Injection intrapéritonéale : une méthode d’administration de solution dans la cavité abdominale d’un poisson-zèbre adulte

Abstract

Source : Luukinen, H., et al. Modélisation de la tuberculose chez le poisson-zèbre adulte infecté par Mycobacterium marinum. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit une technique d’injection intrapéritonéale, une méthode pour administrer des solutions dans la cavité abdominale du poisson-zèbre adulte.

Protocol

1. Infection expérimentale à M. marinum par injection intrapéritonéale

1. Pipeter une gouttelette de 5 μL de la solution bactérienne diluée sur un morceau de film parafilm et tirer la gouttelette dans une aiguille à insuline de 30 G.
2. Utilisez des poissons sauvages de 5 à 8 mois et des poissons mutants rag1−/−hu1999 pour l’expérience. Anesthésier le poisson-zèbre adulte dans l’eau de l’aquarium avec 0,02 % d’ester éthylique d’acide 3-aminobenzoïque (pH 7,0). Placez le poisson côté ventral vers le haut dans une fente sur du plastique expansé humide.
   REMARQUE : Les poissons mutants Rag-/- ne sont pas capables de subir une recombinaison somatique et de produire des lymphocytes T et B fonctionnels.
3. Injectez l’aiguille entre les nageoires pelviennes à un angle d’environ 45°. Gardez l’ouverture de l’aiguille vers le haut pour observer que toute l’ouverture se trouve à l’intérieur de la cavité abdominale. Injectez lentement la suspension bactérienne et retirez délicatement l’aiguille.
   note: Si le traceur rouge s’échappe du poisson lors de l’injection, excluez le poisson de l’expérience.
4. Immédiatement après l’injection, transférez le poisson dans un réservoir de récupération avec de l’eau fraîche du réservoir.
5. Prélever des échantillons de la suspension bactérienne sur des plaques 7H10 toutes les 15 minutes à partir de l’aliquote bactérienne utilisée et incuber les bactéries à 29 °C pendant 5 jours et vérifier la dose d’infection en comptant les colonies sur les plaques.
6. Vérifiez régulièrement le bien-être du poisson et euthanasiez tout poisson présentant des symptômes de l’infection avec une concentration supérieure à 0,02 % d’ester éthylique de l’acide 3-aminobenzoïque (pH 7,0).
   note: Environ 7 % des poissons-zèbres adultes infectés par 34 ± 15 UFC et 30 % des poissons-zèbres infectés par 2029 ± 709 UFC auront présenté des symptômes à 8 semaines. Les symptômes peuvent inclure une natation anormale, une absence de réponse au toucher, un halètement, un œdème ou une émaciation observable.
7. Entretenez le poisson-zèbre selon les normes courantes.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mycobacterium marinum	Collection de la culture de type américain	ATCC 927
Rouge phénolique	Sigma-Aldrich	Réf. P3532
Comprimés salins tamponnés au phosphate (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Gélose Middlebrock 7H10	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
Ester éthylique de l’acide 3-aminobenzoïque (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	A5040
Aiguille à insuline Omnican 100 30 G	Braun	9151133
Seringue de 1 mL	Henke Sass Loup	Réf. 4010.200V0