Summary
Trichuris muris संक्रमण Th2 उन्मुक्ति के एक पेट मॉडल जहां प्रतिरोधी चूहों एक सुरक्षात्मक Th2 प्रतिक्रिया पैदा करते हैं और अतिसंवेदनशील चूहों रोग TH1 प्रतिक्रिया उत्पन्न है.
Abstract
Trichuris muris चूहों के एक प्राकृतिक रोगज़नक़ है और जैविक और antigenically Trichuris की प्रजातियों कि मनुष्यों और पशुओं 1 को संक्रमित करने के लिए समान है . संक्रामक अंडे मौखिक gavage, बाहर का छोटी आंत में हैच द्वारा दिया जाता है, आंतों उपकला कोशिकाओं (IECs) पर आक्रमण है कि लाइन cecum और प्रॉक्सिमल बृहदान्त्र के तहखाने और परिपक्वता पर कीड़े 1 वातावरण में अंडे जारी. यह मॉडल कारकों की जांच करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है कि नियंत्रण CD4 सेल + टी सहायक (गु) के रूप में के रूप में अच्छी तरह से सक्रियण आंत्र उपकला में परिवर्तन. प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है कि C57BL 6 / और / BALB ग के रूप में प्रतिरोधी जन्मजात उपभेदों में होता है, Th2 polarized (आईएल -4, आईएल -5 और आईएल -13) साइटोकिन्स और कीड़े के निष्कासन जबकि साइटोकिन्स TH1 जुड़े (आईएल द्वारा विशेषता है -12, आईएल -18, IFN-γ) आनुवंशिक रूप से अतिसंवेदनशील AKR / जम्मू 2-6 चूहों में पुराने संक्रमण को बढ़ावा देने. Th2 साइटोकिन्स IECs के कारोबार तेजी से, जाम सेल भेदभाव, भर्ती और उपकला पारगम्यता और चिकनी मांसपेशी संकुचन, जो सभी के कीड़ा निष्कासन 7-15 में शामिल किया गया है में परिवर्तन सहित आंतों microenvironment में शारीरिक परिवर्तन को बढ़ावा देने. यहाँ हम Trichuris muris अंडे जो बाद के प्रयोगों में इस्तेमाल किया जा सकता है प्रचार के लिए एक प्रोटोकॉल विस्तार. हम भी संक्रमण के बाद के विश्लेषण के लिए सुझावों के साथ एक नमूना प्रयोगात्मक फसल प्रदान करते हैं. कुल मिलाकर, इस प्रोटोकॉल बुनियादी उपकरण Trichuris muris माउस संक्रमण मॉडल जो जठरांत्र पथ के रूप में के रूप में अच्छी तरह से IECs की प्रतिरक्षा effector कार्यों में गु प्रवृत्ति से संबंधित सवालों का पता करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है प्रदर्शन के साथ शोधकर्ताओं प्रदान करेगा.
Protocol
1. Trichuris muris अंडे प्रचार
- Trichuris muris अंडे के नए बैच उत्पन्न करने के लिए, 20-30 immunodeficient चूहों को संक्रमित (eg. NOD.Cg Prkdc SCID Il2rg / tm1Wjl SzJ (एनएसजी) या 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) या आनुवंशिक रूप से अतिसंवेदनशील चूहों ( जैसे / AKR जम्मू) है कि मौखिक gavage द्वारा लगभग 300 muris अंडे Trichuris के साथ 6-8 सप्ताह पुराने हैं.
- 32-35 दिनों के बाद सीओ 2 asphyxiation द्वारा चूहों का बलिदान .
- माउस के ventral पक्ष बेनकाब और 70% इथेनॉल के साथ पेट को गीला.
- संदंश का प्रयोग पेट की त्वचा समझ और कैंची का उपयोग कर एक छोटा सा चीरा बनाने के लिए. त्वचा कट करने के लिए पेट सामग्री बेनकाब.
- Cecum और प्रॉक्सिमल बड़ी आंत को पहचानें और उन्हें हटा दें.
