Vasculaire Transfert de gènes à partir de stent métallique surfaces à l&#39;aide vecteurs adénoviraux Tethered par hydrolysables de la Croix-linkers

Ilia Fishbein; Scott P. Forbes; Richard F. Adamo; Michael Chorny; Robert J. Levy; Ivan S. Alferiev

doi:10.3791/51653

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Vasculaire Transfert de gènes à partir de stent métallique surfaces à l'aide vecteurs adénoviraux Tethered par hydrolysables de la Croix-linkers

9.4K vues

⸱

DOI :

10.3791/51653

⸱

12 août 2014

Ilia Fishbein¹ , Scott P. Forbes¹ , Richard F. Adamo¹ , Michael Chorny¹ , Robert J. Levy¹ , Ivan S. Alferiev¹

¹Department of Pediatrics, Division of Cardiology, The Children's Hospital of Philadelphia, University of Pennsylvania

Dans cet article

Résumé

Ces études rendent compte de la fixation réversible des vecteurs de gènes adénoviraux sur des surfaces métalliques sans revêtement de stents et de disques à mailles modèles. La libération prolongée de particules virales capables de transduction subordonnée à l’hydrolyse des agents de réticulation utilisés pour l’immobilisation des vecteurs entraîne une expression durable du transgène spécifique au site dans les cellules vasculaires et dans les artères munies d’une endoprothèse.

Résumé

Resténose intra-stent présente une complication majeure des procédures de revascularisation base d'endoprothèse largement utilisés pour rétablir le flux sanguin dans les segments rétrécies de manière critique des artères coronaires et périphériques. Stents endovasculaires capables de libérer accordable de gènes ayant une activité anti-resténose peut présenter une stratégie alternative à l'heure actuelle utilisés stents à élution médicamenteuse. Afin de réaliser l'application clinique, les stents de gènes élution doivent présenter une cinétique prévisibles de gène libération de vecteur de stent immobilisé et la transduction spécifique de site de la vascularisation, tout en évitant une réponse inflammatoire excessive typiquement associé aux revêtements polymères utilisés pour le piégeage physique du vecteur. Cet article décrit une méthodologie détaillée pour tethering sans manteau de vecteurs de gènes adénoviraux de stents basé sur une liaison réversible des particules adénoviraux à polyallylamines bisphosphonate (PABT) -Modified surface en acier inoxydable par des agents de réticulation hydrolysables (HC). Une famille deHC bifonctionnel (amine et thiol-réactif) avec un t _1/2 moyenne de l'hydrolyse de l'ester dans la chaîne comprise entre 5 et 50 jours ont été utilisés pour lier le vecteur avec le stent. La procédure d'immobilisation vecteur est typiquement réalisée à l'intérieur de 9 h et se compose de plusieurs étapes: 1) l'incubation des échantillons de métal dans une solution aqueuse de PABT (4 h); 2) la déprotection des groupes thiol installés dans PABT avec le tris (2-carboxyéthyl) phosphine (20 min); 3) augmentation de la capacité réactif thiol de la surface métallique en faisant réagir les échantillons avec de la polyéthylèneimine pyridyldithio dérivés avec des groupes (PDT) (2 heures); 4) la conversion des groupes thiols de PDT avec du dithiothréitol (10 min); 5) la modification des adénovirus avec HC (1 h); 6) la purification de particules d'adénovirus modifiés par chromatographie d'exclusion stérique colonne (15 min) et 7) l'immobilisation des particules adénovirales thiol réactif sur la surface de l'acier thiolé (1 h). Cette technique a une large applicabilité potentielle au-delà des stents,en facilitant l'ingénierie de surface des dispositifs bioprothèses pour améliorer leur biocompatibilité grâce à la prestation de gène substrat médiée par les cellules d'interfaçage matériel étranger implanté.

Introduction

L'efficacité de la thérapie génique en tant que modalité thérapeutique est entravée par la capacité de ciblage de mauvais vecteurs de thérapie génique ^1,2. L'absence de résultats de ciblage appropriés dans les niveaux sous-thérapeutiques de l'expression du transgène à l'emplacement cible et conduit à une large diffusion des vecteurs aux organes non ciblés ^3, y compris ceux qui sont responsables pour le montage des réponses immunitaires à la fois contre le vecteur et produit thérapeutique codé ^{4, 5.} Un potentiel signifie pour compenser la promiscuité de transduction et de promouvoir le ciblage est d'introduire des v....