L'implantation des réseaux organisés de microfils pour une utilisation dans une seule unité enregistrements électrophysiologiques présente un certain nombre de défis techniques. Méthodes pour effectuer cette technique et l'équipement nécessaire sont décrits. En outre, l'usage bénéfique des baies de microfilaires organisés pour enregistrer des sous-régions distinctes de neurones avec une grande sélectivité spatiale est discutée.
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Article de méthode
Une procédure d'implantation de tableaux organisés de microfils pour enregistrements unitaires dans Awake, se comportant Animaux
Dans cet article
Résumé
Résumé
Dans les enregistrements électrophysiologiques in vivo chez l'éveillé, animal comporter fournir une méthode puissante pour comprendre la signalisation neuronale au niveau d'une seule cellule. La technique permet expérimentateurs pour examiner le temps et régional modes de cuisson spécifiques afin de corréler les potentiels d'action enregistrés avec un comportement continu. En outre, les enregistrements unitaires peuvent être combinés avec une pléthore d'autres techniques afin de produire des explications détaillées de la fonction neuronale. Dans cet article, nous décrivons l'anesthésie et la préparation de micro-fil implantation. Par la suite, nous énumérons les équipements nécessaires et les étapes chirurgicales à insérer avec précision une gamme de micro-fil dans une structure cible. Enfin, nous décrivons brièvement l'équipement utilisé pour enregistrer de chaque électrode dans le tableau. Les tableaux de microfilaires fixes décrits sont bien adaptés pour l'implantation chronique et permettent des enregistrements longitudinaux des données de neurones dans presque toutes les preparati comportementsur. Nous discutons de traçage des pistes d'électrodes pour trianguler positions microfilaires ainsi que des façons de combiner microfils implantation avec des techniques d'immunohistochimie afin d'augmenter la spécificité anatomique des résultats enregistrés.
Introduction
Des enregistrements électrophysiologiques permettent aux scientifiques d'examiner les propriétés électriques des cellules biologiques. Dans le système nerveux central, où les impulsions électriques servent de mécanisme de signalisation, ces enregistrements sont d'une importance particulière pour la compréhension de la fonction neurale 2.1. Au cours des enregistrements unitaires dans comporter animaux, une micro-électrode qui a été inséré dans le cerveau est capable d'enregistrer des changements dans la génération d'un neurone de potentiels d'action au fil du temps.
Alors que de nombreuses techniques permette....
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Protocole
Le plus grand soin doit être pris pour maintenir des conditions aseptiques (comme décrit dans le Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire 9) lors de la préparation et la conduite de la procédure suivante. Le protocole suivant est en conformité avec le Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire et a été approuvé par le soin et l'utilisation des animaux Commission institutionnelle de l'Université Rutgers. On estime que les procédures ultérieures, il faudra 3-6 heures pour compléter.
L'implantation de la baie Microwire:
- La place des animaux sous anesthésie à l....
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Résultats
Une liste de l'équipement utilisé par ce laboratoire pour l'enregistrement de signaux électrophysiologiques peuvent être trouvées dans le tableau 3. Après récupération de la chirurgie, simples unités sont enregistrées en branchant un headstage gain unité dans le connecteur implanté. Cette headstage est relié par un câble à un commutateur, qui est capable d'une rotation libre sans interruption dans l'enregistrement électrophysiologique grâce à l'utilisation de bagues collectrices élec.......
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Discussion
Enregistrements extracellulaires représentent une technique expérimentale puissante qui peut être incorporé dans presque toute la préparation expérimentale en neurosciences. Fils qui ont été implantés dans des réseaux organisés peuvent être suivis comme leurs arbres traversent le cerveau et dans leur région cible (figure 5A). Quand une petite lésion, post-expérimental est créé à la pointe de micro-fil non isolé pour créer un petit dépôt de fer du fil d'acier inoxydable, on peut précisément marquer l.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont aucun intérêt financier concurrents à divulguer.
