Name: Détection SDS-PAGE/Immunoblot de multimères de Aßi tissu cortical humain homogénats utilisant lantigène démas (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-23T04:53:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Découvrez la détection des multimères d'Aβ dans le tissu cortical humain par SDS-PAGE et immunoblot avec récupération antigénique. Cette méthode permet d'étudier la pathologie de la maladie d'Alzheimer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Un grand merci à Elaine Pranski et Carolyn Suwyn d&#39;assistance technique excellente et à Harry LeVine III, M. Paul Murphy, et se prépare pour des conversations importantes Marla. Le financement a été fourni par RR-00165, PO1AG026423, P50AG025688, AG030539, la Fondation Woodruff et le Comité de recherche de l&#39;Université Emory.

Partie 1: Préparation des homogénats de tissus clarifié <ol><li> Dounce homogénéiser non fixée tissu cortical en 4 fois le volume du tampon glacé (0,1 M tampon phosphate salin [Ca + + - et Mg + + libre] plus un cocktail 2x inhibiteur de la protéase [Santa Cruz]), avec environ 30 coups, même un pilon (c'est à dire ajouter des tampons 400μl à 100mg de tissu). </li><li> Homogénats Spin pendant 5 minutes à 3000 g (4 ° C). Retirez délicatement surnageants clarifiés et stocker des aliquotes de ces extraits à -80 ° C jusqu'à utilisation. </li><li> Déterminer la concentration en protéines totales (pg / pl) pour homogénats clarifiés à l'aide d'un acide bicinchoninique (BCA) dosage, selon les instructions du fabricant (ThermoFisher). </li></ol> Partie 2: Préparation des échantillons SDS-PAGE <ol><li> Avec un puits 10, 10-20% de gel tricine (Invitrogen), le volume maximal qui peut être chargé par puits est ~ 25 pi. Le volume total comprend 2x tampon d'échantillon SDS et 10x agent réducteur, de sorte que le volume maximal d'homogénat clarifié qui peuvent être chargés par puits est 10 ul. Clarification de 20% (p / v) homogénats corticaux doit avoir une concentration totale en protéines supérieure à 5 pg / pl, permettant de 50μg de protéines totales par puits. Échantillons contenant moins de protéines 5mg/ml nécessitera de chargement moins de protéines totales par puits. Toutefois, les taux de protéines élevé sont optimales pour la détection de Aß monomérique et agrégée (protéines totales 50-60μg est optimal). Toujours charger la même quantité de protéines totales par puits. </li><li> Pour chaque gel, la charge d'au moins un bien avec 10 ul d'un marqueur de poids moléculaire telles que SeeBlue Plus2 (Invitrogen). Comme contrôle positif, course de 10 100 ng de synthèse Aß40 ou Aß42 peptide (dilué dans 1xPBS) dans un autre puits. </li><li> Préparer des mélanges de réaction sur la glace, en utilisant fraîchement décongelé, homogénats clarifiés. Tubes vortex pendant 5-10 secondes, de la chaleur dans un bain à sec à 100 ° C pendant 5 minutes, puis rapidement tourner tous les échantillons pour enlever la condensation dans le bouchon. </li></ol> Partie 3: L'électrophorèse sur gel SDS-PAGE <ol><li> Charger les échantillons au vortex sur un gel tricine 10-20% dans l'XCell Sure Lock mini-cellule Gelbox, en utilisant Tricine tampon SDS courir, conformément aux instructions du fabricant (Invitrogen), </li><li> Exécuter gel à une tension constante de 125V pendant environ 90 minutes. Laissez échantillons courir jusqu'à la bande de marqueur 4KDa est d'environ 1 cm du bas du gel. </li></ol> Partie 4: Protéines Transfert à partir de gels d'Membranes <ol><li> Retirez délicatement les gels de boîtier en plastique et d'assembler les sandwichs le transfert à l'intérieur du module XCell II Blot, conformément aux instructions du fabricant (Invitrogen). Pré-humide buvard plaquettes et des membranes de nitrocellulose 0,2 um avec du Tris-Glycine transfert de mémoire tampon (20% de méthanol), et éliminer les bulles d'coussinets buvard ou papier filtre / membrane sandwich. </li><li> Dans le Gelbox XCell, remplir la chambre intérieure avec un tampon de transfert et de remplir la chambre extérieure avec DIH 2 O (exposition méthanol peut s'user l'gelbox en plastique au cours du temps). </li><li> Exécuter le transfert pendant 2-3 heures à une intensité constante de 25mA. </li><li> Lorsque le transfert est terminé, déconstruire le sandwich et le lieu des gels en DIH 2 O et les membranes dans 1xPBS, à la fois dans le carré des boîtes de Pétri en plastique (ou un autre récipient approprié). </li><li> Pour visualiser l'efficacité du transfert de protéines, les gels peuvent être colorés avec Simply Blue SafeStain (Invitrogen), et les membranes avec du Ponceau S tache rouge (Aldrich Sigma), à la fois selon les instructions du fabricant. Cette coloration ne pas interférer avec immunoblot. Si la coloration révèle la protéine de transfert inefficaces, de modifier le temps de transfert à l'étape 3. </li></ol> Partie 5. Antigène-épitope de récupération &amp; immunoblot <ol><li> Récupération d'antigène est une étape importante en révélant les épitopes Aßi sur la membrane pour la liaison des anticorps au cours immunoblot. Toute bain vapeur, micro-ondes, ou de l'eau qui maintient une température constante de 100 ° C suffisent. Pour la récupération d'antigène dans un bateau à vapeur, la chaleur de la membrane d'étanchéité dans une pochette en plastique robuste Kapak rempli 1xPBS, à température ambiante. Posez le plat dans un sachet vapeur préchauffé, une fois le sachet commence à se dilater, incuber pendant 15 minutes supplémentaires. Laisser la membrane à refroidir lentement avant de le retirer de la poche, pour éviter le froissement excessif. </li><li> A température ambiante, retirez soigneusement la membrane de la poche vapeur et rincer la membrane pendant 5 minutes dans 1xPBS, suivie d'un rinçage de 5 minutes dans du TBS-T (Tris-Buffered Saline, pH 8,0 avec 0,05% de Tween-20 [Sigma] ), sur un agitateur orbital. Incuber la membrane dans une solution de blocage (lait écrémé 2,5% dans du TBS-T) pour une heure, je tremblais. Sans rinçage, le transfert de la membrane d'un plat ou d'un sachet en plastique contenant l'anticorps primaire dilué dans une solution de blocage (6E10 au 1:1000 [1μg/ml] 1:5.000 [0.2μg/ml] dilution, Covance), bulle en évitants. Incuber sur un agitateur orbital à température ambiante pendant une heure puis 24-48 heures d'agitation à 4 ° C (incubation plus longue peut donner un meilleur signal). </li><li> Rincer la membrane pendant 30 minutes dans du TBS-T (un rinçage rapide suivie par rinçages x 3 minutes 10). </li><li> Incuber la membrane dans HRP-anticorps secondaire conjugué (Amersham ECL mouton anti-souris, GE Healthcare), dilué au 1:10000 en solution de blocage, pendant 90 minutes sur l'agitateur à température ambiante. </li><li> Rincer la membrane pendant 30 minutes dans du TBS-T (un rinçage rapide suivie par rinçages x 3 minutes 10). </li><li> Sur le shaker, incuber la membrane fraîchement faite SuperSignal Ouest réactif électrochimioluminescence Pico (ThermoFisher) pendant 5 minutes, éponger l'excès de réactif sur off non pelucheux papier filtre et placer la membrane dans une cassette de film, entre les protecteurs feuille de plastique. Blot hors supplémentaires réactif SuperSignal avec de la poussière sans Kimwipes si nécessaire. </li><li> Exposer à Kodak Biomax MR film pour des intervalles de 30 secondes jusqu'à 30 minutes et se développer dans un développeur film. Après 5 minutes, les bandes monomère Aßi sera probablement saturé. </li><li> Les membranes peuvent être dépouillé (après rinçage dans du TBS-T) en agitant dans Restore Plus de décapage de tampon pendant 30 minutes à température ambiante et sondé avec des anticorps supplémentaires, si désiré. </li></ol> Partie 6: Représentant Immunoblot: <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1a.jpg" alt="Figure 1a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1a"> <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1b.jpg" alt="Figure 1b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1b"> <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1c.jpg" alt="Figure 1c" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1c"> Les figures 1a-c. Homogénats clarifié contenant 50μg de protéines totales de 7 sujets humains sont analysés pour la présence de Aßi multimérique et APP. Immunoblot avec des anticorps 6E10 révèle monomères Aßi, dimères, trimères, tétramères, et l'APP (bande supérieure) dans tous les cas d'Alzheimer, ainsi que plus abondante moléculaires multimères Aßi poids dans 2 cas après JC. Synthétique Aß40 confirme l'identité des bandes plus faible poids moléculaire. AD: La maladie d'Alzheimer, DLB: La démence à corps de Lewy, ND: non déments humaine (a) l'exposition du film de 30 minutes, (b) l'exposition du film de 5 minutes, (c) une exposition de 30 secondes du film..

