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Research Article
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Nous présentons le modèle chorioallantoic de membrane de poulet comme modèle alternatif, transplantable, in vivo pour l'engraftment des lignes gynécologiques et urologiques de cellules cancéreuses et des tumeurs patient-dérivées.
Les modèles de souris sont les tests de référence pour les études sur le cancer in vivo. Cependant, le coût, le temps et les considérations éthiques ont donné lieu à des appels en faveur de modèles alternatifs de cancer in vivo. Le modèle de membrane chorioallantoïque de poulet (CAM) fournit une alternative peu coûteuse et rapide qui permet la visualisation directe du développement de tumeur et est approprié pour l'imagerie in vivo. En tant que tel, nous avons cherché à développer un protocole optimisé pour engrafting des tumeurs gynécologiques et urologiques dans ce modèle, que nous présentons ici. Environ 7 jours après la fécondation, la cellule d'air est déplacée vers le côté vascularisé de l'œuf, où une ouverture est créée dans la coquille. Les tumeurs des lignées cellulaires et des tissus primaires de la murine et de l'homme peuvent alors être greffées. Ceux-ci sont généralement enseisés dans un mélange de matrice extracellulaire et de milieu pour éviter la dispersion cellulaire et fournir un soutien nutritionnel jusqu'à ce que les cellules recrutent un approvisionnement vasculaire. Les tumeurs peuvent alors croître jusqu'à 14 jours supplémentaires avant l'éclosion des œufs. En implantant des cellules transmises de façon stable à la luciférase luciferase luciferase, l'imagerie par bioluminescence peut être utilisée pour la détection sensible de la croissance tumorale sur la membrane et la propagation des cellules cancéreuses dans l'ensemble de l'embryon. Ce modèle peut potentiellement être employé pour étudier la tumorigénicité, l'invasion, la métastes, et l'efficacité thérapeutique. Le modèle CAM de poulet nécessite beaucoup moins de temps et de ressources financières par rapport aux modèles murins traditionnels. Étant donné que les œufs sont immunodéprimés et tolérants au système immunitaire, les tissus de n'importe quel organisme peuvent potentiellement être implantés sans animaux transgéniques coûteux (p. ex. souris) requis pour l'implantation de tissus humains. Cependant, beaucoup des avantages de ce modèle pourraient potentiellement également être des limitations, y compris le temps court de génération de tumeur et le statut immunocompromis/immune tolérant. En outre, bien que tous les types de tumeur présentéicis ici engraft dans le modèle de membrane chorioallantoic de poulet, ils le font avec des degrés variables de croissance de tumeur.
Les souris ont servi d'organisme modèle classique pour l'étude des maladies humaines, y compris la malignité. En tant que mammifères, ils partagent de nombreuses similitudes avec les humains. Leur degré élevé de similitude génétique a permis la manipulation transgénique du génome de la souris pour fournir un aperçu énorme dans le contrôle génétique des maladies humaines1. Une vaste expérience dans la manipulation et l'expérimentation avec des souris a abouti à leur être le modèle de choix pour la recherche biomédicale. Cependant, en plus des préoccupations éthiques et scientifiques concernant les modèles murins, ils peuvent également être très coûteux et prendre beaucoup de temps2,3. Le développement des tumeurs peut prendre des semaines, voire des mois. Le logement à une institution typique seul peut fonctionner dans les centaines à des milliers de dollars tandis que les tumeurs se développent. Le cancer de l'ovaire est un exemple de cet inconvénient parce que sa croissance dans les modèles murins peut facilement prendre des mois. Les retards dans les progrès de la recherche peuvent avoir un impact sur le faible taux de survie à 5 ans des patients atteints d'un cancer de l'ovaire, qui n'est que de 47 % (c.-à-d. une augmentation de la survie de seulement 10 % sur 30 ans)4. De même, les cancers urologiques (cancers du rein, de la prostate et de la vessie) représentent 19 % de tous les cas de cancer aux États-Unis et 11 % des décès liés au cancer4. Ainsi, une nouvelle approche in vivo pour étudier les cancers gynécologiques et urologiques pourrait faire économiser beaucoup de temps, de travail et d'argent à un laboratoire, même si ce modèle n'est appliqué qu'aux premières expériences de dépistage. De plus, l'accélération des résultats de la recherche qui en résulterait pourrait avoir un impact important sur les 177 000 personnes diagnostiquées avec ces cancers chaque année.
