Simple Drosophile Dissection ommatidie et imagerie

Résumé

Le facteur limitant dans l'utilisation de l'adulte Drosophile pour étudier la neurodégénérescence et de biologie cellulaire est l'imagerie difficile de processus intracellulaires. Nous décrivons la dissection des ommatidies simple pour générer un bona fide culture primaire de cellules neuronales, qui peut être soumis à un traitement médicamenteux et d'imagerie de pointe.

Résumé

La mouche des fruits Drosophila melanogaster a apporté une contribution inestimable à la recherche en neurosciences et a été largement utilisée comme modèle pour les maladies neurodégénératives en raison de sa puissante génétique ^1. L'œil de la mouche en particulier, a été l'organe de choix pour la recherche neurodégénérescence, étant la partie la plus accessible et la vie-dispensable de la drosophile système nerveux. Cependant la mise en garde importante des yeux intacts, c'est la difficulté, à cause de l'autofluorescence intense du pigment, dans les événements d'imagerie intracellulaire, telles que l'autophagie dynamiques ^2, qui sont primordiales pour la compréhension de la neurodégénérescence.

Nous avons récemment utilisé la dissection et la culture du seul ommatidies ³ qui a été essentielle pour notre compréhension des dysfonctionnements autophagie dans un modèle de vol du Dentatorubro-pallido Atrophie (DRPLA) ^{3, 4.}

Nous avons maintenant le rapport une description complète de cette technique (fig. 1), adapté de ⁵ études électrophysiologiques, qui est susceptible d'augmenter considérablement la possibilité de voler pour les modèles neurodégénérescence. Cette méthode peut être adaptée aux images en direct des événements subcellulaire et de surveiller l'administration de médicaments efficaces sur les cellules photoréceptrices (Fig. 2). Si elle est utilisée en combinaison avec ^6-8 techniques de mosaïque, les réponses des cellules génétiquement différentes peuvent être dosés en parallèle (Fig. 2).

Protocole

1. Dissection de la rétine chez la drosophile

1. Remplir un puits d'une lame de verre 3 puits avec du tampon phosphate salin (PBS 1X), puis par les mouches anesthésier CO _2. Les mâles et les femelles peuvent être utilisés pour cette expérience.
2. Une fois que les mouches sont anesthésiés, ramasser une seule mouche à l'aide de pinces et le déposer dans le petit plat de PBS.
3. Sous un microscope à dissection, pincez la trompe avec une pince, puis détacher la tête de l'organisme par la rupture du cou en utilisant une deuxième série de pinces.
4. En tenant la tête de voler de la trompe, coupé en deux le long de la ligne ....

Discussion

La dissection ommatidie seule présentée ici permet de collecter des informations plus profondes sur les processus biologiques cellulaires, comme la neurodégénérescence, quand modélisés dans l'œil de drosophile. Les neurones photorécepteurs sont plus facilement accessibles que d'autres neurones et ils cytoplasme est particulièrement importante, et donc adapté pour étudier la dynamique des vésicules, dans les cellules mêmes utilisé avec compétence dans de nombreux modèles pour quantifier la neurodégénéres.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Société	Numéro de catalogue	Commentaires (optionnel)
Portable Distributeur de CO2	Flystuff	59-150	Recharges également disponible
DUMONT brucelles n ° 5	AGAR scientifique	T5034
3-Bien lame de verre	EMS	71561-01
Ciseaux Micro	VWR	HAMMHSB516-09
Schneider Medium	VWR	733-1663
Lysotracker Rouge MDN-99	Invitrogen	L7528
Diapositives Superfrost	VWR	631-0108
Vectashield au DAPI	Vector Labs	H-1200
Lamelles	VWR	631-1336