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Une caractéristique de la malignité du cancer est une invasion et la métastase. Dans certains cancers (e. g. Gliome 2), invasion locale dans les tissus environnants sains est à l'origine de la maladie et la mort. Pour d'autres cancers (e. g. Sein, poumon, etc.), C'est le processus de métastase, dans lequel les cellules tumorales de passer d'une masse tumorale primaire, colonisent les sites distale et finalement contribuer à une défaillance organique, qui mène éventuellement à la morbidité et la de mortalité 3. Il a été estimé que l'invasion et les métastases sont responsables de 90% des décès par cancer 4. En conséquence, il a été un vif intérêt dans l'identification des processus moléculaires et les médiateurs protéiques critique de l'invasion et les métastases à des fins d'améliorer le diagnostic et le traitement 5.
Un défi pour les scientifiques est de développer un cancer des dosages invasion qui ressemble plus suffisamment à la situation in vivopour permettre la modélisation des maladies précises 6. Deux dimensions tests de motilité des cellules sont seulement informatifs sur un aspect de l'invasion et ne prennent pas en compte remodelage matriciel protéine extracellulaire (ECM) qui est aussi un élément critique. Récemment, la recherche a affiné notre compréhension de l'invasion des cellules tumorales et des cellules individuelles a révélé que peuvent se déplacer par des modes allongés ou arrondis 7. En outre, il a été plus grande appréciation de la contribution de l'invasion collective, dans laquelle les cellules envahir en brins, les feuilles et les grappes, en particulier dans les tumeurs hautement différenciées qui maintiennent des caractéristiques épithéliales, à la propagation du cancer 8.
Nous présentons une méthode raffinée 9 pour examiner les contributions des protéines candidates à l'invasion collective 10. En particulier, par des pools d'ingénierie séparées des cellules d'exprimer différentes protéines fluorescentes, il est possible de disséquer moléculairement les activités et Proteins nécessaires dans les cellules de leader par rapport à ceux requis dans les cellules suivantes. L'utilisation de l'ARNi constitue l'outil moléculaire pour démonter expérimentalement les processus impliqués dans l'invasion des cellules individuelles ainsi que dans différentes positions d'invasion collective. Dans cette procédure, des mélanges de cellules marqué par fluorescence sont plaquées sur le fond d'un insert Transwell préalablement rempli par Matrigel ECM protéines, a ensuite permis d'envahir "par le haut» à travers le filtre et dans le Matrigel. Reconstruction des piles d'images de la série Z, obtenue par imagerie confocale, en trois dimensions des représentations permet de visualiser collectivement brins d'invasion et d'analyse de la représentation de cellules marqué par fluorescence dans les principaux postes suivants par rapport.