Le modèle CAM de poulet offre de nombreux avantages qui répondent aux problèmes susmentionnés. Un modèle populaire pour étudier l'angiogenèse5,6, invasion de cellules tumorales7,8, et métastasie7,9,le modèle CAM embryon poussin a déjà été utilisé pour étudier de nombreuses formes de cancers, y compris le gliome10,11,12, la tête et le cou carcinome épidermoïde13,14, leucémie15,16, cancer du pancréas17, et cancer colorectal18. En outre, les modèles de CAM ont été produits pour le neuroblastome19, le lymphome de Burkitt20,le mélanome21,et le fibrosarcome félin22. Des études antérieures ont également présenté l'engraftment du cancer de la vessie23 et les lignées cellulaires du cancer de la prostate24, mais avec des détails limités de protocole. Non seulement les œufs sont beaucoup moins chers que les souris, mais ils produisent aussi des résultats très reproductibles25,26. Ils montrent le développement rapide de vascularisation, et l'engraftment de tumeur peut se produire en aussi rapidement que quelques jours et être visualisé longitudinalement par la fenêtre ouverte. Avec le délai de 21 jours entre la fécondation des œufs et l'éclosion, les expériences peuvent être terminées en quelques semaines. En outre, le faible coût, les besoins limités en matière de logement et la petite taille permettent facilement des expériences à grande échelle qui seraient prohibitives pour les études sur les souris.
Par conséquent, nous avons cherché à optimiser le modèle de CAM pour l'engraftment des cancers gynécologiques et urologiques. En raison de l'état immunocompromis de l'embryon de poulet au début27, la souris et les cellules humaines peuvent être facilement implantés. En tant que tel, nous avons réussi à greffer des cancers de l'ovaire, du rein, de la prostate et de la vessie. Pour chacun de ces types de tumeur, le CAM accepte facilement les lignées de cellules murines et/ou humaines établies de cellules de tumeur. Fait important, les tissus tumoraux humains primaires fraîchement récoltés peuvent également s'engrafter à partir de cellules digérées ou de morceaux de tissu solide avec des taux élevés de succès. Chacun de ces types de cancer et sources cellulaires nécessite une optimisation, que nous partageons ici.
Toutes les expériences présentées dans les présentes ont été examinées et approuvées par les comités d'éthique appropriés de l'Université de Californie à Los Angeles (UCLA). L'utilisation des tumeurs humaines humaines primaires et identifiées a été approuvée par le conseil institutionnel d'examen de l'UCLA (numéros de protocole 17-000037, 17-001169, et 11-001363). À l'UCLA, l'examen du Comité de recherche sur les animaux n'est pas nécessaire pour les expériences utilisant des embryons de poulet; l'approbation du protocole n'est requise que lorsque les œufs éclosent. Cependant, les meilleures pratiques, telles que les Lignes directrices de l'AVMA pour l'euthanasie des animaux, ont été utilisées pour manipuler les embryons de poulet de façon éthique et pour éviter autant que possible la douleur. Les chercheurs sont invités à vérifier les exigences de surveillance de leur établissement avant de commencer des études à l'aide de modèles DE CAM.
1. Préparation des œufs
2. Ouverture des œufs
REMARQUE : L'ouverture des œufs doit être faite lorsque le CAM est complètement développé. C'est typiquement le jour de développement 7 ou 8.
3. Préparation de la suspension des cellules cancéreuses pour la transplantation (option 1)
REMARQUE : Cela doit être terminé juste avant l'implantation, ce qui devrait idéalement avoir lieu entre les jours 7 et 10. Veuillez consulter les notes au début de l'étape 5 ou 6 pour plus d'informations concernant la date d'implantation. Cette approche a été employée pour toutes les lignes de cellules et les digests cultivés de tumeur de cancer de rein.
