+factors+for+modified+RNA+in+MeRIP+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of enrichment factors for modified RNA in MeRIP experiments.</a> Methods. 156, 102-109 (2019).</li>
<li>Guo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+m6A+detection+empowered+by+endogenous+labeling+unveils+complexities+across+RNA+isoforms%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-molecule m6A detection empowered by endogenous labeling unveils complexities across RNA isoforms.</a> Mol Cell. 85 (6), 1233-1246.e7 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100% etanol</td><td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd., América</td><td>1158566</td><td></td></tr><tr><td>143B</td><td>ATCC, América</td><td>ATCC CRL-8303TM</td><td></td></tr><tr><td>2 y veces; SYBR Mezcla verde qPCR</td><td>Beijing Qihengxing Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>FS-Q1002</td><td></td></tr><tr><td>Denovix DS-11&nbsp;</td><td>Denovix</td><td>DS-11&nbsp;</td><td>Espectrofotómetro</td></tr><tr><td>Medio DMEM</td><td>WISENT CORPORATION, China</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 medio</td><td>Gibco, América</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>EpiQuik CUT& Kit de enriquecimiento de ARN RUN m6A (MeRIP)</td><td>Epigentek, América</td><td>P-9018-24</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>WISENT CORPORATION, China</td><td>086-150</td><td></td></tr><tr><td>hFOB1.19</td><td>Banco de Células de la Academia China de Ciencias, China</td><td>GNHu14</td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensayo de metilación de ARN m6A</td><td>Abcam, Inglaterra</td><td>ab185912</td><td></td></tr><tr><td>Kit de transcripción inversa de microARN</td><td>EZBioscience-EZB, América</td><td>A0010CGQ</td><td></td></tr><tr><td>Sistema en tiempo real</td><td>BIO-RAD, América</td><td>CFX96</td><td></td></tr><tr><td>Kit de extracción total de ARN</td><td>EZBioscience-EZB, América</td><td>B0004DP</td><td></td></tr><tr><td>Enzima TrypLE Express</td><td>Gibco, América</td><td>12604021</td><td></td></tr></tbody></table>

ensayo merip-qpcr para detectar niveles de modificación m6a de arn específico en células osteosarcoma

MeRIP-qPCR Assay for Detecting m6A Modification Levels of Specific RNA in Osteosarcoma Cells

Ensayo MeRIP-qPCR para detectar niveles de modificación m6A de ARN específico en células osteosarcoma

RNA epitranscriptomic modification plays a critical role in the initiation and development of various cancers, among which N6-methyladenosine (m6A) is the ...

merip-qpcr-assay-for-detecting-m6a-modification-levels-specific-rna

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Vamos a demostrar la configuración y el análisis de pre-microRNA-96 y las matrices de QPCR utilizando un robot, así como con la mano con una pipeta de Thermo Scientific multicanal Matrix.

Perfiles de Pre-micro ARN y microRNAs utilizando cuantitativa en tiempo real PCR (qPCR) Arrays

Cuantitativa de la polimerasa en tiempo real de reacción en cadena (PCR cuantitativa) es un método rápido y sensible para investigar los niveles de expresión de microARN (miRNA varias) moléculas en las muestras tumorales. El uso de este método de expresión de cientos de moléculas de diferentes miARN puede ser amplificada, cuantificado y analizado desde la misma plantilla de cDNA.

Detección de microARN en tumores de próstata por el cuantitativo PCR en tiempo real (qPCR)

La presencia de células madre del cáncer (CSC) en sarcomas óseos se ha vinculado recientemente a su patogénesis. En este artículo, presentamos el aislamiento de células madre cancerosas a partir de cultivos celulares primarios obtenidos de biopsias humanas de osteosarcoma convencional (OS) utilizando la capacidad de las células madre cancerosas de crecer bajo condiciones no adherentes.

Establecimiento de Cultivos Celulares del Cáncer Humano de osteosarcoma convencional Tallo

Se describe un método de transferencia de Northern modificado para la medición de N 6 -methyladenosine (m 6 A) las modificaciones en el ARN. El método actual puede detectar modificaciones en diversos ARN y controles en virtud de diversos diseños experimentales.

Un método para medir el ARN<em&gt; N</em<sup&gt; 6</sup&gt; -methyladenosine Modificaciones en células y tejidos

Presentamos aquí un método de cultivo celular para inducir transiciones mesenquimales-epitelial (MET) en células de sarcoma en base a la expresión ectópica combinado de miembros de la familia microRNA-200 y Grainyhead-como 2 (GRHL2). Este método es adecuado para una mejor comprensión del impacto biológico de la plasticidad fenotípica de la agresividad del cáncer y los tratamientos.

La inducción de la mesenquimales-epitelial Transitions en células de sarcoma

Aquí, se describe un implante ortotópico singénico seguido de un procedimiento de amputación del osteosarcoma con metástasis pulmonar espontánea que se puede utilizar para la investigación preclínica de la biología de la metástasis y el desarrollo de nuevas terapias.

Un modelo de rata Sprague Dawley de osteosarcoma ortotópico singénico con amputación para controlar la tasa de metástasis

El presente protocolo describe un método de hibridación in situ de fluorescencia de ARN para localizar los lncRNAs en células de osteosarcoma humano.

Hibridación in situ de fluorescencia de ARN para la localización de ARN no codificante largo en células de osteosarcoma humano

El protocolo describe un ensayo de hibridación de inmunofluorescencia en tándem con tejido fijado en formol e incluido en parafina para detectar y cuantificar microARN y proteínas multiplexadas simultáneamente.

Amplificación y reconocimiento de microARN a través de la hibridación in situ de ácido nucleico bloqueado como un nuevo método de detección y cuantificación

Aquí presentamos un protocolo para evaluar de forma semicuantitativa los niveles globales de m⁶A usando dot blot. El ARN total se extrae, desnaturaliza, se mancha en una membrana de nylon, se sondea con anticuerpo anti-m⁶A y se visualiza mediante quimioluminiscencia. La intensidad de la señal, cuantificada mediante análisis en escala de grises ImageJ, refleja la abundancia relativa de metilación, proporcionando un flujo de trabajo reproducible para la investigación.

Ensayo de blot de punto para detectar niveles globales de modificación del ARN N 6-metiladenosina

Este protocolo experimental proporciona un método estable, rentable y eficiente que combina el knockdown de lncRNA con ensayos formadores de colonias para cuantificar el efecto del lncRNA en la proliferación celular del osteosarcoma.

Ensayo de formación de colonias que detecta la capacidad proliferativa de células de osteosarcoma por knockdown de ARNCn

Aprende a detectar modificaciones m⁶A en ARN específico mediante MeRIP-qPCR en células de osteosarcoma. Este método sensible permite estudiar niveles de metilación en transcritos como c-Myc con bajo coste.

Ensayo MeRIP-qPCR para detectar niveles de modificación m⁶A de ARN específico en células osteosarcoma

Explorar más videos