Remerciements
Cette étude a été financée par le National Institute on Drug Abuse accorde 006 886 DA (MOW) et DA 032270 (DJB).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Tableau 1. Liste des matériaux chirurgicaux. | |||
| Gauze | Fisher (MooreBrand) | 19-898-144 | |
| Cotons-tiges | Fisher (Puritan) | S304659 | |
| Nembutal (Pentobarbital) | Sigma Aldrich | P3761 | |
| Atropine Methyl Nitrate | Sigma Aldrich | A0382 | |
| Baytril (Enrofloxacin) | Butler Shein ( Bayer) | 1040007 | |
| Chlorhydrate de kétamine | Butler Shein | SKU# 023061 | |
| Bétadine (Povidone-Iode) | Fisher (Perdue) | 19-066452 | |
| Stereotax | Kopf | Model 900 | |
| Outil de cautérisation | Stoelting | 59017 | |
| Microscope de dissection | Nikon | SMZ445 | |
| Foret dentaire | Buffalo | 37800 | |
| Bactériostatique Saline | Bulter Schein | 8973 | |
| Bijoux Vis | Stoelting | 51457 | |
| Microsondes | à réseau de microfils Personnalisé | (flexible) | |
| Fil de terre | Omnetics | Prise | |
| Acrylique dentaire | Fisher (BAS) | 50-854-402 | |
| Sutures résorbables | Fisher (Ethicon) | NC0258473 | |
| Puralube (pommade/lubrifiant ophtalamique) | Fisher (Henry Schein) | 008897 | |
| Tableau 2. Liste des instruments chirurgicaux. | |||
| 2x Microforceps | George Tiemann Co. | #160-57 | Multi-usage (par exemple, dégager les débris dans la fenêtre du crâne) |
| 2x Pince | George Tiemann Co. | #160-93 | Multi-usage (par exemple attacher des sutures) |
| 6x Hémostats | George Tiemann Co. | #105-1125 | Pince et incision ouverte |
| 1x Petits ciseaux | George Tiemann Co. | #105-411 | Couper les sutures après avoir attaché |
| 1x pince à tissus | George Tiemann Co. | #105-222 | Tenir le tissu pendant la suture |
| 1x Porte-aiguille | George Tiemann Co. | #105-1259 Maintien de | l’aiguille de suture |
| 1x Porte-scalpel (avec lame #11) | George Tiemann Co. | #105-80 (avec lame #105-71) | Faire une incision du crâne |
| 1x #22 Lame de scalpel | George Tiemann Co. | #160-381 | Rasage du cuir chevelu |
| 1x Spatule chirurgicale | George Tiemann Co. | #160-718 | Grattage du crâne pour effacer les tissus sur le crâne |
| Vis de machine/bijouterie Divers | N/A | 0/80 x 1/8" | |
| Tableau 3. Liste des équipements pour l’enregistrement des signaux électrophysiologiques. | |||
| Microwire Array & Connecteur | Micro Probe, Inc. (Gaithersburg, MD) | N/A (N° de pièce basé sur les caractéristiques du réseau) | Implanté crânalement dans la région d’enregistrement cible. Les réseaux sont personnalisés en fonction de l’espacement des fils, de la longueur, de l'etc. |
| Single-Gain Harness/Headstage | M.B. Turnkey Designs (Hillsborough, NJ) | Proj 1200 | Amplification initiale du signal neuronal ; permet la propagation de petits signaux neuronaux. |
| Commutateur (et pivot de fluide en option) | Plastics One, Inc. (Roanoke, VA) | SL18C | Permet aux animaux de tourner librement tout en propageant le signal électrique au préamplificateur |
| Préamplificateur | M.B. Turnkey Designs (Hillsborough, NJ) | Proj 1198 | Amplifie différentiellement les signaux neuronaux contre une électrode de référence. |
| Filtre et amplificateur | M.B. Turnkey Designs (Hillsborough, NJ) | Proj 1199 | filtre et amplifie davantage le signal amplifié différentiellement. |
| Ordinateur d’acquisition | EnGen (Phoenix, AZ) | N/A (Custom Build) | Exécute des logiciels et du matériel pour l’acquisition de données comportementales et neuronales. |
| Carte A/D ; | Traduction de données (Marlboro, MA) | DT-3010 | Numérise les signaux neuronaux pour l’échantillonnage par ordinateur. |
| carte d’E/S numériques | (Norton, MA) | PCI CTR-05 | Acquiert des entrées et des sorties comportementales |
Références
- Carter, M., Shieh, J. C. Electrophysiology In: Guide to research techniques in neuroscience. , Academic Press. (2009).
- Aston-Jones, G., Siggins, G. R. Electrophysiology. In: Psychopharmacology: The Fourth Generation of Progress. Kupfer, D., Bloom, F. E. , Raven Press. (1995).
- Root, D.....
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Réimpressions et autorisations