4. Préparation des morceaux tumoraux pour l'implantation (option 2)
REMARQUE : Cela doit être terminé juste avant l'implantation, ce qui devrait idéalement avoir lieu entre les jours 7 et 10. Veuillez consulter les notes au début de l'étape 5 ou 6 pour plus d'informations concernant la date d'implantation. Des cancers primaires d'ovaire et de réservoir souple ont été implantés comme morceaux de tumeur.
5. Implantation à l'aide d'un anneau antiadhésif (option 1)
REMARQUE : Les cellules peuvent être implantées à partir du jour du développement 7 si le CAM est entièrement développé. L'implantation peut se produire n'importe quand avant l'éclosion qui permet suffisamment de temps pour le développement de la tumeur et l'expérience souhaitée, mais notez que les cellules immunitaires de l'embryon commencent à être présents autour du jour 10 postfertilisation27. Le taux de croissance tumoral varie considérablement selon le type de cellule et doit être déterminé empiriquement pour le type de cellule d'intérêt. Le cancer de l'ovaire et les cellules cancéreuses de la prostate ont été implantés à l'aide de la méthode de l'anneau antiadhésif. Notez que lorsqu'un anneau antiadhésif n'est pas disponible, une pointe de pipet peut être coupée à une taille similaire et utilisée.
6. Implantation sans anneau antiadhésif (option 2)
REMARQUE : Les cellules peuvent être implantées à partir du jour du développement 7 si le CAM est entièrement développé. L'implantation peut se produire n'importe quand avant l'éclosion qui permet suffisamment de temps pour le développement de la tumeur et l'expérience souhaitée, mais notez que les cellules immunitaires de l'embryon commencent à être présents autour du jour 10 postfertilisation27. Cette méthode a été utilisée pour implanter les cellules rénales du carcinome et les cellules cancéreuses de la vessie.
7. Imagerie de bioluminescence des tumeurs marquées de luciferase de luciferase de luciferase de luciferase de luciferase
REMARQUE : Si les cellules implantées ont été transduced de façon stable avec le gène codant la luciferase de luciferase de luciferase de luciferase ou d'autres facteurs d'imagerie, alors les tumeurs résultantes peuvent être visualisées utilisant la formation image de bioluminescence. L'imagerie par fluorescence n'est pas recommandée sur les œufs intacts en raison de l'arrière-plan élevé de la coquille d'œuf. Il s'agit d'une analyse de point de terminaison, car l'ouverture de la coquille réduit considérablement la survie. Les tumeurs peuvent être imageà tout moment qui est approprié pour les besoins expérimentaux et la vitesse de la croissance tumorale. Cependant, en moyenne, les œufs éclosent 21 jours après la fécondation. Par conséquent, le jour de développement 18 est un point de terminaison approprié pour éviter l'éclosion non désirée.
8. Récolte de tumeurs
REMARQUE : Les tumeurs peuvent être récoltées à tout moment qui convient aux besoins expérimentaux et à la vitesse de croissance de la tumeur. Cependant, en moyenne, les œufs éclosent 21 jours après la fécondation. Par conséquent, le jour de développement 18 est un point de terminaison approprié pour éviter l'éclosion non désirée.
