Quantification de l’alginate bactérien à l’aide d’un dosage immuno-enzymatique à base d’anticorps

Prenez une microplaque avec un échantillon contenant de l’alginate, un exopolysaccharide protecteur produit par la bactérie Pseudomonas aeruginosa.

Préparer une dilution en série d’un étalon dérivé d’un alginate pour quantifier la concentration d’alginate dans l’échantillon.

Ajouter un tampon de revêtement et incuber pour faciliter l’adhérence des molécules à la surface du puits.

Laver pour éliminer les molécules non liées.

Incuber avec un agent bloquant pour masquer les sites de liaison non spécifiques.

Lavage, puis incubation avec des anticorps primaires spécifiques à l’alginate.

Laver à nouveau, puis incuber avec des anticorps secondaires conjugués à des enzymes qui ciblent les anticorps primaires.

Laver puis incuber avec un substrat chromogène, que l’enzyme oxyde pour produire un produit coloré.

Ajoutez une solution acide qui arrête la réaction et améliore la couleur pour permettre la détection colorimétrique.

À l’aide d’un lecteur de microplaques, mesurez l’intensité de la couleur.

Créez une courbe standard à partir des intensités des dilutions standard et tracez l’intensité de l’échantillon pour déterminer la concentration en alginate.

À l’aide d’une micropipette, ajoutez 50 microlitres