Quantification de l’alginate bactérien à l’aide du dosage du carbazole d’acide uronique

Prenez une culture de la bactérie Pseudomonas aeruginosa dans un bouillon.

Placez la culture sur une gélose d’isolement et incubez pour favoriser la croissance bactérienne et la production d’alginate, un exopolysaccharide composé d’acides uroniques.

Ajoutez une solution saline isotonique à la pelouse bactérienne et grattez pour recueillir les cellules bactériennes avec l’alginate.

Transférez la suspension dans un tube, vortex pour disperser le contenu et placez-la sur de la glace pour éviter la dégradation enzymatique.

Mesurez la densité optique, ou DO, pour déterminer la densité bactérienne.

Ajouter la suspension bactérienne à la solution d’acide-borate et mélanger pour hydrolyser l’alginate en monomères d’acide uronique.

Ajoutez du carbazole, un réactif chromogène, et incubez. Dans des conditions acides, le réactif réagit avec les acides uroniques pour former des complexes colorés.

Mesurez l’absorbance pour quantifier les niveaux d’acide uronique, qui reflètent la concentration d’alginate.

À l’aide d’une courbe standard, déterminez la concentration d’alginate, puis divisez-la par la densité cellulaire bactérienne mesurée pour calculer la production d’alginate par unité de biomasse.

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