Jusqu'ici, nous avons trouvé cette méthode d'implantation pour être réussie pour des cancers ovariens, de rein, de prostate, et de réservoir souple. Chacun a été optimisé pour identifier des conditions spécifiques pour l'implantation, bien qu'il puisse y avoir flexibilité. Parmi les types de tumeurs testés, la croissance du cancer de l'ovaire était beaucoup moins prononcée et généralement non visible sans l'aide de la formation image de bioluminescence (figure 1). Cependant, un raidissement de la CAM pourrait être ressenti avec des forceps dans la zone d'implantation. Ceci peut aider à identifier la croissance possible de tumeur en l'absence de la formation image de bioluminescence, bien qu'une validation supplémentaire serait exigée par l'histologie ou une autre méthode appropriée. Nous avons réussi l'engraftment des lignées cellulaires humaines et maurines qui montrent des morphologies compatibles avec celles observées dans d'autres modèles in vivo(figure 1A et 1B). En outre, l'implantation de morceaux de tumeur était possible (Figure 1C, flèche bleue indique la tumeur). La tumeur implantée dans ce cas-ci est venue d'un patient présentant le carcinome serous de haut-grade, métastatique, ovarien. Les tumeurs résultantes ont morphologiquement ressemblé à leurs tumeurs d'origine et ont exprimé des protéines humaines-spécifiques, telles que la cytokatine 8/18, qui permettent facilement leur différenciation des tissus embryonnaires de CAM et de poulet.
En optimisant l'engraftment et la croissance de tumeur, des facteurs ou des hormones appropriés de croissance peuvent être ajoutés au moment de l'implantation. Par exemple, une augmentation subtile et non significative de la taille de la tumeur (mesurée par le flux d'éclat total) a été observée dans les cellules ID8 lorsqu'elle est complétée par trois unités (U) d'hormone stimulant le follicule humain (FSH) au moment de l'implantation (Figure 1D). La sélection de FSH pour la croissance de cancer de l'ovaire a résulté de l'expression du récepteur de FSH dans les cellules d'ID8 et des niveaux élevés de FSH typiquement trouvés dans les femmes postmenopausal, qui constituent la majorité des cas de cancer ovarien. Des approches similaires peuvent être adoptées pour d'autres types de cancer difficiles à cultiver afin d'améliorer l'utilité du modèle DE MCA. En outre, FSH a été ajouté seulement au moment de l'implantation cellulaire. Le réapprovisionnement du facteur de croissance ou de l'hormone pourrait être accompli en pipetting une quantité appropriée de l'additif dans le milieu dans l'anneau antiadhésif à intervalles appropriés, ce qui pourrait améliorer l'effet.
Pour le cancer du rein, l'implantation de 2 x 106 cellules rénales claires carcinome à partir de lignées cellulaires établies, telles que RENCA, a produit une formation tumorale rapide et robuste, bien que des doses de cellules inférieures puissent également être utilisées (Figure 2A, 10 jours après l'implantation). Les tumeurs résultantes ont morphologiquement ressemblé à ceux obtenus par la souris standard in vivo modèles28. Implantation des cellules RENCA marquées de luciferase luciferase de luciferase permise la formation image de bioluminescence. Les tumeurs humaines primaires peuvent également être implantées. Les morceaux de tumeur ont persisté et ont recruté la vascularisation sans montrer la croissance significative. L'implantation de cellules digérées provenant d'un carcinome rénal primaire à cellules claires qui ont été étendus in vitro, cependant, s'est développée de façon similaire aux lignées cellulaires établies (Figure 2B). Les cellules rénales de carcinome peuvent être ensemencées utilisant la méthode d'anneau antiadhésif ou la méthode sans l'anneau antiadhésif.
Plusieurs lignées cellulaires du cancer de la prostate humaines et maurines ont été testées pour l'engraftment de CAM (figure 3). Chacune a bien grandi lorsque 2 x 106 cellules ont été implantées à l'aide de l'anneau antiadhésif. L'évaluation histologique des tumeurs résultantes était compatible aux espérances pour chaque ligne de cellules. En outre, l'implantation de cellules marquées de façon stable avec la luciferase luciferase a permis l'identification tumorale avec l'imagerie par bioluminescence (Figure 3A).
