Prédire l’amputation à l’aide de cellules progénitrices mononucléaires circulantes locales chez les patients traités par angioplastie atteints d’ischémie des membres critiques

Summary

L’amputation de membre inférieur peut se produire même après angioplastie des vaisseaux obstrués dans l’ischémie critique de membre (CLI). Les cellules progénitrices mononucléaires (PMC) reflètent la réparation vasculaire. Le protocole actuel décrit la quantification des MPCs de la circulation près de l’angioplastie, et sa relation avec le dysfonctionnement endothélial et la prédiction de l’amputation de membre inférieur.

Abstract

L’ischémie critique de membre (CLI) représente un stade avancé de la maladie artérielle périphérique. L’angioplastie améliore le flux sanguin vers le membre inférieur; cependant, quelques patients progressent irréversiblement à l’amputation de membre. L’étendue des dommages vasculaires et les mécanismes de réparation vasculaire sont des facteurs affectant des résultats post-angioplastie. Les cellules progénitrices mononucléaires (PMC) sont réactives aux dommages vasculaires et à la réparation, avec la capacité de refléter des maladies vasculaires. Le présent protocole décrit la quantification des MPCs obtenus de la circulation sanguine du navire près du site d’angioplastie, aussi bien que sa relation avec le dysfonctionnement endothélial et sa capacité prédictive pour l’amputation de membre dans les 30 prochains jours après angioplastie dans les patients présentant CLI.

Introduction

La maladie artérielle périphérique (PAD) est caractérisée par une obstruction vasculaire chronique et progressive avec limitation de l’approvisionnement en sang¹. À l’échelle mondiale, le PAD des membres inférieurs touche environ 10 % de la population âgée, tandis que jusqu’à 7 % de ces cas sont soumis à l’amputation des^{membres 2,3}.

Critical Limb Ischemia (CLI) représente la présentation la plus sérieuse de PAD¹. Les patients éprouvent habituellement la douleur au repos, aux ulcères, ou à la gangrène attribuables aux artères occluses ;....

Protocol

Le comité d’éthique de la recherche institutionnelle du Centro Médico Nacional « 20 de Noviembre » ISSSTE a approuvé ce protocole prospectif, tous les patients inscrits ont fourni un consentement écrit éclairé.

1. Évaluation du bloc vasculaire du membre inférieur, de l’échantillonnage sanguin et de l’angioplastie de ballon

REMARQUE : L’échantillon d’étude utilisé pour cette expérience comprenait 20 patients diabétiques, âgés de 68 ans et 10 sur 20 étaient des hommes. La moitié de l’échantillon étaient des fumeurs et les comorbidités les plus répandues étaient le diabète sucré de type 2, l’hypertension artérielle sy....

Results

Des échantillons de sang provenant d’artères bloquées, sur le site traité pour angioplastie, ont été prélevés auprès de 20 patients diabétiques, âgés de 68 ans et 10 sur 20 étaient des hommes. La moitié de la population échantillonnée fumait. Les lésions vasculaires ont été principalement notées en tant que classe VI de Rutherford ; considérant que les patients présentaient une prévalence plus élevée de diabète sucré de type 2 (100 %), d’hypertension (70 %) dyslipidémie (55 %).

Un suivi cliniq.......

Discussion

La collecte de sang à l’emplacement précis du bloc vasculaire peut montrer des difficultés techniques ; par conséquent, nous avons effectué la collecte de sang à proximité du bloc vasculaire. De même, la quantité de MPCs près de la plaque vasculaire semble être fortement dynamique et peut provenir des variations avant et après l’angioplastie. Selon nos observations, il est recommandé d’évaluer les changements de base et de post-angioplastie de 30 min dans le nombre de MPCs, puisqu’ils peuvent refléter plusieurs processus.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	l’albumine sérique bovine (BSA) comme agent tampon, stabilisant, étalon et pour le mélange.
Perles d’étalonnage	Miltenyi Biotec / MACS#	130-093-607	Les billes d’étalonnage MACQuant sont fournies dans une solution aqueuse contenant 0,05 % d’azoture de sodium. 3,5 ml pour un maximum de 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS#	130-080-801	Anticorps conjugués à la R-Phycoérythrine dans un tampon PBS/EDTA
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS#	130-103-798	Monoclonal, isotype recombinant humain IgG1, conjugué
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS#	130-093-601	Anticorps conjugué à la R-Phycoérythrine dans un tampon PBS/EDTA
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS#	130-081-001	Le clone d’anticorps monoclonal AC136 détecte un épitope de classe III du CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS#	130-092-880	Anticorps monoclonal CD45, tubes coniques conjugués humains
	Thermo SCIENTIFIC	#339651	Tubes à centrifuger coniques de 15 ml
Tubes de cytométrie	FALCON Corning Brand	#352052	Tube à fond rond en polystyrène de 5 ml. Style 12x75. Stérile.
EDTA	BIO-RAD#	161-0729	Métaux lourds, (comme Pb) < 10 ppm, Fe< 0,01 %, As< 1ppm, insolubles< 0,005
%Neubauer amélioré	Sans marque	Sans numéro de catalogue	Hémocytomètre pour le comptage des cellules. (plage 0,1000 mm, 0,0025 mm2)
K2 EDTA Tubes de prélèvement sanguin	BD Vacutainer	#367863	Tube vacutainer en plastique lilas (K2E) 10,8 mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Stérile et vérifié la présence d’endotoxines. Densité : 1.077± ; 0,001g/mL
Paraformaldéhyde	SIGMA-ALDRICH		Fixation d’échantillons biologiques, (poudre, 95 %)
Pipette de transfert 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	La pipette de transfert est un outil qui facilite le transfert de liquide avec une plus grande précision.
Tubes à essai	KIMBLE CHASE	45060 13100	Tubes à essai résistants à la chaleur. TAILLE/CAPUCHON 13 x 100 mm