Summary
Det här protokollet beskriver metoder för att spela in auditiv hjärnstammen svaret från postnatal råttungar. För att undersöka funktionella utvecklingen av yttre hårceller, beskrivs experimentella förfarandet för hela-cell patch clamp inspelning i isolerade yttre hårceller steg för steg.
Abstract
Den yttre hår cellen är en av de två typerna av sensoriska hårcellerna i hörselsnäckan däggdjur. De ändrar sin cell längd med potential att förstärka svaga vibrationer av lågaktivt ljudsignal-receptorn. Morfologin och elektrofysiologiska boendet av yttre hårceller (OHCs) utvecklas i tidig postnatal ålder. Mognaden av yttre hår cell kan bidra till utvecklingen av hörselsystemet. OHCs utvecklingen är dock inte väl studerat. Detta är delvis på grund av svårigheten att mäta deras funktion av elektrofysiologiska tillvägagångssätt. Med syfte att utveckla en enkel metod för att lösa problemet ovan, beskriver här vi ett stegvisa protokoll för att studera funktionen av OHCs i akut dissocierade snäckan från postnatal råttor. Med den här metoden kan vi utvärdera cochlear svaret på ren ton stimuli och undersöka uttrycket nivå och funktion av den motoriska protein prestin i OHCs. Denna metod kan också användas för att undersöka de inre hårcellerna (IHCs).
Introduction
Två distinkta funktioner av cochlear sensoriska hårcellerna är väsentliga för däggdjur hörsel: mechanoelectric transduction (MET) och electromotility1,2. Av MET kanaler ligger i den hår bunten, IHCs (IHCs) och OHCs konvertera ljudvibration membran till potentiella förändringar, samt det elektriska signalerar av innerverade spiral ganglion nervceller. OHCs ändra deras cell längd med membranpotentialen och förstärker vibrationen av lågaktivt ljud. Denna verksamhet kallas electromotility härleds det motoriska protein prestin ligger i den laterala väggen i OHCs3.
I många arter, inklusive gnagare, är funktionen förhandlingen omogna i tidig postnatal epok4,5. Inga potentiella åtgärder som svar på ljudsignaler kunde upptäckas i den auditiva cortexen innan förhandlingen debut6,7. Utveckling av morfologi och funktion av snäckan har studerats allmänt i musen, gerbil och råtta4,5,8. Den mechanotransduction och electromotility av hårceller utvecklas också i den tidiga liv epok5.
För att utvärdera hörsel känsligheten hos råttor på olika postnatal ålder, har vi utvecklat en metod för auditiv hjärnstammen svar (ABR) inspelning hos råttungar. Hela-cell patch clamp är en idealisk teknik att undersöka OHCs elektrofysiologiskt. Men begränsat jämfört med den patch clamp utförs i nervceller och andra epitelceller, den låga andelen hela-cells tätning utredningen av electromotility av isolerade OHCs.
Här beskriver vi ett förfarande för att undersöka OHCs morfologiskt och elektrofysiologiskt i akut dissocierade snäckan från postnatal råttor. Denna metod kan ändras för att studera molekylära mekanismer som reglerar inre hår cell utveckling och funktion.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla experimentella protokoll som omfattar animaliska ämnen godkändes av djur etikkommittén vid södra medicinska universitetet.
1. Förbered lösningar för experiment
- Förbered bedövningsmedlet (se Tabell för material): 1,5% pentobarbital natrium upplöst i ddH2O.
- Bereda dissektion lösning (se Tabell för material): Lös upp en påse Leibovizs l-15 pulver i 1 L ddH2O. Justera pH till 7,3 med 1 M NaOH. Justera osmolaritet till 300-330 mOsm med hjälp av en osmometer och 10 mM HEPES före användning.
- Lös upp 2 mg/mL kollagenas IV (se Tabell för material) i dissektion lösning som beretts i steg 1.2.
- Förbereda de immunfärgning lösningar (se Tabell för material): Lös upp de 4% PARAFORMALDEHYD i fosfatbuffrad saltlösning (PBS).
