Mesure de la contractilité isométrique de l’artère mésentérique de souris à l’aide de fil myographie

Résumé

La technique de myographe fil est utilisée pour étudier les fonctions des muscles lisses vasculaires et les nouveaux médicaments écran. Nous rapportons un protocole détaillé permettant de mesurer la contractilité isométrique de l’artère mésentérique de souris et de dépistage des nouveaux décontractants de muscle lisse vasculaire.

Résumé

La technique de myographe fil sert à évaluer la contractilité des muscles lisses vasculaires en réponse à une dépolarisation, GPCR agonistes/inhibiteurs et drogues. Il est largement utilisé dans de nombreuses études sur les fonctions physiologiques du muscle lisse vasculaire, la pathogenèse des maladies vasculaires comme l’hypertension et le développement de médicaments relaxants musculaires lisses. La souris est un animal modèle largement utilisé avec une grande piscine de modèles de maladies et de souches génétiquement modifiées. Nous avons introduit cette méthode pour mesurer la contraction isométrique de l’artère mésentérique souris en détail. Un segment de 1,4 mm d’artère mésentérique résistance souris a été isolé et monté sur une chambre myographe en passant les deux fils d’acier dans sa lumière. Après les étapes de l’équilibration et la normalisation, le segment du navire était potentialisé par une solution riche en K⁺ deux fois avant l’essai de contraction. Comme exemple de l’application de cette méthode dans le développement de médicaments, nous avons mesuré l’effet relaxant d’une nouvelle substance naturelle, neoliensinine, isolée à partir d’une herbe chinoise, les embryons de la graine de lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.) sur des souris mésentérique artères. Les segments vasculaires montés sur la chambre myographe sont stimulées avec une solution riche en K⁺ . Lorsque la tension de force a atteint une phase stable soutenue, des doses cumulatives de neoliensinine ont été ajoutés à la chambre. Nous avons trouvé que neoliensinine avait un effet relaxant dose-dépendante sur la contraction du muscle lisse, ce qui suggère qu’il porte une activité potentielle contre l’hypertension. En outre, que le segment du navire peut survivre au moins 4 heures après le montage et la maintenance de contractilité induite par la solution high-K⁺ pour plusieurs fois, nous suggérons que le système de myographe wire peut servir pour le long processus de dépistage des drogues.

Introduction

Le système de myographe petite embarcation utilisé ici était pour mesurer la contraction isométrique des navires de faible résistance avec des diamètres intérieurs allant de 100 à 400 µm. petits vaisseaux isolés (environ 2 mm de long) ont été insérés par deux fils de diamètre de 40 µm et ont ensuite été monté sur les mâchoires du transducteur-côté et micromètre séquentiellement. Cette technique myographe était la première fois suggérée en 1972¹ et puis développée principalement par Mulvany et ses collègues^2,3,4,5....

Protocole

Des manipulations animales ont été approuvées par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de l’Université de modèle Animal Research Center de Nanjing.

1. préparation de la solution

1. Préparer une solution HEPES-Tyrode (H-T) à l’aide de 137,0 mM NaCl, KCl 2,7 mM, 1,8 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂∙6H₂O, D-glucose à 5,6 mM et 10 mM HEPES, pH 7,3 à 7,4.
2. Préparer une solution HEPES-Tyrode sans calcium (Ca^{2 +}-libre H-T) à l’aide de 140,6 mM NaCl, KCl 2,7 mM, 1 mM MgCl₂∙6H₂O, 5,6 mM D-glucose et 10 mM HEPES, pH 7,3 à 7,4.
3. Préparer une solution HEP....

Résultats

Nous avons mesuré la contractilité isométrique de l’artère mésentérique de souris en utilisant un système multi-fil myographe et évalué l’effet relaxant de neoliensinine purifiée à partir d’embryons de graine de lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.) ¹⁴. l’artère mésentérique résistance de souris a été isolé, nettoyé des tissus conjonctifs et coupé en segments de 1,4 mm. Le segment de l’artère a été inséré par deux fils d’acier en Ca^{2 +}-sans solution .......

Discussion

L’hypertension est une faute très répandue de santé publique en raison de ses graves complications, notamment cardiovasculaires et les maladies de rein¹⁶. Compréhension de la pathogenèse de l’hypertension et l’exploration plus les médicaments antihypertenseurs sont devenue une tâche urgente dans ce domaine. La pression artérielle est générée et maintenue par la résistance périphérique de la circulation. Conformément à la Loi de Poiseuille, relativement petites artères génèrent une grande partie de.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Système myographe multifilaire	DMT	610-M
Fil d’acier inoxydable	DMT	400447
Ciseaux de dissection Geuder	DMT	400431
Pince Dumont	DMT	300413
PowerLab/8SP	ADInstruments	ML785
Logiciel	ADInstruments	LabChart 5
NaCl	SigmaAldrich	S5886
KCl	SigmaAldrich	P5405
CaCl2	SigmaAldrich	C4901
MgCl2· ; 6H2O	SigmaAldrich	M2393
D-Glucose	SigmaAldrich	G6152
HEPES	Sangon Biotech	A100511-0250
NaOH	SigmaAldrich	S8045
DMSO	SigmaAldrich	D2650