Culture primaire de souris dopaminergiques neurones

Florence Gaven; Philippe Marin; Sylvie Claeysen

doi:10.3791/51751

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Article de méthode

Culture primaire de souris dopaminergiques neurones

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DOI :

10.3791/51751

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8 septembre 2014

Florence Gaven¹^,²^,³ , Philippe Marin¹^,²^,³ , Sylvie Claeysen¹^,²^,³

¹CNRS, UMR-5203, Institut de Génomique Fonctionnelle, Montpellier, ²Inserm, U661, Montpellier, ³Universités de Montpellier

Dans cet article

Résumé

Les neurones dopaminergiques jouent un rôle régulateur essentiel dans le cerveau. Leur perte est associée à la maladie de Parkinson. Dans cette vidéo, nous montrons comment générer des cultures primaires de neurones dopaminergiques centraux à partir de mésencéphale embryonnaire de souris. De telles cultures sont utiles pour étudier l’extrême vulnérabilité de ces neurones à divers stress.

Résumé

Les neurones dopaminergiques représentent moins de 1% du nombre total de neurones dans le cerveau. Cette faible quantité de neurones du cerveau régule les fonctions importantes telles que le contrôle moteur, la motivation et la mémoire de travail. Neurones dopaminergiques nigro-strié sélectivement dégénèrent dans la maladie de Parkinson (MP). Cette perte neuronale progressive est sans équivoque associée aux moteurs symptômes de la pathologie (bradykinésie, tremblement de repos, et une rigidité musculaire). Le principal agent responsable de la dégénérescence des neurones dopaminergiques est encore inconnue. Cependant, ces neurones semblent être extrêmement vulnérables dans diverses conditions. Les cultures primaires constituent l'un des modèles les plus pertinents pour étudier les propriétés et les caractéristiques des neurones dopaminergiques. Ces cultures peuvent être soumis à différents agents de stress qui imitent PD pathologie et de composés neuroprotecteurs pour arrêter ou ralentir la dégénérescence neuronale. Les nombreux modèles de souris transgéniques de la MP qui ont été généATED au cours de la dernière décennie a encore augmenté l'intérêt des chercheurs pour les cultures neuronales dopaminergiques. Ici, le protocole vidéo met l'accent sur la dissection fine de cerveaux de souris embryonnaires. Excision précise de mésencéphale ventral est crucial d'obtenir des cultures de neurones suffisamment riches en cellules dopaminergiques pour permettre des études ultérieures. Ce protocole peut être réalisée avec des souris transgéniques embryonnaires et est approprié pour la coloration par immunofluorescence, de PCR quantitative, la quantification de second messager, ou mort neuronale évaluation / de survie.

Introduction

La dopamine, un des neurotransmetteurs du cerveau essentielles ^1,2, est surtout rejeté par dopaminergiques du mésencéphale (DA) des neurones. La majorité des neurones dopaminergiques de séjourner dans la partie ventrale du mésencéphale ^6.2. Schématiquement, les neurones dopaminergiques du mésencéphale peuvent être divisés en trois anatomiquement et fonctionnellement distinctes des systèmes de projection: mesostriatal, mésolimbique et les voies mésocorticales ^2,5. La voie nigro est impliqué dans le comportement moteur, les voies mésolimbiques jouent un rôle important dans le renforcement, la motivation et l'apprentissage, alors que....