Name: Linjection dARNdb dans Femme Mosquitos aegypti A. (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 24 s
Description: Apprenez l'injection d'ARNdb dans les moustiques Aedes aegypti femelles pour étudier les fonctions géniques liées à la biosynthèse des stéroïdes. Cette technique permet d'explorer la résistance aux agents pathogènes vecteurs.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Faire des aiguilles de microinjection en tirant des tubes capillaires en verre. Nous utilisons un extracteur d&#39;aiguilles à partir du CO Instrument Sutter, (modèle P-2000). Les spécifications d&#39;aiguille extracteur programme sont: la chaleur: 275 Fil: 3 vel: 37 del: 250 Pul: 125 </li><li> Charger un volume connu (par exemple, 1 pi) d&#39;eau dans les aiguilles et les marquer manuellement la balance avec un Sharpie fine. </li><li> Mettre en place une tasse de post-injection pour les moustiques. D&#39;abord couper la pointe plus haute hors d&#39;un embout de pipette 1000 pi. Ensuite, découpez un trou dans le côté d&#39;une tasse et insérer la partie restante de la pointe de la pipette dans la tasse. Mettez un filet ou un couvercle sur le dessus de la tasse. </li><li> Remplir deux boîtes de styromousse avec la glace. Boîte de glace de la Place n ° 1 sous un stéréomicroscope et le lieu de verre un verre de montre sur la glace. </li><li> Anesthésier les moustiques adultes avec le CO 2 et la Coupe du lieu avec les adultes dans la boîte de glace # 2. </li><li> Préparer l&#39;aiguille pour l&#39;injection d&#39;ARNdb. Mettez l&#39;aiguille remplie d&#39;ARNdb sur le tuyau en plastique du bloc d&#39;injection (pour la description du bloc d&#39;injection voir ci-dessous). </li><li> Déplacer un moustique anesthésiées de la tasse pour le verre de montre avec une pince. Pause pointe de l&#39;aiguille d&#39;injection sur la cuticule des moustiques. Jeter ce moustique. </li><li> Pour les injections, l&#39;aiguille est insérée dans le thorax du moustique. Avec votre main libre, régler la vanne sur l&#39;injecteur de «position de repos&quot; à &quot;la position d&#39;injection&quot; et compresser piston jusqu&#39;à la quantité désirée d&#39;ARNdb a été injecté. </li><li> Placez injecté moustiques en post-injection tasse. </li></ol> Bloc d&#39;injection mis en place <ol><li> Fixer une seringue de 50 ml à un bloc de ciment. </li><li> Attacher une réglable 1 clapet anti-retour à l&#39;extrémité de la seringue avec au moins deux sorties d&#39;air. </li><li> Fixez un tuyau en plastique hermétique pour une sortie d&#39;air. </li><li> Insérez un adaptateur micropipette dans l&#39;extrémité libre du tuyau. </li></ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

l&#39;injection d&#39;arndb dans femme mosquitos aegypti a.

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Inverse des approches génétiques se sont avérées extrêmement utiles pour déterminer quels gènes de résistance sous-tendent à des agents pathogènes vecteurs de moustiques. Ce protocole vidéo illustre une méthode utilisée par le laboratoire de James à injecter dans les ARNdb femelles moustiques A. aegypti, qui abritent le virus de la dengue. La technique pour l&#39;étalonnage des aiguilles d&#39;injection, de manipuler la configuration d&#39;injection, et l&#39;injection ARNdb dans le thorax est illustré.

L&#39;injection d&#39;ARNdb dans Femme Mosquitos aegypti A.

Les approches de génétique inverse se sont avérées extrêmement utiles pour déterminer quels gènes sous-tendent la résistance aux pathogènes vectoriels chez les moustiques. Cette vidéo...

Bonjour, je m'appelle Brian Luna. Je suis aujourd'hui à l'Université de Californie à Irvine, en provenance du laboratoire James. Aujourd'hui, je vais vous parler d'injections d'ARN double brin chez des moustiques femelles adultes de génotype huities gyp.Ainsi, la procédure consiste à utiliser un montage manuel et à injecter les femelles adultes dans le thorax. Des injections d'ARN double brin peuvent être utilisées pour inhiber l'expression de nombreux gènes dans notre laboratoire. Plus précisément, nous les utilisons pour inhiber des gènes liés à la biosynthèse des stéroïdes.Maintenant, je vais vous parler de la préparation des aiguilles. Je prépare actuellement les aiguilles à l’aide de ces capillaires en verre de silicate de bore. Ces capillaires sont étirés sur notre étireuse pour micro-injection Sutter, et l’étape suivante, une fois les aiguilles étirées, consiste à les étalonner à l’aide d’eau.La prochaine étape de ce processus consiste en l'étalonnage des aiguilles. Une fois que les aiguilles ont été tirées du Sutter Polar, elles présentent un aspect tel que le produit final comporte des aiguilles clairement marquées à l'aide d'un feutre noir. Afin de normaliser les marquage

injection-of-dsrna-into-female-a-aegypti-mosquitos

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dans cette vidéo, Nijole Jasinskiene démontre la méthodologie employée pour générer transgéniques moustiques Aedes aegypti, vecteurs de la dengue. Les techniques pour la préparation correcte des aiguilles de microinjection, desséchants embryons, et effectuant la microinjection sont démontrés.

