Photocommutation intravitale et de suivi des Dendra2 marqué les cellules tumorales à travers la fenêtre d'imagerie mammaire est une technique qui permet d'imager le comportement métastatique des cellules tumorales dans des microenvironnements tumoraux choisis sur une échelle de temps de jour.
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Article de méthode
Dendra2 photocommutation travers la fenêtre d'imagerie mammaire
Dans cet article
Résumé
Résumé
Dans la dernière décennie, la microscopie intravitale des tumeurs mammaires chez la souris et le rat à une seule cellule de résolution
Protocole
1. Génération des tumeurs fluorescentes à l'aide d'injection de cellules tumorales mammaires dans le pavé gras:
- Cultivez une lignée cellulaire exprimant Dendra2 protéines (comme un marqueur cytoplasmique) à 40 - 80% de confluence.
- Rincer la vaisselle au moins 3 fois avec du PBS w / o Ca 2 + ou Mg 2 +.
- Ajouter 3 ml de trypsine par 10 cm de plat et incuber à 37 ° C jusqu'à ce que la plupart des cellules se détachent et ensuite frappé du plat contre une surface plane pour le secouer.
- Rincer toutes les cellules hors du plat, et d'utiliser un grattoir (spatule en caoutchouc) pour collecter la m....
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Remerciements
Ce travail a été soutenu par le Département américain de la Défense (BC075554 à BG et BC061403 à DK), US National Institutes of Health (U54GM064346 d'JvR; CA100324 à JC, JES et JW; CA77522 à JES, U54CA126511 à JC et BG). Nous remercions D. Entenberg de l'aide pour la microscopie, M. Rottenkolber pour les aider dans la fabrication de la boîte de l'imagerie et J. Pollard (Albert Einstein College of Medicine) pour l'anticorps F4/80.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| PBS sans Ca, Mg | GIBCO, par Life Technologies | 14190-144 | |
| Tripsine | GIBCO, par Life Technologies | 25300 | |
| HBSS | GIBCO, par Life Technologies | 14025 | |
| Milieu DMEM (cellules MDA-MB-231) | GIBCO, par Life Technologies | 11965 | |
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | # NDC 10019-773-40 | |
| Souris SCID | Institut national du cancer | N/A | |
| Plaques de culture | BD Biosciences | 353003 | Commande personnalisée |
| Couvre-objets circulaires de 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
Références
- Farina, K. L., Wyckoff, J. B., Rivera, J., Lee, H., Segall, J. E., Condeelis, J. S., Jones, J. G. Cell motility of tumor cells visualized in living intact primary tumors using green fluorescent protein. Cancer Res. 58, 2528-2532 (1998).
- Naumov, G. N., Wilson, S. M., MacDonald, I., Schmidt, E. E., Morris, V. L., Groom, A. C., Hoffman, R. M., Chambers, A. F.
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Réimpressions et autorisations