Varning: PARAFORMALDEHYD är giftiga; bär lämpligt skydd. - Späd 0,3% permeabilitet agenten i PBS. Späd 10% normala get serumet i PBS som det blockerande buffert. Späd den prestin antikropp 1: 200 i blockerande buffert. Späd den Alexa488-konjugerad antikropp 1:600 i blockerande buffert. Späd den Phalloidin-tetrametylrodamin B isotiocyanat 1: 200 i PBS.
- Förbereda den extracellulära lösningen (se Tabell för material): förbereda den Leiboviz l-15 medium som beskrivs ovan (steg 1.2).
- Förbereda den intracellulära lösningen (se Tabell för material).
2. ABR inspelning
Obs: ABR inspelning har beskrivits tidigare i detalj i vår tidigare studie9.
- Söva Sprague Dawley (SD) råttor (1-14 dag gamla ungar och 2 - månader gamla vuxna, båda könen) med en enda injektion av 1,5% natrium pentobarbital (22 mg/kg för valpar och 30 mg/kg för vuxna, intraperitoneal (IP)).
- Placera den sövda djuren i en polyetylenskum mögel att immobilisera djurets kropp. Placera djuret på en vibrationsdämpande-tabell i ett ljud-förmildrande rum. Hålla djurets kroppstemperatur vid 37,5 ° C med en värmedyna.
- Torka det head området med 70% (vol/vol) etanol. Genom att använda en bra sax, göra en 1-2 mm snitt ventrolaterala till den externa pinna att placera referenselektrod eller marken. En subdermala nål elektrod (inspelningen elektrod) ligger över skallen vertex (figur 1A).
- Med hjälp av funktionsgenerator, generera kalibrerad tonen skurar (1 ms uppgång/nedgång, 3 ms platå) av olika frekvenser (2, 4, 8, 16, 24 och 32 kHz) och stödnivåer (minskat från 85 till 10 dB SPL i 5 dB steg). Variera den frekvens och amplitud manuellt eller använda en dator. Leverera ljudet stimuli genom en elektrostatisk högtalare ligger 10 cm bort mot huvudet av djuret.
- Filtrera (100-1000 Hz), förstärka och genomsnittlig (256 gånger) ljud framkallade potentialen med en multi-funktion processor för att få gränsroutrar. ABR tracesna övervakas online och lagras för offline analys. Det tar ca 40 min att slutföra den ABR inspelning från ett djur.
Obs: Vanligtvis tre till sju toppar (vinkar jag till våg VII) med fördröjning mindre än 15 ms kan vara identifierade (figur 1B). ABR tröskeln definieras som den lägsta ljudnivån på vilken våg I och II kunde upptäckas. - Euthanize innan djuren vaken från anestesi (med en intraperitoneal injektion av 0,3 mL 1,5% natrium pentobarbital).
3. Organ of Corti (OC) dissektion
- Söva råttungar. För mindre än 6 dagar gamla råttor (< P6), hålla djuret i en 100 mm kultur skålen och täck skålen med is i 10 min. För råtta > P6, söva djuret med en enda injektion av 1,5% natrium pentobarbital (22 mg/kg, i.p.). Halshugga råttungar efter anestesi.
- Sterilisera huvudet genom sprutning med 70% (vol/vol) etanol.
- Öppna skallen längs sagittal mittlinjen med sax; ta bort hjärnan för att exponera innerörat.
- Överföra innerörat i en 35 mm petriskål fylld med 3 mL iskallt l-15 (figur 2A).
- Under dissektion mikroskopet, ta fina pincett bort den beniga kapseln av snäckan (figur 2B).
- Packa upp OC och tillhörande stria vascularis (SV) från modiolus.
- Genom att hålla den basala delen av SV med pincett, separat OC från SV helt av varva ner långsamt från bas-till-apex (figur 2 c).
- Skär OC jämnt i tre bitar med hjälp av fina sax (figur 2D).
4. immunofluorescens färgning
- Genom att använda en 200 µL pipettspetsen, överföra segment av OC (steg 3.8) på en glasskiva och fixa med 100 µL av 4% PARAFORMALDEHYD för i minst 4 timmar vid 4 ° C.
Varning: PARAFORMALDEHYD är giftiga; bär lämpligt skydd. - Tvätta vävnaden genom undantränger PARAFORMALDEHYD med 100 µL av färska PBS. Tvätta vävnaden tre gånger i 10 min.
- Inkubera vävnaden med 0,3% permeabilitet agent i PBS i 30 min i rumstemperatur.
