Décrit ici est une technique dans laquelle lipopolysaccharide est injecté dans la glande mammaire en lactation de la souris via le mamelon pour simuler la mammite, une condition souvent causée par une infection bactérienne. Des résultats d'injection de lipopolysaccharide à l'augmentation du facteur nucléaire kappa B (NF-kB) de signalisation, visualisé par l'imagerie de bioluminescence d'une souris NF-kB rapporteur de la luciférase.
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Article de méthode
Injection intra-canalaire de LPS comme un modèle de souris de la mammite: signalisation visualisée via un transgénique NF-kB Reporter
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les modèles animaux de maladies humaines sont nécessaires afin d'étudier rigoureusement les étapes de progression de la maladie et des mécanismes connexes, et finalement, comme modèles pré-cliniques pour tester les interventions. Dans ces méthodes, nous décrivons une technique dans laquelle le lipopolysaccharide (LPS) est injecté dans la glande mammaire en lactation de la souris via le mamelon, mastite modélisation efficace, ou l'inflammation, de la glande. Il en résulte une augmentation des infections simulées du facteur nucléaire kappa B (NF-kB) de signalisation, tels que révélés par l'imagerie de bioluminescence d'une souris NF-kB rapporteur de la luciférase 1.
Notre but ultime dans le développement de ces méthodes était d'étudier l'inflammation associée à la mammite dans la glande en lactation, qui comprend souvent des rougeurs, de l'enflure et l'infiltration de cellules immunitaires 2,3. Par conséquent, nous étions tout à fait conscients que l'incision ou tout autre type de blessure de la peau, le mamelon, ou de la glande afin d'introduire les LPS pourraitpas être utilisés dans nos méthodes comme l'approche serait probablement confondre la lecture de l'inflammation. Nous avons également souhaité une méthode straight-forward qui ne nécessitent pas spécialement conçus dessinés à la main pipettes ou l'utilisation de micro-manipulateurs d'organiser ces outils spécialisés en place. Ainsi, nous avons décidé d'utiliser une seringue à insuline disponible dans le commerce et d'injecter l'agent dans le conduit mammaire d'un mamelon intacte. Cette méthode a été un succès et nous a permis d'étudier l'inflammation associée à l'injection de LPS, sans effets supplémentaires recouvertes par le processus d'injection. En outre, cette méthode a également utilisé un NF-kB luciférase reporter souris transgénique et la technologie d'imagerie bioluminescente pour montrer visuellement et quantitativement augmenté de signalisation NF-kB dans la glande LPS-injecté 4.
Ces méthodes sont d'intérêt pour les chercheurs de nombreuses disciplines qui souhaitent modèle de maladie dans la glande mammaire en lactation, en fin de compte, la techniquedécrit ici pourrait être utilisée pour l'injection d'un certain nombre de substances, et ne se limite pas au LPS seulement.
Protocole
Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvés par les soins des animaux Vanderbilt University institutionnel et Use Committee.
1. Préparation des souris transgéniques
- Chez les souris femelles, positifs pour le journaliste NGL (N F-KB-G FP-L uciferase) transgène (décrit précédemment 1) sont utilisés pour cette procédure. Lorsque les femmes sont au moins 6 semaines d'âge, les accoupler avec un mâle de type sauvage FVB. Harem reproduction peut être utilisé (jusqu'à 4 femelles dans une cage avec 1 mâle). (S'il vous plaît noter: des souris de souche FVB ont été utilisés pour l'é....
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Discussion
Ici, nous utilisons une souris transgénique journaliste NF-kB et une technique d'injection optimisé à la mammite modèle, une inflammation du tissu mammaire le plus souvent causée par une infection bactérienne. L'étape la plus critique dans cette procédure est l'injection intracanalaire lui-même.
Dans la pratique, il est généralement difficile de déterminer si l'injection intracanalaire a été couronnée de succès. L'injection des agents (LPS ou PBS) devrait se sentir fluide.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Ce travail a été financé par le NIH subvention accordée à CA113734 F Yull et le ministère des Affaires des anciens combattants (TS Blackwell).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Nom du réactif | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
| Lipopolysaccharide d'Escherichia coli (LPS) | Sigma | L 2880 | sérotype 055: B5 |
| PBS | Mediatech, Inc | 46-013 CM- | |
| 31 seringue à insuline Gauge | Becton Dickinson | 328438 | Aiguille courte |
| Forceps | World Precision Instruments | 15908 | |
| Dissection portée | Leica | M3Z | |
| Terrell Isoflurane, USP | Minrad Inc pour Rx Elite | NDC 66794-011-25 | |
| IVIS 200 système d'imagerie | Caliper (anciennement Xenogen) | N / A | |
| Seringue pour injection luciférine | Becton Dickinson | 309597 | 1cc; 26G5 / 8 |
| D-luciférine Firefly, monohydrate de sel de sodium (Substrat luciférine) | Chimie et Biologie Biosynth | L-8240 | Diluer à 10 mg / ml |
Références
- Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. Duration and intensity of NF-κB activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury. The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).
- Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E.
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Réimpressions et autorisations