Microinjection d&#39;embryons aegypti a. Pour obtenir les moustiques transgéniques

Inverse des approches génétiques se sont avérées extrêmement utiles pour déterminer quels gènes de résistance sous-tendent à des agents pathogènes vecteurs de moustiques. Ce protocole vidéo illustre une méthode utilisée par le laboratoire Dimopoulos à injecter dans les ARNdb Anopheles gambiae moustiques, qui abritent le parasite du paludisme. La technique de manipulation de l'installation d'injection et injection ARNdb dans le thorax est illustré.

Protocole pour des essais de l&#39;ARNi dans les moustiques adultes (A. gambiae)

Dans ce protocole, nous combinons silencing RNAi-médiée avec un...

Inactivation génique médiée par ARNi et<em&gt; In Vivo</emEssai diurèse&gt; Femmes adultes<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Les moustiques

Source : Liu, P., et al. Utilisation d'un dénovirus recombinant de moustique comme vecteur de transfert génique pour l'analyse fonctionnelle de gènes chez les larves de moustiques. J. Vis. Exp. (2017)Ce vidéo montre l'utilisation de densovirus recombinants de moustiques codant des microARN pour inhiber l'expression de gènes spécifiques chez les larves de moustiques. Les larves jeunes infectées produisent des microARN fonctionnels qui suppriment l'expression du gène cible en vue d'études...

Silencage génique médié par un densovirus recombinant chez les larves de moustiques

Dans cette vidéo, nous démontrons l’administration de la construction du forçage génétique dans l’embryon du moustique Anopheles gambiae grâce à la technique de micro-injection embryonnaire. Cette procédure permet d’intégrer la construction de l’ADN livrée, par recombinaison homologue, dans les cellules germinales pour générer une population de moustiques transformée.

Microinjection d’embryons de moustiques : une technique pour délivrer de l’ADN exogène dans le jaune d’embryon d’Anopheles gambiae afin de générer des mutations germinales

Nous décrivons ici une procédure pour inhiber la fonction des gènes chez les moustiques vecteurs de la maladie grâce à l'utilisation de chitosane / interférer nanoparticules d'ARN qui sont ingérés par les larves.

Chitosane / ARN interférant nanoparticules Mediated Gene Silencing dans la maladie vectorielle larves de moustiques

interférence ARN (ARNi) est un outil extrêmement précieux pour découvrir la fonction des gènes. Cependant, la capacité de cibler des gènes à l’aide de l’ARNi au cours des stades préadultes est limitée chez le principal vecteur du paludisme humain, Anopheles gambiae. Nous décrivons un protocole ARNi pour réduire la fonction des gènes par injection directe pendant le développement de la nymphe.

ARNi Trigger Livraison en<em&gt; Anopheles gambiae</em&gt; pupes

Nous rapportons en utilisant une artificiel intronic petit RNA expression stratégie à élaborer un recombinant non défectueux densovirus (AaeDV) Aedes aegypti in vivo système de livraison. Une procédure détaillée pour la construction, emballage et l’analyse quantitative des vecteurs rAaeDV aussi bien en ce qui concerne l’infection larvaire est décrite.

Utilisation d’un moustique Recombinant Densovirus comme un vecteur de livraison de gène pour l’analyse fonctionnelle des gènes chez les larves de moustiques

Ce protocole décrit une méthode de microinjection que nous avons normalisé et utilisé depuis plusieurs années à livrer des quantités d’acides nucléiques spécifiques directement à l’hémolymphe des moustiques et des mouches domestiques. Ce protocole se traduit par la mortalité injection minime et permet des mesures de dose en corrélation de la fécondité.

DsRNA reproductible Microinjection et bioessais sur la ponte chez les moustiques et les mouches domestiques

L’administration orale d’ARNd produit par des bactéries, une méthode d’administration de l’interférence ARN (ARNi) couramment utilisée chez Caenorhabditis elegans, a été appliquée avec succès ici aux moustiques adultes. Notre méthode permet des études robustes de génétique inverse et des études de vecteurs bloquant la transmission sans l’utilisation de l’injection.

Administration efficace d’interférence ARN orale (ARNi) aux moustiques anophèles gambiens adultes

Nous décrivons ici un protocole détaillé d’édition du génome par micro-injection embryonnaire chez le moustique A. aegypti à l’aide de la technologie CRISPR-Cas9.

Édition du génome du moustique de la fièvre jaune Aedes aegypti à l’aide de CRISPR-Cas9

Apprenez l'injection d'ARNdb dans les moustiques Aedes aegypti femelles pour étudier les fonctions géniques liées à la biosynthèse des stéroïdes. Cette technique permet d'explorer la résistance aux agents pathogènes vecteurs.

L'injection d'ARNdb dans Femme Mosquitos aegypti A.

Explorer plus de vidéos