- Kassera permeabilitet agenten i PBS och tvätta vävnaden tre gånger med PBS.
- Blockera med 10% normalt get serum i PBS för 1 h i rumstemperatur.
- Inkubera med anti-prestin-C-terminus antikropp (1: 200) i att blockera lösning för 2 h i rumstemperatur eller vid 4 ° C över natten.
- Tvätta tre gånger med PBS för 5 min.
- Inkubera med Alexa488-konjugerad sekundära antikroppar (1:600) i blockerande lösning för 1 h i rumstemperatur i mörkret.
- Tvätta tre gånger med PBS för 5 min i mörker.
- Inkubera med rodamin-phalloidin (1: 200) i 10 min i rumstemperatur i mörkret.
- Tvätta tre gånger med PBS för 5 min i mörker.
- Montera på en glasskiva med monteringsmedium (innehållande DAPI). Bild med konfokalmikroskopi med hjälp av 405 nm, 488 nm och 594 nm lasrar. Ange laser makt på 0,1-0,5 mW och scan hastighet på 0,5 bilder per sekund.
5. Patch clamp inspelning av isolerade OHCs
- Använd en pipett avdragare och mikro-förfalskare att göra patch pipetter med en spets diameter 2-3 µm. Back-fylla pipetterna med intracellulära lösning. Vanligtvis var det initiala motståndet av patch pipett 2.5-3.5 MΩ i Bad lösning.
- Genom att använda en 200 µL pipettspetsen, överför du en bit av OC (från steg 3.8) till en 35 mm petriskål. Smälta vävnaden med 100 µL av enzymatisk nedbrytning medium (kollagenas IV, se Tabell för material) under 5 minuter i rumstemperatur.
- Förskjuta enzymatisk nedbrytning mediet med 100 µL av l-15. Skär vävnaden i små bitar med en mikro skalpell för att isolera hårcellerna.
- Efter varsam pipettering, överföra cellerna i en hemmagjord liten plast kammare (diameter ~ 1,5 cm) fylld med enzym-fria bad lösning (~ 1,5 mL, se Tabell för material).
- Placera kammaren på scenen av en inverterade Mikroskop. Hitta de friska-framträdande ensliga OHCs.
- Läsa in patch pipetten i huvudet scenen av en 700B förstärkare. Flytta patch pipetten försiktigt genom en micromanipulator och placera den runt botten av yttre hår cellen (figur 3A).
- Hela-cell patch clamp OHC genom att täta den laterala väggen i cellkroppen. Applicera lätt sug tills cellmembranet är spruckit. Ange innehav potentiella på -70 mV. Celler med tillgång motståndet varierade från 10 till 17 MΩ och membran motstånd varierade från 100 till 500 MΩ, och anses vara en framgångsrik hela-cell-konfiguration.
- Med datorstyrning, tillämpa hyperpolarizing och depolariserande spänning (250 ms varaktighet och sträcker sig från −140 till +94 mV i 13 mV steg) till cellen att framkalla hela-cell strömmar.
- Förstärka hela-cell strömmarna, filtrera (hörnet frekvens 5 kHz) av en 700B förstärkare. Konvertera data av en 1440A converter och lagra för offline analys.
- Mäta den membran kapacitansen av OHCs med en två sinus-våg spänning stimulus-protokollet som kontrolleras av en patch clamp programvara. Ange intervallet stimulera spänning från -140 till 110 mV. Lagra data för offline analys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ABR kan utlösas från sövda råttungar äldre än postnatal dag 7 (P7) med ren ton skurar (figur 1A). Som visas i figur 1B, den ABR vågformer erhållna från råttungar som visade endast tre till fyra distinkta vågor med liten amplitud. Vanligtvis, observerades upp till sju toppar i den ABR vågformer av vuxna djur (figur 1B).