- और एक 10 सेमी पेट्री डिश 500 यू / मिलीलीटर पेनिसिलिन और 500 / μg मिलीलीटर स्ट्रेप्टोमाइसिन (पी / एस) के साथ Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) युक्त में प्रॉक्सिमल बड़ी आंत cecum रखें. लुमेन और कीड़े का पर्दाफाश करने के लिए खोलने के cecum कट. संदंश फॉस्फेट की एक बीकर में जगह cecum का उपयोग खारा (पीबीएस) buffered और धीरे से मिलाने के लिए मल हटायें.
- पेट्री डिश cecum लौटें और चिकनी घुमावदार संदंश (Roboz रुपये - 5047) का उपयोग धीरे कीड़े बाहर खींच और उन्हें एक छह अच्छी तरह से 5 DMEM + पी / एस के mls युक्त थाली के एक कुएं में जगह है
- चूहों के सभी के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएँ.
- एक Tupperware कंटेनर में एक नम कागज तौलिया ° 37 में नमी और सेते बनाए रखने के लिए सी 4 बजे से 6 अच्छी तरह से थाली रखो.
- बाद 4 बजे चिकनी घुमावदार संदंश का उपयोग कीड़े को हटाने और उन्हें 6 अच्छी तरह से युक्त थाली 5ml DMEM के 2 नए कुओं में विभाजित + पी / एस एक 15 मिलीलीटर बाज़ ट्यूब में मूल अच्छी तरह से और जगह की सामग्री हार्वेस्ट. 4 घंटा (सेल restimulation लिए पीबीएस डायलिसिस, जहां ठेठ प्रोटीन पैदावार 20 चूहों प्रति 10-20 मिलीग्राम के बाद इस्तेमाल किया जा सकता है) प्रतिजन और resuspend के रूप में 3000 rpm और हटायें और आरक्षित सतह पर तैरनेवाला ट्यूब स्पिन अंडा युक्त autoclaved पानी के नल में गोली.
- 37 डिग्री सेल्सियस रातोंरात पर 6 अच्छी तरह से थाली वापस रखो. निकालें और कीड़े के निपटान. एक बाज़ ट्यूब और 5 मिनट के लिए 3000 rpm पर स्पिन में कुओं की सामग्री हार्वेस्ट. रातोंरात प्रतिजन (पीबीएस डायलिसिस, जहां ठेठ प्रोटीन पैदावार 20 चूहों प्रति 10-20 मिलीग्राम के बाद Trichuris एजी विशिष्ट एंटीबॉडी निर्धारण ELISAs के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है) और resuspend अंडे युक्त autoclaved पानी के नल में गोली के रूप में सतह पर तैरनेवाला और रिजर्व निकालें.
- 4 घंटा और रात में अंडे का मिश्रण है और 70μm झरनी के माध्यम से अंडे को फ़िल्टर करने के लिए बचे हुए किसी भी कीड़े तो एक 75 सेमी 2 फ्लास्क में स्थानांतरण हटायें. एक अंधेरे कमरे के तापमान (आर टी) में 6 सप्ताह के लिए पन्नी में कवर जगह में फ्लास्क रखें.
- Autoclaved नल के पानी में अंडे धो और 50 μl में 50 व्यवहार्य अंडे पर resuspend. ऐसा करने के लिए, 5 और ~ 50ml बाँझ पानी के नल में मिनट resuspend के लिए 3000 rpm पर अंडे अपकेंद्रित्र. एक गिलास स्लाइड पर 50 μl अंडे और जगह निकालें. 40x बढ़ाई का उपयोग 50 μl में व्यवहार्य embryonated अंडे की संख्या गिनती. 50 μl में 50 व्यवहार्य अंडे देने के लिए अंडे पतला. Kopper और Mansfield 16 द्वारा अध्ययन व्यवहार्य अंडे की छवियों के लिए कृपया देखें.
2. Trichuris muris अंडे (200 अंडे / माउस) के साथ प्रयोगात्मक चूहों के तीव्र संक्रमण
- अच्छी तरह से resuspend अंडे और चूहों की संख्या के इलाज के लिए पर्याप्त मात्रा को दूर करने के लिए एक्स 2 (eg. 10 चूहों के लिए 200 μl एक्स ले 10 चूहों x 2 = अंडे की mls 4) और एक 14 मिलीलीटर तस्वीर टोपी ट्यूब में उन्हें जगह.