Le cancer de la vessie a été établi dans le modèle DE MCA à partir de lignées cellulaires établies et de morceaux de tissu humain primaire(figure 4). Les lignées cellulaires se sont bien développées lorsqu'elles ont été implantées avec 2 x 106 cellules sans l'anneau antiadhésif (Figure 4A et 4B), bien que l'implantation avec l'anneau ait été réussie. La tumeur humaine primaire peut être implantée à partir de morceaux de tissu (Figure 4C). Le cas présenté a provenu d'un patient présentant le carcinome urothelial de qualité élevé, non-muscle-invasif. L'implantation des cellules digérées n'a pas encore été essayée due à l'optimisation continue de digestion de tumeur. Les cellules cancéreuses des tumeurs résultantes de CAM ont conservé la morphologie de la tumeur originale, mais avec un composant stromal modifié. La croissance de tumeur était moins que pour le carcinome rénal de cellules et le cancer de la prostate, bien qu'encore facilement visible.
Pour assurer un nombre élevé d'œufs viables et asdiables au point d'extrémité, il faut prendre soin de l'incubation et de l'ouverture des œufs. Si les conditions de l'incubateur sont sous-optimales avant ou après l'implantation, la viabilité de l'embryon peut être compromise. En cas de décès embryonnaire important, dépannez les conditions de l'incubateur selon les instructions du fabricant. D'après notre expérience, la stabilité de la température et de l'humidité semble être plus cruciale que leurs valeurs exactes. Par conséquent, nous avons constaté que l'incubation des œufs inoculés dans un incubateur modifié de culture cellulaire, CO2 a atteint une viabilité supérieure à la conservation des œufs dans de petits incubateurs d'œufs dédiés qui nécessitent une ouverture plus fréquente pour reconstituer l'eau qui contrôle l'humidité. La réduction de la fréquence à laquelle les ovules inoculés sont enlevés pour l'examen de tumeur peut également améliorer la viabilité d'embryon.
Une autre préoccupation de l'implantation de CAM est l'intégrité du CAM à l'inoculation. Si le CAM n'est pas intact après l'ouverture de la coquille, l'anneau antiadhésif et les cellules implantées s'enfonceront dans l'albumine de l'embryon (voir la note après l'étape 2.12). Cela provoque la dispersion des cellules cancéreuses. Certaines tumeurs peuvent encore se former, mais les cancers qui reçoivent une croissance significative et la signalisation de survie des cellules cancéreuses voisines, telles que le cancer de l'ovaire, ne formera pas de façon fiable des tumeurs dans de telles conditions. Si des anneaux antiadhésifs sont utilisés pour l'implantation, la défaillance du CAM peut être identifiée par le naufrage de l'anneau dans l'albumine. Ceci doit être distingué des cas dans lesquels l'anneau et les cellules implantées ont été déplacés au fond de l'oeuf par le mouvement embryonnaire. Dans ces cas, l'anneau se trouve entre le CAM et le dessous de la coquille. Le mouvement embryonnaire ne peut pas être contrôlé. Cependant, le placement de l'anneau peut rendre plus difficile pour l'embryon de perturber les cellules implantées. Les anneaux placés sur les bords de la poche d'air générés à l'étape 2.7 sont plus susceptibles d'être déplacés par l'embryon que ceux placés au centre du champ.