För följande immunfärgning och Elektrofysiologisk mätning, var råtta innerörat färska dissekerade från tinningbenet. Vi visar de på varandra följande steg av vävnad dissektion att isolera OC från SV och modiolus (figur 2A–2 C). OC skars i tre bitar jämnt med mikro-sax (figur 2D). För att Visa morfologi av hårcellerna, var segmenten fläckade phalloidin, prestin antikropp och DAPI (figur 2E). Hår buntarna (i rött) ange den apikala ytan av hårceller, medan cellkroppen av OHCs präglades av prestin (i grönt). Kärnan var märkt av DAPI (i blått) ligger i den nedre regionen av IHCs och OHCs. Som visas i figur 2E, upptäcktes inga prestin i OHCs av snäckan på P5. Prestin observerades först på P7 i OHCs ligger i basal hörselsnäckan.
Efter varsam matsmältningen var OHCs isolerade från OC (figur 3A). Hela-cell spänning-clamp inspelningar utfördes från OHCs akut isolerade från råtta snäckan. Ett representativt exempel på den hela-cell nuvarande inspelade från en isolerad P9 OHC svar på membranpotential ändrats från −140 till +107 mV visas i figur 3B. Observera regionen N-form i-V kurvan, vilket indikerar förekomst av KCa nuvarande som är en unik svar av OHCs. Driven av membran spänningen, den intracellulära Cl– i kombination med prestin, som uppförts som en ickelinjär membran kapacitans (NLC) ändras under hela-cell patch clamp läge. Den typiska NLC av en mogen OHC kännetecknas av klockformade beroende av membranpotentialen. NLC kan utrustas med två stater Boltzmann funktion och kan återspegla funktionen electromotility i OHCs. Boltzmann funktionen för kapacitans montering beskrivs som:
Ekvationen och parametrarna beskrevs i våra tidigare papper9. Två företrädare NLCs visas i figur 3 c.
Figur 1. Auditiv hjärnstammen svar inspelning. (A) inspelning elektroden infogades i hårbotten mellan två öron. Marken och referens elektroderna placerades under den vänstra och högra pinna, respektive. Ett öppet fält högtalare placerades 10 cm från den nasala spetsen av råtta. (B) två representativa ABR vågformer svar på 16 kHz, 80 dB SPL tonen skurar. Övre spår inspelade från en P8 pup. Botten spår inspelade från en vuxen råtta. Siffrorna anger de olika topparna av vågformer. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Orgel av Corti dissektion. (A) innerörat dissekeras från en P9 råtta pup. Den snäckan och vestibulära region visas. (B) strukturen för snäckan utsattes efter avlägsnande av beniga väggen. (C) organ Corti (OC) och stria vascularis (SV) isolerades från modiolus. (D) de organ of Corti skars jämnt i tre bitar. Skala staplarna i A-D representerar 1000 µm. (E) Confocal bilder Visa hårcellerna ligger i olika segment (basal, mellersta och apikala) längs cochlean. Rodamin-phalloidin (röd) representerar hår buntarna belägna på apikala ytan av hårcellerna. DAPI (blå) representerar den kärnor som ligger i mitten-nedre delen av hårcellerna. Den prestin (märkt i grönt) uttrycktes endast på den laterala väggen av de yttre hårcellerna. För mellersta och basala segmenten på P7 visas bara den gröna kanalen att illustrera uttrycket av prestin i OHCs. Skalstapeln representerar 20 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 3. Hela-cell patch clamp inspelning av isolerade yttre hårceller. (A), en isolerad yttre hår cell förseglades i hela-cell-läge. Skalstapeln representerar 10 µm. (B) A representant I-V kurva inspelade från en P9 yttre hår cell. (C), ickelinjära membranet kapacitans (NLC) erhålls från två yttre hårceller vid olika åldrar. Kapacitans-spänning svaren (öppna cirklar) utrustades till funktionen Boltzmann (visas som de tjocka linjerna). NLC var normaliserade till den motsvarande linjära kapacitansen (Clin). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hos råttor yngre än dag 11, kunde ingen action potential som svar på sund stimulering observeras i hörselbarken6,7. Därför beskrivs postnatal dag 11 som ”hörsel debut”10. Utvecklingen av förhandlingen funktion innan förhandlingen debut inte var väl studerat ännu. Med liknande metod för vuxna ABR inspelning, visar vi att ABR kunde utlösas av ren ton burst från råttungar yngre än P11 (figur 1). Den ABR vågformer erhållna från råttungar visade dock några olika funktioner från de av vuxna djur. ABR svaren är en liten amplitud med relativt höga trösklar. Detta resultat innebär att utveckla hörselsystemet har låg känslighet för ljudsignaler. I den ABR vågformer inspelade från råttungar observerades signifikant skillnad. Vanligtvis, observerades upp till sju toppar hos vuxna ABR vågformer9. Dessa toppar med olika latens genereras av olika hjärnstammen kärnor längs auditiv väg11. Våra resultat visar att endast I-IV vågorna var detekterbart i ABR från råttungar (figur 1B). Vågorna I och II representerar svaren från innerörat och hörselnerven11. Resultaten tyder därför på att högre nivå auditiv atomkärnor underlåtit att svara på akustiska stimuli under utveckling. Dessa data tyder på att snäckan reach funktionell mognad tidigare än gör centrala hörselsystemet. Den metod som vi beskriver här är viktigt för studier av molekylära mekanismer som reglerar snäckan utveckling och hår cell funktion.