<ol><li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+beta-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 8, 101-112 (2007).</li>
<li>Walker, L. C., LeVine, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cerebral+proteopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Aging%22%5BJournal%5D)">The cerebral proteopathies.</a> Neurobiol. Aging. 21, 559-561 (2000).</li>
<li>Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging%2C+amyloid%2C+and+Alzheimer%27s+disease%3A+a+perspective+in+honor%5BTitle%5D)+AND+%22of+Carl+Cotman.+Neurochem.+Res%22%5BJournal%5D)">Aging, amyloid, and Alzheimer's disease: a perspective in honor.</a> of Carl Cotman. Neurochem. Res. 28, 1705-1713 (2003).</li>
<li>Walsh, D. M., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abeta+oligomers+-+a+decade+of+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Abeta oligomers - a decade of discovery.</a> J. Neurochem. 101, 1172-1184 (2007).</li>
<li>Swerdlow, P. S., Finley, D., Varshavsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+immunoblot+sensitivity+by+heating+of+hydrated+filters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Enhancement of immunoblot sensitivity by heating of hydrated filters.</a> Anal. Biochem. 156, 147-153 (1986).</li>
<li>Ida, N., Hartmann, T., Pantel, J., Schröder, J., Zerfass, R., Förstl, H., Sandbrink, R., Masters, C. L., Beyreuther, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+hetergeneous+A4+peptides+in+human+cerebrospinal+fuid+and+blood+by+a+newly+developed+sensitive+Western+blot+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of hetergeneous A4 peptides in human cerebrospinal fuid and blood by a newly developed sensitive Western blot assay.</a> J. Biol. Chem. 271, 22908-22914 (1996).</li>
</ol>

Malgré l&#39;importance de l&#39;agrégation Aßi dans la pathogenèse de la maladie d&#39;Alzheimer 1,4,5, peu d&#39;études ont décrit ou quantifié la distribution de divers multimères Aßi dans des échantillons de tissu cortical 2. Communément utilisé des techniques d&#39;immunohistochimie ne permettent pas la discrimination des espèces distinctes Aßi multimérique dans le tissu cortical fixe. En non fixée homogénats de tissus corticaux, multimères Aßi peuvent être séparés et évalués à l&#39;aide bioc...

