Une méthode pour évaluer les fonctions effectrices induite par le Fc induites par les anticorps spécifiques d’hémagglutinine de grippe

Résumé

Les auteurs décrivent une méthode pour mesurer l’activation des fonctions effectrices Fc-médiée par les anticorps qui ciblent l’hémagglutinine du virus influenza. Ce test peut également être adapté afin d’évaluer la capacité des anticorps monoclonaux ou polyclonaux sérums ciblant d’autres glycoprotéines de surface virales à provoquer l’immunité induite par le Fc.

Résumé

Les anticorps jouent un rôle crucial dans la réponse immunitaire innée et adaptative contre des pathogènes viraux par le biais de leurs domaines de liaison de l’antigène et Fc-régions de couplage. Ici, nous décrivons comment mesurer l’activation du Fc fonctions effectrices par anticorps monoclonal ciblant l’hémagglutinine de virus de la grippe à l’aide d’une lignée de cellules Jurkat génétiquement modifiée exprimant une activation de type Fc 1-FcγR. à l’aide de cette méthode, la contribution des interactions spécifiques de Fc-FcγR conférés par immunoglobulines peut être déterminée à l’aide d’un test in vitro .

Introduction

L’immunité prévue par le vaccin contre la grippe saisonnière a traditionnellement été évaluée par l’hemagglutination inhibition (HI) test¹, qui mesure la présence d’anticorps qui ciblent le site de liaison du récepteur de l’hémagglutinine. Ces anticorps HI-active peuvent conférer une immunité stérilisante, mais sont généralement étroites dans leur largeur de protection, en accordant l’immunité à seulement un peu select souches du virus grippal. L’isolement et la caractérisation d’anticorps monoclonaux largement qui reconnaissent l’hémagglutinine (HA) suggèrent que le développement d’un vaccin antigrippal universel est à portée de main

Protocole

Les expériences réalisées dans ce manuscrit ont été faites code institutionnel suivant Icahn School of Medicine de l’éthique et des règlements.

1. expression de l’hémagglutinine Virus Influenza par Transfection ou Infection

Transfection :

1. Cellules humaines embryonnaires de rein (HEK 293 t) plaque à une densité de 2 x 10⁴ cellules/puits dans une culture de tissus blanche traitement plaque 96 puits et laisser reposer pendant 4 h dans un incubateur à 37 °C (avec 5 % de CO₂).
2. Transfecter cellules avec 100 ng d’ADN codant pour l’hémagglutinine....

Résultats

Nous avons démontré qu’une tige spécifique mAb, 6F12, mais pas de tête spécifique une tête spécifique mAb, PY102, a été capable d’activer les cellules tueuses naturelles primaires par ses CD107a et l’interféron γ¹⁹. Pour modéliser la capacité d’un anticorps spécifique au pédoncule à activer des cellules humaines primaires de NK, nous montrons qu’une tige spécifique mAb, 6F12, peut activer robuste la cellule Jurkat modifiée exprimant le murin FcγRIV par ~ 14 fois. En revanche, le mAb tête spécifiqu.......

Discussion

La méthode décrite ici permet de mesurer la capacité d’un anticorps monoclonal spécifique HA de pratiquer la FcγRIV murin. L’antigène cible, hémagglutinine de virus de la grippe, est exprimée à la surface des cellules après l’infection par le virus ou la transfection d’ADN plasmidique. L’essai est plus favorable à l’utilisation de différentes protéines virales exprimées à la surface en combinaison avec d’autres FcγRs (humains ou murin). En outre, nous avons utilisé des échantillons de sérums pour évaluer la capacité des .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
A549 cellules  ;	ATCC	CCL-185	Cellules épithéliales basales alvéolaires humaines adénocarcinomiques Cellules
HEK 293T ATCC		CRL-3216	Cellules rénales embryonnaires humaines
Lipofectamine 2000	Life Technologies  ;	11668019	Réactif de transfection
1X Opti-MEM Sérum réduit ThermoFisher	Scientific	51985-034
Plaque à 96 puits traitée par culture de tissus blancs	Corning, Inc.  ;	3917	Plaques de dosage
10X MEM	Gibco	11430-030
Jurkat cell exprimant le FcgRIV	murin Le kit Promega	M1201	comprend des cellules, un système de dosage Bio-Glo Luciferase, des cellules Jurkat sériques 1X RPMI et à faible IgG
exprimant le FcgRIIIa	Promega	G7010	kit comprend des cellules, un système de dosage Bio-Glo Luciferase, un sérum 1X RPMI et un sérum
à faible IgG	Promega	G9901	des cellules, un système de dosage Bio-Glo Luciferase, un luminomètre sérique 1X RPMI et à faible IgG
Lecteur	BioTek	Synergy H1 Lecteur de	plaques de luminescence
dosage Bio-Glo Luciferase	Promega	G7940	Contient un tampon de dosage de luciférase et un substrat de dosage de luciférase
Cellules rénales canines de Madin Darby	ATCC	CCL-34	Cellules rénales canines

le Le kit comprend multimode Système de