- 14 मिलीलीटर तस्वीर टोपी ट्यूब उलटें मिश्रण करने के लिए. 1 एक उपयुक्त आकार खिला सुई पर मिलीलीटर सिरिंज (वजन 25 ग्राम हम 18 गेज 1 1 / 2 "सुइयों का इस्तेमाल चूहों के लिए) में अंडे का 200 μl लाओ एक हाथ कूड़ा में माउस और दूसरे हाथ का उपयोग मौखिक gavage द्वारा अंडे प्रशासन. .
- 21 दिन रुको.
3. प्रायोगिक फसल
- 21 दिन सीओ 2 का उपयोग चूहों बलिदान .
- हृदय पंचर द्वारा चूहों से रक्त ले लीजिए, एक गैर heparinized सिरिंज में, और 4 बजे दुकान डिग्री सेल्सियस -20 डिग्री सेल्सियस पर अगले दिन सीरम और स्थिर अलग सीरम Trichuris विशेष IgGs और IgE का पता लगाने के के लिए एलिसा द्वारा इस्तेमाल किया जा सकता है.
- माउस के ventral पक्ष बेनकाब और 70% इथेनॉल के साथ पेट को गीला.
- संदंश का प्रयोग पेट की त्वचा समझ और कैंची का उपयोग कर एक छोटा सा चीरा बनाने के लिए. त्वचा और अंतर्निहित पेट सामग्री बेनकाब झिल्ली कट.
- छोटी आंत cecum और बृहदान्त्र को पहचानें. संदंश के साथ cecum पकड़ो और उदर गुहा के बाहर खींच. संदंश की एक और जोड़ी के साथ mesenteric लिम्फ नोड्स (mLNs) उजागर सही करने के लिए छोटी आंत धक्का. और आंतों में एक 15 मिलीलीटर युक्त मीडिया के 2 mls बाज़ जगह में कटौती नहीं सावधान किया जा रहा mLNs निकालें. अगर वांछित इन और संसाधित किया जा सकता है इन विट्रो में restimulated (1 αCD3/CD28 / μg मिलीलीटर के साथ या 50μg/ml 4 Trichuris एजी के साथ 24 अच्छी तरह से प्लेटों में 1 मिलीलीटर में 6 / 4x10 मिलीलीटर) एलिसा और intracellular च द्वारा साइटोकाइन के विश्लेषण के लिए 72 घंटे के लिएकम cytometry.
- बाहर कट cecum और बृहदान्त्र.
- संदंश का प्रयोग, बाहर और एक 2 मिलीलीटर Axygen ट्यूब में बाहर का बृहदान्त्र जगह से fecal छर्रों धक्का. -20 डिग्री सेल्सियस पर रुक मलीय छर्रों resistin की तरह अणु β (RELM β) की अभिव्यक्ति के लिए पश्चिमी धब्बा विश्लेषण किया जा सकता है.
- Cecum (~ 0.5 सेमी) की नोक निकालें. निकालने के मल संदंश के साथ cecum टिप पकड़ और पीबीएस एक पेट्री डिश में एक 3 मिलीलीटर सिरिंज और 22 गेज सुई का उपयोग कर के साथ फ्लश. एक 5 मिलीलीटर फाल्कन तस्वीर टोपी ट्यूब में नए सिरे से 4% paraformaldehyde में रखें. 4 में स्टोर डिग्री सेल्सियस ये आयल - एम्बेडेड sectioned, और histological विश्लेषण के लिए स्लाइड पर मुहिम शुरू किया जा सकता है.
- शाही सेना के लिए प्रॉक्सिमल बृहदान्त्र (~ 1 सेमी) का एक टुकड़ा निकालें. 2 मिलीलीटर Axygen ट्यूब में 500 μl RNAlater के साथ नमूना रखो. 4 में स्टोर डिग्री सेल्सियस इन नमूनों qPCR mRNA अभिव्यक्ति के लिए विश्लेषण किया जा सकता है.