Figure 1 : Développement de tumeurs représentatives du cancer de l'ovaire. Les cellules cancéreuses ovariennes implantées avec succès comprennent: (A) la lignée cellulaire humaine SKOV3, (B) la lignée cellulaire Murine ID8, et (C) tumeurs primaires. La coloration représentative d'hématoxylin et d'éosin est présentée avec la formation image de bioluminescence, le cas échéant. Pour la tumeur de CAM résultant de l'implantation d'un morceau primaire de tumeur (C) l'hématoxylin et la coloration d'éosine de la tumeur de CAM et de la tumeur primaire sont incluses, avec la coloration de cytokatin 8/18 (CK 8/18) de la tumeur résultante de CAM. La flèche bleue dans le premier panneau indique la tumeur. (D) Taille tumorale des implants ID8 avec et sans 3U FSH, calculée comme le flux total résultant de l'imagerie par bioluminescence (n 3 pour les implants non traités et n 4 pour le FSH-supplémenté). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 2 : Développement représentatif de tumeur du carcinome rénal clair de cellules. Tumeurs résultant de l'implantation de (A) la lignée cellulaire rénale murine de carcinome, RENCA, ou (B) cellules cultivées dérivées d'une tumeur primaire humaine digérée. L'échelle de mesure adjacente à la tumeur excisée dans (B) montre des marques de 1 mm. L'histologie correspondante dans (A) et (B) montre l'hématoxylin et la coloration de l'éosine. Dans (A), l'imagerie représentative de bioluminescence des cellules RENCA de luciferase-luciférae de luciferase de feu est également montrée. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 3 : Développement représentatif de tumeur des lignées cellulaires de cancer de la prostate. Tumeurs représentatives et l'hématoxyline et la coloration d'éosine résultant de l'implantation des lignées humaines de cellules de cancer de la prostate (A) CWR et (B) C4-2 avec la ligne de cellules murines (C) MyC-CaP. L'imagerie de bioluminescence des tumeurs résultantes des cellules marquées de CWR de luciferase de luciferase de luciferase de luciferase est montrée dans (A). L'échelle de mesure adjacente aux tumeurs excisées montre des marques de 1 mm. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 4 : Développement de tumeurs représentatives du cancer de la vessie. Tumeurs représentatives résultant de l'implantation des lignées cellulaires de cancer de la vessie humaine établies (A) HT-1376, (B) T24, et (C) tumeur primaire de la vessie humaine. Dans (C), l'hématoxylin et la coloration d'éosine de la tumeur résultante de CAM et la tumeur primaire sont montrées. L'échelle de mesure adjacente aux tumeurs excisées montre des marques de 1 mm. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Les auteurs n'ont rien à révéler.
Nous présentons le modèle chorioallantoic de membrane de poulet comme modèle alternatif, transplantable, in vivo pour l'engraftment des lignes gynécologiques et urologiques de cellules cancéreuses et des tumeurs patient-dérivées.
Les auteurs tiennent à remercier le Dr Fuyuhiko Tamanoi et Binh Vu pour la formation initiale sur cette méthode. Les discussions avec la Dre Eva Koziolek ont contribué à l'optimisation de cette approche et ont été très appréciées. Ce travail n'aurait pas été possible sans le financement des sources suivantes : la Bourse postdoctorale du Programme de recherche sur les maladies liées au tabac (27FT-0023, à l'ACS), au Programme de recherche sur le cancer de l'ovaire du ministère de la Défense (DoD) (W81XWH-17-1-0160), au NCI/NIH (1R21CA216770), au Prix pilote à impact élevé du Programme de recherche sur les maladies liées au tabac (27IR-0016) et au soutien institutionnel de l'UCLA, y compris une subvention de semences JCCC (NCI/NIH P30CA016042) et une subvention 3R du Bureau du vice-chancelier pour la recherche à LW.