Hög kvalitet dissekering av OC är kritisk för ytterligare experiment inklusive immunfärgning, Western blotting och Elektrofysiologisk mätning. Dessa experiment har utförts med hjälp av vuxna SD råttor och råttungar mellan 1 och 14 dagar gammal. Råttungar är idealiska för fina dissektion som cochlear ben är mjuk och lätt kan tas bort med pincett utan att skada OC. För vuxna råttor krävs särskild försiktighet för att undvika spricker OC och avlägsnar hård-beniga kapseln. Genom att använda fina pincett, kan det OC och associerade SV lyftas av från modiolus. De separerade OC och SV har olika textur (figur 2 c). För råttungar, kunde OC skäras i tre segment med en längd av 800-1200 µm. Observera att alla åtgärder ska utföras i iskall l-15 så fort som möjligt för att minimera nedbrytning och vävnad försämring.
Isolerade segment av OC är bra preparat för immunfärgning, Western blotting och RNA analys. Här visar vi morfologi av sensoriska hårcellerna i OC genom immunfärgning. OHCs har hår buntar på apikala ytan medan kärnan har dem ligger basally12. Den motoriska protein prestin uttrycks på laterala membranet i OHCs. Confocal imaging uppgifterna visade att prestin först var uttryckt på P6-P7 och visade en fortsatt ökning under den följande veckan (figur 2E). I ytterligare experiment utfördes Western blotting och q-PCR för att kvantifiera de observerade uttryck förändringarna av prestin under utveckling (inga data anges). Eftersom hårcellerna är i minoritet i OC, rekommenderas 6 till 10 cochleae i en enda experiment att uppnå robust signaler.
Patch clamp inspelningar av OHCs utfördes mild enzymatisk nedbrytning för att separera OHCs. Hårcellerna är bräcklig, och särskild försiktighet krävs i det här steget. Använd en 200 µL pipettspetsen för att överföra vävnad och separerade celler. Det isolera segmentet av OC överfördes till en droppe kollagenas lösning (~ 100 µL) i en petriskål i ca 5 min i rumstemperatur. Undvik långa matsmältningen times, som skadar cellmembranet av OHCs. Under mikroskopet valdes friska letar OHCs för patch clamp inspelningen. Celler som visar några tecken på krympning, svullnad, skada eller flyttning av kärnan uteslöts från nästa experiment. Friska som förekommer ensamma OHCs och IHCs är lätta att identifiera genom deras morfologiska skillnaden. OHCs visar en cylindrisk form och en större axel-diameter-förhållande, medan IHCs är kolven-formade med en stram hals12. Hela-cell patch clamp i OHCs är något svårt från dem i nervceller och andra epitelceller. För framgångsrika hela-cell konfiguration, var patch pipetten oftast belägna nära kärnan, hålls borta från övre laterala membranet som innehåller en hög täthet av prestin partiklar (figur 3A). Efter membranet var spruckit, tillämpades ett två sinus-våg spänning stimulans protokoll till cellen för att erhålla den membran kapacitansen av OHCs. Med samma teknik, är med hjälp av spänningen steg, det möjligt att framkalla hela-cell ström.