- -20 डिग्री सेल्सियस पर एक लेबल पेट्री डिश और फ्रीज में cecum के बाकी प्लेस
4. Trichuris muris कीड़े के cecum में गणन
- Cecum और ~ 5 मिलीलीटर पानी युक्त एक पेट्री डिश में फ्रीजर जगह से निकालें.
- कैंची का प्रयोग, cecum खोलने के लिए लुमेन बेनकाब काटा.
- संदंश के साथ cecum पकड़ो और सख्ती cecum हिला मल के बहुमत को दूर.
- दूसरे पेट्री युक्त पानी और चिकनी घुमावदार संदंश का उपयोग धीरे बंद परिमार्जन IECs अंतर्निहित ऊतक पकवान cecum स्थानांतरण.
- Cecum एक नया पेट्री पानी युक्त डिश के लिए स्थानांतरण और सख्ती संदंश के साथ शेष ऊतक परिमार्जन, छोटे - छोटे टुकड़ों में ऊतक तेजस्वी.
- एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग सभी पेट्री डिश 3 में कीड़े के सभी गिनती. जैसा कि आप को लगता है एक कीड़ा यह पकवान से हटाने के लिए एक ही कीड़ा सुनिश्चित दो बार नहीं गिना जाता है. यदि कीड़े क्षतिग्रस्त हो रहे हैं (यानी आधे में टूट) केवल मोटी या पतली समाप्त होता है गिनती के लिए एक सटीक गणना.
5. प्रतिनिधि परिणाम
Trichuris muris संक्रमण मॉडल शोधकर्ताओं परजीवी बोझ और प्रणालीगत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, के रूप में अच्छी तरह से histologically जांच डिस्टल cecum भीतर भड़काऊ प्रतिक्रिया मात्रा ठहराना करने के लिए अनुमति देता है. जब काटा cecum के लुमेन उजागर जाता है, Trichuris कीड़े एक विदारक माइक्रोस्कोप (चित्रा 1 ए बी) का उपयोग enumerated जा सकता है. Trichuris के लिए प्रतिरक्षा के पैरामीटर्स भी एंटीबॉडी IgG1 करने के लिए स्विचन (Th2 प्रकार उन्मुक्ति के साथ जुड़े) प्रतिरोधी पशुओं में निर्धारण, और अतिसंवेदनशील पशुओं में IgG2a (TH1 प्रकार उन्मुक्ति के साथ जुड़े) (चित्रा 1C) शामिल हैं . जाम सेल विशिष्ट resistin की तरह प्रोटीन अणु β (RELM β) की अभिव्यक्ति Trichuris की निकासी के साथ जुड़ा हुआ है और पश्चिमी धब्बा विश्लेषण (चित्रा 2) के द्वारा detectable है. cecum के बाहर का भाग आवधिक एसिड Schiff (पीए) के साथ दाग जाम सेल प्रतिक्रिया और आंतों की सूजन के संक्रमण के जवाब में हद (चित्रा 3) का आकलन किया जा सकता है.
चित्रा 1. Trichuris muris के लिए रोगक्षमता की मात्रा का ठहराव. (ए) प्रतिरोधी चूहों (बी -6) को 21 दिन के बाद संक्रमण से Trichuris muris निष्कासित . इसके विपरीत करके, अतिसंवेदनशील चूहों (AKR / जम्मू) Trichuris के साथ लंबे समय से संक्रमित हो जाते हैं, परजीवी स्थापना में जिसके परिणामस्वरूप . हर बार मतलब ± SEM समूह प्रति 4-8 के पशुओं का प्रतिनिधित्व करता है. (बी) कीड़े एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग करने के लिए गिने जाते हैं. शीर्ष पैनल अलगाव में कीड़े से पता चलता है, वह नीचे के पैनल IECs और मल की उपस्थिति में कीड़े से पता चलता है. (सी) Trichuris विशेष IgG2a titres पतला सीरम की एलिसा (01:02 कमजोर पड़ने, कमजोर पड़ने 1:20 पर शुरू और 1:2560 में समाप्त) द्वारा निकालनेवाला Trichuris प्रतिजन (एजी / ओ एन, 5 μg / के साथ लेपित प्लेट पर निर्धारित कर रहे हैं मिली). अतिसंवेदनशील / AKR जम्मू चूहों Trichuris विशिष्ट सीरम IgG2a की प्रतिरोधी बी -6 चूहों की तुलना में विशेष रूप से उच्च स्तर है.