<table><tbody><tr><td>Comprimés de cocktail d'inhibiteurs de protéases complets</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>Sc-29130</td><td>1 comprimé dans 25 ml de tampon</td></tr><tr><td>Kit d'essai protéique BCA</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>XCell SureLock Mini-Cell et kit du module de transfert XCell II, marquage CE</td><td>Invitrogen</td><td>EI0002</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS Sample Buffer (2X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC1676</td><td></td></tr><tr><td>Réactif réducteur NuPAGE (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>NP0004</td><td></td></tr><tr><td>Marqueurs standards pré-teintés SeeBlue Plus2</td><td>Invitrogen</td><td>LC5925</td><td></td></tr><tr><td>Novex 10-20 % Tricine Gel, épaisseur 1,0 mm, 10 puits</td><td>Invitrogen</td><td>EC6625BOX</td><td></td></tr><tr><td>Membranes de nitrocellulose, taille de pore 0,2 &amp;mu;m</td><td>Invitrogen</td><td>LC2000</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS Running Buffer (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC1675</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC3675</td><td></td></tr><tr><td>SimplyBlue SafeStain</td><td>Invitrogen</td><td>LC6060</td><td>Ne perturbera pas la coloration immunologique</td></tr><tr><td>Solution de coloration rouge ATX Ponceau S</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>09276</td><td>Ne perturbera pas la coloration immunologique</td></tr><tr><td>Sachets en plastique scellables Kapak pour échantillons</td><td>Fisher Scientific</td><td>0181225AA</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps monoclonal de souris 6E10 dirigé contre A&amp;#946;(1-16)</td><td>Covance</td><td>SIG-39320</td><td>Diluer de 1:1 000 à 1:5 000 pour le Western blot</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>ECL Mouse IgG, anticorps total anti-A&amp;#946; conjugué à la HRP (provenant de mouton)</td><td>GE Healthcare</td><td>NA931-1ML</td><td>Diluer à 1:10 000</td></tr><tr><td>Substrat chimiluminescent SuperSignal West Pico</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>34077</td><td></td></tr><tr><td>Plaques Kodak Biomax MR</td><td>Carestream Health</td><td>870 1302</td><td></td></tr></tbody></table>

détection sds-page/immunoblot de multimères de aßi tissu cortical humain homogénats utilisant l&#39;antigène démas

SDS-PAGE/Immunoblot Detection of A&beta; Multimers in Human Cortical Tissue Homogenates using Antigen-Epitope Retrieval

Le pliage anormal et la polymérisation de la β-amyloïde (Aß) peptide est pensé pour initier la cascade dans la pathogenèse de maladies neurodégénératives maladie d&#39;Alzheimer<sup&gt; 1</sup&gt;. Aßi est surtout un 40 - peptide d&#39;acide ou de 42-amino qui est sujette à l&#39;auto-agrégation en β-feuille riche en fibrilles amyloïdes qui se trouvent dans les noyaux de plaques séniles dans le cerveau La maladie d&#39;Alzheimer. L&#39;augmentation de preuves suggère que de faible poids moléculaire, solubles multimères Aßi sont plus toxiques que l&#39;amyloïde Aß fibrillaire<sup&gt; 2</sup&gt;. L&#39;identification et la quantification des espèces de faible poids moléculaire élevé et de Aßi multimérique dans le tissu cérébral est un objectif essentiel dans la recherche la maladie d&#39;Alzheimer, et les méthodes employées peuvent également être appliquées à l&#39;identification et la caractérisation des multimères toxiques dans d&#39;autres proteopathies<sup&gt; 3</sup&gt;. Naturellement multimères Aßi peuvent être détectés par électrophorèse en gel de polyacrylamide-SDS suivie par immunoblot avec des anticorps spécifiques Aßi. Cependant, la séparation et la détection de Aß multimérique nécessite l&#39;utilisation de très concentrée homogénats corticaux et la récupération d&#39;antigène dans les petites membranes de nitrocellulose la taille des pores. Nous décrivons ici une technique pour la préparation de clarifier humaine homogénats corticaux, la séparation des protéines par SDS-PAGE, et l&#39;antigène de démas / blot avec des anticorps 6E10 à la région N-terminale du peptide Aß occidentaux. En utilisant ce protocole, nous avons constamment détecter les monomères Aßi, dimères, trimères, tétramères, et plus multimères de poids moléculaire dans le tissu cortical des humains à la pathologie d&#39;Alzheimer.

