Deux techniques peuvent être utilisées pour établir ce modèle: l'injection d'une suspension de cellules cancéreuses dans le mur caecal ou la transplantation d'un morceau de tumeur sous-cutanée sur le caecum. Ce modèle est utile pour étudier l'évolution naturelle du cancer colorectal et le test de nouveaux agents thérapeutiques contre le cancer colorectal.
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Article de méthode
Modèle de souris orthotopique du cancer colorectal
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le modèle de tumeur sous-cutanée traditionnelle est de moins de idéales pour étudier le cancer colorectal. Des modèles de souris orthotopique de cancer colorectal, qui disposent de plus en plus les cellules cancéreuses à leur emplacement naturel, de reproduire la maladie humaine avec une grande fidélité. Deux techniques peuvent être utilisées pour établir ce modèle. Les deux techniques sont similaires et nécessitent une anesthésie de la souris et la laparotomie pour l'exposition du caecum. Une technique consiste à injection d'une suspension de cellules du cancer colorectal dans le mur caecal. Les cellules cancéreuses sont d'abord mises en culture, récoltés quand subconfluentes et préparée comme une suspension cellulaire unique. Un petit volume de cellules est injecté lentement pour éviter les fuites. L'autre technique consiste à la greffe d'un morceau de tumeur sous-cutanée sur le caecum. Une souris avec une tumeur sous-cutanée préalablement établi colorectal est euthanasié et la tumeur est enlevée en utilisant une technique stérile. La pièce est divisée tumorale en petits morceaux pour la transplantation d'une autre souris. Avant la transplantation, le mur du cæcum est légèrement endommagé afin de faciliter l'infiltration des cellules tumorales. Le temps de développer des tumeurs primaires et des métastases hépatiques varie en fonction de la technique, la lignée cellulaire, et des espèces de souris utilisée. Ce modèle de souris orthotopique est utile pour étudier l'évolution naturelle du cancer colorectal et le test de nouveaux agents thérapeutiques contre le cancer colorectal.
Protocole
Préparation des cellules I.
- Cellules du cancer colorectal sont mis en culture et récoltés lors subconfluentes.
- Une suspension cellulaire unique est préparé en tampon phosphate salin et conservé sur glace.
II. Préparation tumeur
- Une souris avec une tumeur sous-cutanée préalablement établi colorectal est euthanasié.
- La tumeur est enlevée sous-cutanée à l'aide technique stérile et divisées en 2-3 morceaux mm
- Les morceaux de tumeur sont conservés dans un tampon phosphate salin sur la glace.
III. Préparation de la souris
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Discussion
Bien que des modèles de souris de tumeurs sous-cutanées sont faciles à établir et à surveiller, il est clair que ce modèle ne peut pas répliquer le site original anatomique du cancer colorectal. En raison de la différence dans le micro, les cellules du cancer colorectal poussant sous la peau a été démontré que le changement de leur phénotype et échouent presque toujours au progrès et à métastaser 1,2. En fait, la réponse tumorale au traitement peut varier considérablement selon que les cellules cancéreuses sont implantées dans un.......
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Remerciements
Département de chirurgie, Université de Californie à San Francisco
Raymond Shaheen, MD
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Milieux de culture cellulaire et composants | varient selon la lignée cellulaire utilisée | ||
| Solution saline tamponnée au phosphate | BioWhittaker | 17-512F | également vendue par plusieurs autres fournisseurs |
| Tubes de centrifugation de 15 mL, en polypropylène | Corning | 430790 | |
| Plaques de 6 puits avec couvercle | BD Biosciences | 353046 | |
| Pinces à iris, droites, à extrémités striées | World Precision Instruments, Inc. | 15914 | il est préférable d'avoir une paire de ces instruments |
| Ciseaux de dissection à iris, droits, effilés | World Precision Instruments, Inc. | 14393 | |
| Porte-aiguille (ordinaire) | World Precision Instruments, Inc. | 14109 | |
| Porte-aiguille (Castroviejo) | World Precision Instruments, Inc. | 14137 | |
| Cidex Plus | World Precision Instruments, Inc. | 7364 | les instruments doivent être stérilisés périodiquement en autoclave, mais peuvent également l'être par trempage dans du Cidex |
| Fil de suture 6-0 ou 7-0 | pour le caecum ; gracieuseté du Département de chirurgie, UCSF | ||
| Fil de suture 3-0 ou 4-0 | pour la paroi abdominale ; gracieuseté du Département de chirurgie, UCSF | ||
| Machine à anesthésie / Isoflurane | J.A. Baulch and Associates | 3206 | également vendue par plusieurs autres fournisseurs |
| Plaque chauffante jetable, 6" x 6" | Prism Technologies | 20419 | |
| Ruban orange, 13 mm x 13 m | Fisher Scientific | 15901F | pour immobiliser la souris anesthésiée |
| Tondeuse Pro-Cord/Cordless Trimmer | Oster Professional Products | 78997-010 | pour raser le pelage de la souris |
| Bétadine | Fisher Scientific | 19-027132 | peut également être achetée dans n'importe quel magasin de fournitures médicales |
| Compresse 2 x 2, 3 plis | Johnson & Johnson | 7635 | peut également être achetée dans n'importe quel magasin de fournitures médicales |
| Champ stérile, barrière, 16" x 29" | Johnson & Johnson | 0905 | peut également être acheté dans n'importe quel magasin de fournitures médicales |
| Applicateurs à embout coton, 6" | Fisher Scientific | 14-960-3Q | peuvent également être achetés dans n'importe quel magasin de fournitures médicales |
| Seringue de 10 cc, embout Luer lock | BD Biosciences | 309604 | |
| Seringue de 1 cc, tuberculine, embout lisse | BD Biosciences | 309602 | |
| Aiguille 27 1/2 G | BD Biosciences | 305109 | |
| Aiguille 30 G | BD Biosciences | 305106 |
Références
- Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Dig Surg. 22, 16-25 (2005).
- Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. Review of colorectal cancer and its metastases in r....
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