चित्रा 2. Trichuris muris की क्लीयरेंस 7 सेल विशिष्ट RELM-बीटा प्रोटीन जाम की अभिव्यक्ति के साथ जुड़ा हुआ है. RELM β उत्पादन Trichuris संक्रमित प्रतिरोधी (बी -6) से fecal छर्रों से पता लगाया जा सकता है, लेकिन पश्चिमी धब्बा विश्लेषण द्वारा अतिसंवेदनशील नहीं चूहों (/ AKR जम्मू और कश्मीर). प्रत्येक लेन एक एक जानवर की प्रतिनिधि है, = अनुभवहीन (एन), (टीएम) = Trichuris 21 दिन संक्रमित चूहों.
चित्रा 3. बाहर का cecum निम्नलिखित Trichuris संक्रमण के histological परीक्षा. बाहर का cecum 5-7 सुक्ष्ममापी वर्गों के पीए के साथ दाग. जाम सेल hyperplasia और बलगम उत्पादन प्रतिरोधी (बी -6) में स्पष्ट है लेकिन Trichuris संक्रमण के बाद चूहों अतिसंवेदनशील नहीं (/ AKR जम्मू और कश्मीर) कर रहे हैं.
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Discussion
इस प्रोटोकॉल एक मानक उच्च खुराक तीव्र Trichuris muris संक्रमण है जो अन्वेषक द्वारा अपेक्षित के रूप में संशोधित किया जा सकता है विवरण. उदाहरण के लिए, चूहों और बलिदान किया जा सकता है ऊतकों अलग अलग दिनों पर काटा. पता लगाएँ कि चूहों को सफलतापूर्वक पूर्ण कीड़ा बोझ की स्थापना की है कि वे 14 दिन पर बलिदान किया जा सकता है, जो बिंदु पर सभी चूहों को लगभग 200 कीड़े के बोझ ले जाना चाहिए. चूहे भी 32 दिन जहां किसी भी कीड़ा पता चला परिपक्वता तक पहुँच होगा और अपने जीवन की अवधि के लिए मेजबान के साथ रहेगा के लिए संक्रमित किया जा सकता है. इसके अलावा, प्रोटोकॉल पुरानी Trichuris muris संक्रमण मॉडल के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. ऐसा करने के लिए, अंडे खुराक प्रशासित का एक कम खुराक के संक्रमण (लगभग 30 अंडे) के लिए समायोजित किया जा सकता है. इस खुराक सामान्य रूप से प्रतिरोधी चूहों एक सुरक्षात्मक Th2 प्रतिक्रिया प्रेरित करने में विफल है, लेकिन बल्कि एक TH1 प्रतिक्रिया पैदा करते हैं और लगभग 20 17 कीड़े के बोझ को बनाए रखने.
Trichuris muris संक्रमण मॉडल के अन्य संक्रमण से अधिक मॉडल एक लाभ यह है कि सामान्य तौर पर संक्रमित चूहों किसी भी रुग्णता या मृत्यु दर का प्रदर्शन नहीं करते. लेकिन वहाँ कारक है कि प्रयोगात्मक परिणाम को प्रभावित है कि शोधकर्ताओं बारे में पता होना चाहिए कर सकते हैं. पहली कारक चूहों की पृष्ठभूमि तनाव है. परिणाम में उल्लिखित, C57BL 6 / चूहों प्रतिरोधी रहे हैं और चूहों / AKR जम्मू अतिसंवेदनशील होते हैं, और, इसी तरह, अन्य जन्मजात उपभेदों में एक अलग संक्रमण प्रोफाइल हो सकता है. इसलिए यह महत्वपूर्ण है कि शोधकर्ता उनके चूहों की पृष्ठभूमि तनाव के बारे में पता होना और उचित नियंत्रण चूहों का उपयोग करें. इसके अलावा, वहाँ माउस माउस परजीवी निकासी में भिन्नता हो तो वहाँ चिंता का विषय के लिए कोई ज़रूरत नहीं है अगर कुछ सामान्य प्रतिरोधी नियंत्रण चूहों 30 कीड़े को 21 दिनों के बाद संक्रमण पर है. साथ ही, अतिसंवेदनशील चूहों हमेशा एक पूर्ण कीड़ा 200 गिनती बोझ नहीं बनाए रखने के लिए, लेकिन लगभग 75 से 200 प्रति cecum कीड़े से रेंज कर सकते हैं. इस भिन्नता को भी विभिन्न सुविधाओं में रखे चूहों की आंत वनस्पति में प्राकृतिक परिवर्तन के लिए जिम्मेदार हो सकता है.