Nous décrivons une technique pour la préparation de clarifier humaine homogénats corticaux, la séparation des protéines par SDS-PAGE, la récupération d&#39;antigène et immunoblot avec un anticorps dirigé contre le peptide Aß. En utilisant ce protocole, nous avons constamment de détecter Aßi monomère et multimère dans le tissu cortical des humains à la pathologie d&#39;Alzheimer.

Détection SDS-PAGE/Immunoblot de multimères de Aßi tissu cortical humain homogénats utilisant l&#39;antigène démas

On pense que le repliement et la polymérisation anormaux du peptide bêta-amyloïde (Aβ) initient la cascade neurodégénérative dans la maladie d'Alzheimer...

Ce protocole permet la détection d'une bêta maltase dans un tissu cortical humain. Tout d'abord, le tissu homogénéisé est soumis à une sonication par sonde et clarifié par une centrifugation à faible vitesse. Ensuite, les échantillons réduits sont portés à ébullition dans un tampon SDS et chargés sur un gel de polyacrylamide.Les protéines du gel sont transférées sur une membrane de nitrocellulose et la membrane est chauffée à la vapeur dans une solution saline tamponnée au phosphate. Enfin, sur un agitateur orbital, la membrane est incubée toute la nuit dans un anticorps primaire, puis un anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort, puis dans un réactif de luminol et de peroxyde avant exposition à un film radiographique. Bonjour, je suis Rebecca Rosen du laboratoire de Larry Walker du Département des neurosciences du Centre de recherche primatologique national Yerkes à l'Université Emory.Aujourd'hui, nous allons vous montrer comment détecter les multimères d'Abeta et l'homogénéité corticale à l'aide d'une électrophorèse sur gel SDS et d'un immunoblotting avec une récupération d'antigène induite par la chaleur. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour

sds-pageimmunoblot-detection-multimers-human-cortical-tissue

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

L'addition réversible aux protéines de palmitate est un régulateur important du trafic intracellulaire des protéines. Ceci est d'un intérêt particulier dans les neurones où de nombreuses protéines synaptiques sont palmitoylées. Nous utilisons une méthode simple biochimique pour détecter les protéines dans les neurones en culture palmitoylées, qui peuvent être adaptés à plusieurs types de cellules et de tissus.

Détection de la palmitoylation des protéines dans les neurones de l&#39;hippocampe en culture par immunoprécipitation et Acyl-biotine Exchange (ABE)

Un protocole d'extraction de la protéine en utilisant un tampon commun urée / thiourée / SDS pour le tissu cérébral des souris humain et permet indentification de protéines par 2D-DIGE et leur caractérisation ultérieure par un mini 2DE immunoblot. Cette méthode permet un pour obtenir des résultats plus fiables et reproductibles à partir de biopsies humaines et des modèles expérimentaux.

Protéines consensus dérivé du cerveau, Protocole d&#39;extraction pour l&#39;étude de l&#39;homme et du protéome murin cerveau en utilisant deux 2D-DIGE et Mini 2DE Immunoblotting

Ici, nous présentons un protocole pour l’isolement de l’alpha-synucléine (α-syn) de plus en plus insoluble/agrégée à partir de tissu cérébral humain post-mortem. Grâce à l’utilisation de tampons à la résistance détergente croissante et à des techniques d’ultracentrifugation à grande vitesse, les propriétés variables de l’agrégation α-syn dans les tissus malades et non malades peuvent être examinées.

