Name: In Vitro Análisis funcional de células T reguladoras: enfoque en la proliferación y diferenciación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Aprende un ensayo modificado in vitro para evaluar la proliferación y diferenciación de células T efectoras mediante co-cultivo con células T reguladoras de ratón y análisis por citometría de flujo.

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL centrifuge tube</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>12.5 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>1250 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>15 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>200 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>48-well plates</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>5 mL syringe piston</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>50 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>50 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>70 &mu;m cell strainer&nbsp;</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD28 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD3 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD4 PerCP-Cy5.5 (RM4-5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>45-0042-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse Foxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse IFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse IL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S Flow Cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>para adquisición de datos citometria de flujo de muestras de células inmunes</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>para el aislamiento de linfocitos primarios y subconjuntos de células T</td></tr><tr><td>CD25 Monoclonal Antibody (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>CD45.1 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>para el aislamiento de linfocitos primarios y subconjuntos de células T</td></tr><tr><td>CD45.1 Monoclonal Antibody (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>CD45.2 Monoclonal Antibody (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) Monoclonal Antibody (MEL-14), FITC&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>eBioscience Cell Proliferation Dye eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>software para análisis de datos citometria de flujo</td></tr><tr><td>Golgi-Plug Protein Transport Inhibitor</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Human TGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Ionomycin calcium salt</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>LD Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>OctoMACS Separators</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>PE Rat IgG1, &kappa; Isotype Ctrl Antibody</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 Rat IgG2a kappa Isotype Control Antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Purified anti-mouse CD16/32 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>para clasificación celular</td></tr><tr><td>Recombinant mouse IL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Recombinant Mouse IL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysing Buffer)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>UltraComp eBeads Compensation Beads&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>01-2222-42</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Zombie Yellow Fixable Viability Kit</td><td>BioLegend</td><td>423104</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>o equivalente</td></tr></tbody></table>

in vitro análisis funcional de células t reguladoras: enfoque en la proliferación y diferenciación

In Vitro Functional Analysis of Regulatory T cells: Focus On Proliferation And Differentiation

En el experimento representativo, se utilizaron células T naïves como células Tresp para investigar los efectos de las células enriquecidas con Treg en la proliferación y diferenciación de células Th1 y Th17. En este experimento, las células Tresp fueron activadas por células CD3 anti-ratón y células no CD4+ enriquecidas con APC, y luego se diferenciaron en células Th1 bajo inducción de IL-12 p70 o en células Th17 bajo inducción TGF-β1 e IL-6. Bajo estas dos condiciones de inducción, se estudiaron cambios en l...

In Vitro Análisis funcional de células T reguladoras: enfoque en la proliferación y diferenciación

Regulatory T (Treg) cells play key roles in maintaining immune homeostasis. Abnormalities in Treg cell function are associated with various diseases, ...

in-vitro-functional-analysis-regulatory-t-cells-focus-on

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Se describe un método para la generación de regulación, la memoria y el ingenuo células T de un donante de sangre humana única. Polarizada Tregs puede ser entonces en comparación con otros subconjuntos en una variedad de aplicaciones genéticas y funcionales con homogeneidad genética, incluyendo un ensayo de supresión también detallan aquí.

La generación de células T reguladoras inducidas de células humanas primarias T vírgenes y de memoria

Generación de linfocitos T de madre pluripotentes inducidas (iPS) a las células da un enfoque alternativo de la utilización de células madre embrionarias para células T basada en la inmunoterapia. El método muestra que mediante la utilización de...

Diferenciación dirigida de células madre pluripotentes inducidas hacia los linfocitos T

Las células T reguladoras CD4+ son potentes inmunomoduladores y cumplen funciones importantes en la homeostasis inmunitaria. La escasez de estas células en la sangre periférica dificulta los estudios funcionales, especialmente en el contexto de la infección por VIH-1. Aquí describimos un método para aislar y expandir las Tregs CD4+ funcionales de sangre periférica de individuos infectados por VIH-1.

Nuevas herramientas para expandir células T reguladoras de las personas VIH-1-infected

Adenoviral la transferencia génica en células T con la expresión transgénica del receptor de adenovirus Coxsackie ingenuo CD4 permite el análisis molecular de la diferenciación de células T...

La transducción adenoviral de células T CD4 + naïve a estudiar la diferenciación Treg

+ &gt; 'jove_content'Naïve se polarizan en varios subconjuntos dependiendo del entorno en el momento de la activación.  La diferenciación de los linfocitos T CD4+ naïve a varios subconjuntos efectores se puede lograr in vitro mediante la adición de estímulos del receptor de linfocitos T y señales específicas de citocinas.

Ratón Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Aislamiento de células T y<em&gt; In vitro</em&gt; Diferenciación en subconjuntos de células T

Aquí, describimos un protocolo para analizar el fenotipo de células T reguladoras (Treg) aisladas de ratones infectados por el virus de la coriomeningitis linfocítica crónica e ingenua. Además, proporcionamos un proceso para evaluar la actividad supresora de las células Treg.

El análisis fenotípico y funcional de las células reguladoras T activadas Aislado de la coriomeningitis linfocítica crónica por el virus ratones infectados

Este protocolo describe la generación reproducible y el fenotipo de las células T reguladoras inducidas por el hombre (iTregs) a partir de células T CD4 + vírgenes in vitro. Diferentes protocolos de inducción FOXP3 permiten el estudio de los fenotipos iTreg específicos obtenidos con los protocolos respectivos.

Diferenciación in vitro de las células CD4 + humano FOXP3 + células T reguladoras (Induced iTregs) de T naive CD4 + células utilizando un protocolo de TGF-β que contienen

Aquí, presentamos un protocolo para inducir tolerancia en el trasplante y evaluar in vitro e in vivo la capacidad supresora de subconjuntos distintos de la célula del receptor y el estado inmune del receptor hacia el donante o los antígenos exógenos.

In Vitro e In Vivo la evaluación de la actividad supresora T, B y las células mieloides y las respuestas humorales de los receptores de trasplante

Este artículo describe un método novedoso para generar antígenos tumorales inducidos por células madre pluripotentes inducidas por antígenos timáticos (iTE) por un sistema de cultivo timico tridimensional (3D). iTE son un subconjunto homogéneo de células T estrechamente relacionadas con células T ingenuas con la capacidad de proliferación, formación de la memoria y supresión tumoral.

Un sistema de cultivo timático tridimensional para generar emigrantes timémicos específicos de células madre pluripotentes inducidos por la murino

Aquí describimos un método robusto para determinar la identidad y pureza de las células inmunitarias a través de firmas epigenéticas detectadas mediante PCR cuantitativo (qPCR). La desmetilación del ADN en un locus específico sirve como un identificador único para un tipo de célula en particular y permite la identificación de células CD8+, reguladoras o T Th17.

Determinación de la identidad y pureza de las células inmunitarias mediante PCR cuantitativo basado en epigenética

Aprende un ensayo modificado in vitro para evaluar la proliferación y diferenciación de células T efectoras mediante co-cultivo con células T reguladoras de ratón y análisis por citometría de flujo.

In Vitro Análisis funcional de células T reguladoras: enfoque en la proliferación y diferenciación

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