| -010 Téflon (PTFE) Blanc 55 Duro Shore D Joints toriques | Le joint torique Store | TEF010 | Anneau antiadhésif pour l’ensemencement cellulaire. 1/4 « ID X 3/8 » OD X 1/16 « CS Polytétrafluoroéthylène (PTFE). |
| C4-2 | ATCC | CRL-3314 | Lignée cellulaire du cancer de la prostate humaine. |
| Les cellules CWR22Rv1 | CWR ont été l’aimable cadeau du Dr David Agus (Keck Medicine de l’Université de Californie du Sud) | ||
| Cytokératine 8/18 Anticorps (C-51) | Novus Biologicals | NBP2-44929-0.02mg | Utilisé à une dilution de 1:100 pour l’analyse immunohistochimique des tumeurs CAM ovariennes humaines. |
| D-Luciferin Firefly, sel de potassium | Goldbio | LUCK-1G | |
| Ciseaux opératoires délicats ; Courbé; Tranchant-tranchant ; Longueur de lame de 30 mm ; 4-3/4 po Longueur totale | Roboz Surgical | RS6703 | Ceci est fourni à titre d’exemple. Des ciseaux incurvés similaires fonctionneraient également. |
| Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Kit d’outils | Dremel | 8050-N/18 | Ce kit contient tous les outils nécessaires. |
| Œufs de poule fécondés (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade) | AA Lab Eggs Inc. | Il | faudrait identifier un fournisseur local d’œufs, car ce fournisseur ne livre qu’à l’échelle régionale. |
| HT-1376 | ATCC | CRL-1472 | Lignée cellulaire du cancer de la vessie humaine. |
| Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit | Incubator Incubator Warehouse | HB1588D-NONE-1102-1588-1357 | D’autres incubateurs d’œufs peuvent être utilisés, mais leur fiabilité devra être vérifiée. Après l’implantation, un incubateur de cellules avec le CO2 désactivé peut également être utilisé. |
| ID8 | Non disponible dans le commerce, veuillez consulter PMID : 10753190. | ||
| Incu-Bright Cool Light Oeuf Candler | Incubator Entrepôt | 1102 | D’autres chandelles peuvent être utilisées ; cependant, celle-ci est préférée parmi celles que nous avons testées. Ce chandelier est inclus dans le kit d’incubateur susmentionné. |
| Pince à iris, 10cm, incurvée, dentelée, pointes de 0,8 mm | World Precision Instrument | 15915 | Ceci est fourni à titre d’exemple. Toute pince incurvée similaire fonctionnerait également. Plusieurs marques ont été utilisées pour cette méthode. |
| Isoflurane | Clipper distribuant | 0010250 | |
| IVIS Lumina II Système d’imagerie in vivo | Perkin Elmer | ||
| Matrigel Membrane Matrix HC ; | Solution dematrice extracellulaire | Corning | 354248 | sans LDEV
| MyC-CaP | ATCC | CRL-3255 | Lignée cellulaire murine de cancer de la prostate. |
| Contrôleur de pipette portable Pipet-Aid XP | Drummond Scientific | 4-000-101 | Tout contrôleur de pipette similaire serait approprié. |
| Aiguilles hypodermiques PrecisionGlide | BD | 305196 | Ceci est fourni à titre d’exemple. N’importe quelle aiguille 18G fonctionnerait de la même manière. |
| RENCA | ATCC | CRL-2947 | |
| Pince Semken | Outils de science fine | 11008-13 | Ceci est fourni à titre d’exemple. Tout forceps similaire ou tout autre style qui convient aux préférences du chercheur serait approprié. |
| SKOV3 | ATCC | HTB-77 | Lignée cellulaire de cancer de l’ovaire humain. |
| Pince à échantillon | Microscopie électronique Sciences | 72914 | Ceci est fourni à titre d’exemple. Les pinces utilisées pour retirer la coquille pour l’imagerie par bioluminescence mesurent environ 12,8 cm de long avec des pointes de 3 mm de large. |
| Boules de coton stériles | Fisherbrand | 22-456-885 | Ceci est fourni à titre d’exemple. N’importe quelle boule de coton stérile suffirait. |
| Tiges d’agitation avec policier en caoutchouc ; 5 mm de diamètre, 6 pouces de longueur | United Scientific Supplies | GRPL06 | Ceci est fourni à titre d’exemple. N’importe quelle tige d’agitation en verre similaire fonctionnerait également. |
| T24 | ATCC | HTB-4 | Lignée cellulaire du cancer de la vessie humaine. |
| Tegaderm Pansement Transparent Original Frame Style 2 3/8 » x 2 3/4 | "Moore Medical | 21272 | |
| Boîtes de culture tissulaire, 10 cm de diamètre | Corning | 353803 | Ceci est fourni à titre d’exemple. Toute parabole stérile similaire de 10 cm peut être utilisée. Le traitement par culture tissulaire n’est pas nécessaire. |
| Tube de laboratoire transparent Tygon - Mur 1/4 x 3/8 x 1/16 (50 pieds) | Tygon | AACUN017 | Ceci est fourni à titre d’exemple. N’importe quel tube de taille similaire fonctionnerait également. |