Extraction séquentielle de soluble et insoluble alpha-synucléine de Brains parkinsoniens

Nous présentons un protocole permettant d’identifier des fractions protéiques contenant des antigènes pour les anticorps IgM humains et murins avec des chaînes légères spécifiques kappa (Vκ). Ce protocole n’est pas limité aux anticorps de classe IgM mais s’applique à tous les isotypes d’immunoglobulines qui ciblent leur antigène avec une affinité suffisamment élevée lors des immunoprécipitations.

Spécificité des anticorps de liaison pour Kappa (VK) humaines (IgM) contenant de chaîne légère: POLYSIALIQUE Acid (PSA) Rattaché à NCAM comme étude de cas

Procédé pour la stabilisation et la séparation des complexes de protéines natives à partir de lysat de tissu non modifié en utilisant une protéine réactive amine agent de réticulation couplé à une nouvelle électrophorèse sur gel de polyacrylamide en deux dimensions (PAGE) système est présentée.

Multimère-PAGE: un procédé de capture et de résolution de complexes de protéines dans des échantillons biologiques

Ici, les auteurs présentent un protocole simple et efficace pour définir un épitope antigénique linéaire à l’aide d’un anticorps monoclonal purifié et d’un balayage peptidique par hybridation dot-blot. L’épitope identifié peut ensuite être utilisé dans des applications thérapeutiques et diagnostiques.

L&#39;identification d&#39;un épitope linéaire des cellules B monoclonales d&#39;anticorps reconnus par le peptide à balayage assistée

Un protocole de fractionnement abrégée pour l’enrichissement des agrégats de protéine insoluble dans le détergent du cerveau post-mortem humain est décrite.

Enrichissement des agrégats de protéine insoluble dans le détergent du cerveau post-mortem humain

Ce protocole décrit comment préparer des oligomères bêta-amyloïdes d’un peptide synthétique in vitro et d’évaluer les quantités relatives des oligomères bêta-amyloïdes par une dot blot analyse.

A11-positif β-amyloïde oligomère préparation et évaluation à l’aide de Dot Blot Analysis

Ce travail décrit la synthèse et la caractérisation d'un homo-PROTAC bifonctionnel à base de pomalidomide comme une nouvelle approche pour induire l'ubiquitination et la dégradation du cereblon de ligase d'ubiquitine E3 (CRBN), la cible des analogues de la thalidomide.

Inactivation chimique de l'E3 Ubiquitin Ligase Cereblon par des Homo-PROTAC à base de Pomalidomide

Les interactions protéine-protéine sont importantes pour élucider la fonction des protéines cibles, et la co-immunoprécipitation (co-IP) peut facilement confirmer les IPP. Nous avons transfecté transitoirement un plasmide codant pour une protéine marquée à un épitope dans des cellules HEK-293 et développé une méthode d’immunoprécipitation pour confirmer facilement la liaison de deux protéines cibles.

Immunoprécipitation avec un gel d’affinité anti-épitope pour étudier les interactions protéine-protéine

Nous décrivons ici un système de levure reconstituant la γ-sécrétase humaine. Ce système permet d’identifier et d’étudier les mutations affectant l’activité et de cribler les inhibiteurs de la γ-sécrétase (GSI). En utilisant les propriétés de perte de fonction des mutants familiaux de la maladie d’Alzheimer, il est possible de dépister les modulateurs de la γ-sécrétase (GSM).

Saccharomyces cerevisiae Modèles de la maladie d’Alzheimer pour cribler les gènes, les mutations et les produits chimiques affectant la production de bêta-amyloïde par la γ-sécrétase

Découvrez la détection des multimères d'Aβ dans le tissu cortical humain par SDS-PAGE et immunoblot avec récupération antigénique. Cette méthode permet d'étudier la pathologie de la maladie d'Alzheimer.

Détection SDS-PAGE/Immunoblot de multimères de Aßi tissu cortical humain homogénats utilisant l'antigène démas

Explorer plus de vidéos