Denna metod är ett bra verktyg för att undersöka funktionen electromotility av OHCs in vitro-9,13. Denna metod kan också användas för att undersöka funktionen av jonkanaler, liksom de farmakologiska egenskaperna hos receptorer i OHCs och IHCs14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete stöds av anslag från programmet 973 (2014CB943002) och den nationella naturvetenskap Foundation i Kina (11534013, 31500841).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthetic | |||
| Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 1.5% in water |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissection solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| Collagenase IV | Sigma | C5138 | 2 mg/mL in L-15 |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Immunostaining solutions | |||
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | PH 7.3 |
| Paraformaldehyde | Sigma | 158127 | 4% in PBS |
| Triton X-100 | Amresco | ZS-0694 | 0.3% in PBS |
| Normal goat serum | Thermo Fisher Scientific | 10000C | 10% in PBS |
| prestin antibody | Santa Cruz | SC-22694 | dil 1:200 |
| Alexa Fluor 488-conjugated antibody | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | dil 1:600 |
| Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanate | Sigma | P1951 | dil 1:200 |
| DAPI | Solarbio | C0060 | dil 1:20 |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Extracellular solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Intracellular solution | |||
| CsCl | Sigma | 7647-17-8 | 140 mM |
| MgCl2 | Sigma | 7791-18-6 | 2 mM |
| EGTA | Sigma | 67-42-5 | 10 mM |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Osmometer | Gonotec | OSMOMAT 3000 basic | |
| Forcep | WPI | 14095 | Tweezers dumont |
| Micropipette puller | Sutter Instrument | MODLE-P97 | |
| Micro Forge | Narishigen | MF-830 | |
| Mini Operating System | Sutter Instrument | MP-285 | |
| MultiClamp | Axon | 700B | |
| Low-Noise Data Acquisition System | Axon | 1440A | |
| ES1 speaker | Tucker-Davis Technologies | ||
| TDT system 3 | Tucker-Davis Technologies | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| SigGenRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| BioSigRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| jClamp | Scientific Solutions | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal | |||
| SD rat | Experimental Animal Center of Southern Medical University |
References
- He, D. Z., Zheng, J., Kalinec, F., Sacchi Kakehata, S. S. antos-, J, Tuning in to the amazing outer hair cell: membrane wizardry with a twist and shout. J Membr Biol. 209, 119-134 (2006).
- Dallos, P. Cochlear amplification, outer hair cells and prestin. Curr Opin Neurobiol. 18, 370-376 (2008).
- Zheng, J., et al. Prestin is the motor protein of cochlear outer hair cells. Nature. 405, 149-155 (2000).
- Abe, T., et al. Developmental expression of the outer hair cell motor prestin in the mouse. J Membr Biol. 215, 49-56 (2007).
- Waguespack, J., Salles, F. T., Kachar, B., Ricci, A. J. Stepwise morphological and functional maturation of mechanotransduction in rat outer hair cells. J Neurosci. 27, 13890-13902 (2007).
- Zhang, L. I., Bao, S., Merzenich, M. M. Persistent and specific influences of early acoustic environments on primary auditory cortex. Nat Neurosci. 4, 1123 (2001).
- De, V. -S. E., Chang, E. F., Bao, S., Merzenich, M. M. Critical period window for spectral tuning defined in the primary auditory cortex (A1) in the rat. J Neurosci. 27, 180-189 (2007).
- He, D. Z., Evans, B. N., Dallos, P. First appearance and development of electromotility in neonatal gerbil outer hair cells. Hearing Res. 78, 77-90 (1994).
- Hang, J., et al. Synchronized Progression of Prestin Expression and Auditory Brainstem Response during Postnatal Development in Rats. Neural Plast. , 4545826 (2016).
- Ehret, G. Development of absolute auditory thresholds in the house mouse (Mus musculus). J Am Audiol Soc. 1, 179-184 (1976).
- Møller, A. R. Hearing:anatomy, physiology, and disorders of the auditory system. , Academic Press. Dallas. (2006).
- He, D. Z., Zheng, J., Edge, R., Dallos, P. Isolation of cochlear inner hair cells. Hearing Res. 145, 156-160 (2000).
- Tang, J., Pecka, J. L., Tan, X., Beisel, K. W., He, D. Z. Z. Engineered Pendrin Protein, an Anion Transporter and Molecular Motor. J Biological Chem. 286, 31014-31021 (2011).
- Fu, M., et al. The Effects of Urethane on Rat Outer Hair Cells. Neural Plast. 2016, 1-11 (2016).
