Fixation pulmonaire sous pression constante pour l'évaluation de l'emphysème chez les souris

Résumé

Présenté ici est un protocole utile pour la fixation pulmonaire qui crée une condition stable pour l'évaluation histologique des spécimens de poumon à partir d'un modèle de souris de l'emphysème. Le principal avantage de ce modèle est qu'il peut fixer de nombreux poumons avec la même pression constante sans effondrement pulmonaire ou déflation.

Résumé

L'emphysème est une caractéristique importante de la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC). Les études impliquant un modèle de souris emphyséame exigent une fixation optimale des poumons pour produire des spécimens histologiques fiables du poumon. En raison de la nature de la composition structurelle du poumon, qui se compose en grande partie d'air et de tissu, il y a un risque qu'il s'effondre ou se dégonfle pendant le processus de fixation. Diverses méthodes de fixation pulmonaire existent, chacune ayant ses propres avantages et inconvénients. La méthode de fixation pulmonaire présentée ici utilise une pression constante pour permettre une évaluation optimale des tissus pour les études utilisant un modèle de poumon de souris emphysématous. Le principal avantage est qu'il peut fixer de nombreux poumons avec la même condition à la fois. Les échantillons pulmonaires sont obtenus à partir de souris chroniques exposées à la fumée de cigarette. La fixation pulmonaire est effectuée à l'aide d'équipements spécialisés qui permettent la production d'une pression constante. Cette pression constante maintient le poumon dans un état raisonnablement gonflé. Ainsi, cette méthode génère un spécimen histologique du poumon qui convient pour évaluer l'emphysème doux induit par la fumée de cigarette.

Introduction

La MPOC est l'une des principales causes mondiales de décès¹. La fumée de cigarette est la cause la plus importante de la MPOC, mais les mécanismes de pathogénie restent incomplètement définis. La MPOC présente deux caractéristiques principales, y compris la limitation progressive du débit d'air et une réponse inflammatoire anormale du poumon. Le désordre emphysème se produit fréquemment dans les poumons des patients de COPD^2. Les résultats pathologiques de l'emphysème sont caractérisés par la destruction de mur alvéolif^3. Plusieurs espèces animales ont été utilisées pour produire des modèles de M....

Protocole

Les méthodes suivantes ont été approuvées par les comités de soins et d'utilisation des animaux de l'École de médecine de l'Université de Juntendo. Les Lignes directrices pour une bonne conduite des expériences animales, Conseil des sciences du Japon, 1er juin 2006 ont été suivies. Il y a trois étapes principales dans cette méthode : 1) dissection de souris, 2) exsanguination de poumon, et 3) fixation des tissus de poumon assistés par l'équipement spécialisé. Typiquement, les spécimens de poumon sont traités à l'intégration après 48 h de fixation^12,15,16,

Résultats

Tel que décrit précédemment, l'équipement spécialisé, qui génère une pression constante prolongée, peut être divisé en trois parties (figure 3A). La partie inférieure est le point où insérer l'échantillon pulmonaire (Figure 4A). Le poumon est relié par une canule (20 G) à la pointe de l'écoulement formalin à l'aide d'une bite d'arrêt à trois voies (Figure 4B). La pression est généré.......

Discussion

La procédure de fixation pour les poumons de rongeurs présentée ici n'est pas nouvelle; cependant, ce système présente plusieurs avantages. Tout d'abord, il peut fixer de nombreux poumons (maximum de 20) avec la même condition à la fois. La Society of Toxicologic Pathology affirme que la pression pour l'instillation de la gravité varie de 22 à 25 cmH₂O²². Notamment, plusieurs études ont effectué la fixation pulmonaire à une pression de 25 cmH₂O^13,.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
10 % de formol (solution tampon neutre de formol)	Wako	060-01667
Pince coudée	Hammacher	HSC187-11
Canule, taille 20G	Terumo	SR-FS2032
Canule, taille 22G	Terumo	SR-OT2225C	Canule pour exsanguiner le poumon
Pince	Hammacher	HSC184-10
Kimtowel	Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)	61000
Kimwipe	Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)	62011
Récipient inférieur (matériau en verre acrylique)	Tokyo Science	Custom-made	Composant d’équipement sous pression Pompe
rouleaux	Nissin Scientific Corp	NRP-75	Machine à pompe pour exsanger les poumons
Pompe à rouleaux RP-2000	Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd)	160200	Pompe d’équipement de pression
Tube en silicone & Oslash ; 9 mm	Sansyo	94-0479	Composant d’équipement de pression
Somnopentyl (64.8 mg/mL)	Kyoritsu Seiyaku	SOM02-YA1312	Pentobarbital
Sodium Ciseaux chirurgicaux	Hammacher	HSB014-11
Fil de suture, taille 0	Nescosuture	GA01SW
Seringue, 1 mL	Terumo	SS-01T
Seringue, 1 ml avec aiguille	Terumo	SS-01T2613S
Seringue, 10 mL	Terumo	SS-10ESZ
Robinet d’arrêt à trois voies	Terumo	TS-TR1K01
Récipient supérieur (matériau en verre acrylique)	Tokyo Science	Sur mesure	Composant d’équipement sous pression