在体内的Ca 2 + -蜜蜂的嗅觉学习期间的蘑菇体神经元的成像
Summary
蜜蜂可以调节食欲嗅觉学习范式（每空调）。作为刺激的气味，我们建立了一个行为记录的同时，钙成像是用来衡量蘑菇体神经元的气味诱发活动的方法<em>在体内</em>。
Abstract
在体内和半体内钙成像准备在我们的实验室已开发Joerges，库特纳和Galizia十几年前，来衡量在触角叶1的气味诱发的活动。从那时起，它一直不断完善和应用在蜜蜂大脑中的不同neuropiles。在这里，我们描述了目前在实验室中用来测量使用葡聚糖加上钙敏感染料（FURA – 2）在蘑菇体神经元活动的准备。我们逆行染色注入其轴突的染料或SOMA地区的蘑菇体神经元。我们专注于减少的侵袭，达到了准备，它仍然是可能培养的蜜蜂，每空调使用的。我们是能够监测和量化的行为反应录音电myograms肌肉控制的PER（M17）2。
后生理实验成像结构更大的使用共焦扫描显微镜的详细地址的神经元的身份进行调查。
Protocol
蜜蜂的制备及回填赶上在蜂房和关于固定冰的寒意蜜蜂觅食。 安装在有机玻璃录音商会3。低熔点硬蜡录音室的墙壁修复眼睛和胸部。 拉玻璃毛细管，俗称为电，突破，并在尖端获得了CA的尖端直径。 10μm的。盖毛细管尖端的染料粘贴。染料粘贴由一个10:1混合FURA – 2葡聚糖和赖氨酸可修复四甲右旋糖酐。 对于染色过程中，固定天线与细枝末节或正二十烷。取出?…
Discussion
在此演示中，我们经历过的所有步骤 ，以调查在蜜蜂体内的钙信号。我们应用这种技术的蘑菇体神经元，但可能对神经元的染色技术可以建立完成成像。我们一直专注于蜜蜂的嗅觉通路中的神经元。实验都是在暗室进行。设立是长波光线照射位于蜜蜂的光学感知范围，并没有激发染料。重要的是要避免任何荧光文物，例如气泡在硅。
这个系统的主要优点之一是?…
Acknowledgements
这项工作是由东风集团。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| low melting point hard wax Deiberit 502 | Dr. Böhme & Schöps Dental GmbH | |||
| FURA-2 dextran potassium salt, 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | F-3029 | Protect from light. | |
| tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | D-3312 | Protect from light. | |
| n-eicosane | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | ||
| Kwik Sil Adhesive | WPI | KWIK SIL | ||
| Imaging Set-up | TILL Photonics | |||
| CCD camera | Imago | |||
| CED | Texas Instruments |
References
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee’s proboscis reflex by electromyiographic recordings. J. Insect Physiol. 33, 501-507 (1987).
- Galizia, C. G., Vetter, R. S., Christensen, T. A. Optical Methods for Analyzing Odor-Evoked Activity in the Insect Brain. Methods in Insect Sensory Neuroscience. , 345-388 (2004).
- Mauelshagen, J. Neural correlates of olfactory learning paradigms in an identified neuron in the honeybee brain. J Neurophysiol. 69 (2), 609-625 (1993).
- Kuwabara, M. Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene Apis mellifica, Hokaido Univ. Zool. J. Sci. 13, 458-464 (1957).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera. Journal of Comparative Psychology. 97 (2), 107-119 (1983).
Citer Cet Article
Haehnel, M., Froese, A., Menzel, R. In vivo Ca2+– Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee. J. Vis. Exp. (30), e1353, doi:10.3791/1353 (2009).