एक कारक है कि प्रतिकूल Trichuris muris संक्रमण को प्रभावित करता है pinworm की उपस्थिति है. Pinworms Trichuris के रूप में एक ही शारीरिक साइट को संक्रमित और एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है कि Trichuris अध्ययन का व्याख्या उलझाना कर सकते हैं प्रेरित. इसके अलावा, pinworm उपचार (albendazole, fenbendazole) Trichuris भी मारता है . इस प्रयोगात्मक प्रक्रिया में, हम चूहों कि विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त शर्तों के तहत रखा जाता है का उपयोग करें, और यह सर्वोपरि है कि pinworm प्रयोगात्मक चूहों से पहले और दौरान Trichuris muris संक्रमण मुक्त रखा जाना.
कुछ मामूली अंक शोधकर्ताओं के बारे में पता होना चाहिए:
- अंडे, Pbs नहीं पानी में रखा जाना चाहिए.
- अंडे बहुत भारी होते हैं और इसलिए प्रत्येक माउस को प्रसव से पहले resuspended होना चाहिए. इसके अलावा, केवल अंडे एक समय में एक माउस संक्रमित के लिए पर्याप्त मात्रा में लोड करने के लिए, के रूप में वे सिरिंज में आदी हो जाएगा.
- कुछ दुर्लभ उपभेदों संक्रामकता में सेक्स मतभेदों को दिखाने, लेकिन ज्यादातर मामलों में, या तो पुरुषों या महिलाओं Trichuris muris संक्रमण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
- भोले चूहों संक्रमित चूहों के रूप में एक ही पिंजरे में रखे जा सकते हैं वहाँ के रूप में इस मॉडल के साथ संक्रमण के क्षैतिज हस्तांतरण की कोई चिंता नहीं है.
कुल मिलाकर, Trichuris muris संक्रमण एक साधारण प्रक्रिया है कि मॉडल Th2 निर्भर उन्मुक्ति प्रदर्शन है और व्यक्तिगत शोधकर्ताओं आवश्यकताओं के अनुरूप अनुकूलित किया जा सकता है.
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Disclosures
जानवरों पर प्रयोगों ब्रिटिश कोलंबिया विश्वविद्यालय द्वारा निर्धारित दिशा निर्देशों और नियमों के अनुसार में प्रदर्शन किया गया.
Acknowledgments
इस काम के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान कनाडा MSH (95,368, एमओपी 89,773 और CZ एमओपी - 106,623) और अभिनव के लिए कनाडा फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था. SCM गैस्ट्रोएंटरोलॉजी postdoctoral फैलोशिप के एक / CIHR कनाडा के एसोसिएशन के प्राप्तकर्ता है. CZ एक CIHR नई अन्वेषक है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal Feeding Needles (18 x 1½") | Popper & Sons, Inc. | 7912 | |
| Smooth curved Forceps | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5047 | |
| DMEM | GIBCO, by Life Technologies | 11965 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) | Jackson Laboratory | 005557 | These are the mice we used, however, any immunodeficient mice or susceptible strain should work. |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| 2 ml tubes | Axygen Scientific | MCT-200-C | |
| 15 ml tubes | Falcon BD | 352096 | |
| 6 well plates | Falcon BD | 353046 | |
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| α-RELMβ antibody | PeproTech Inc | 0694270Rb |
References
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