JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:18 min • August 31st, 2026
Prendre une culture d'amibe infectée par un virus géant appelé Faustovirus.
Prélevez le surnageant de culture contenant le Faustovirus.
Sur une grille de microscopie électronique ayant subi une décharge lumineuse, déposez le surnageant.
Incuber pour permettre l'adsorption des particules virales sur la grille.
Éponger la grille sur du papier filtre pour éliminer les particules virales non liées.
Déposer une goutte de molybdate d'ammonium.
Le molybdate d'ammonium agit comme une coloration négative en se liant à la grille autour du virus et en assombrissant le fond pour améliorer le contraste lors de l'imagerie.
Éliminer l'excès de molybdate d'ammonium en tamponnant la grille sur du papier filtre.
Placez la grille sur une boîte de Pétri et laissez-la sécher.
Ensuite, placer la grille sur le porte-échantillon.
Introduire le porte-échantillon dans le microscope électronique.
Capturez une image du Faustovirus et mesurez la taille du Faustovirus pour une analyse ultérieure.
Pour réaliser une microscopie électronique, déposez cinq microlitres de l'échantillon positif sur une grille préalablement soumise à une décharge lumineuse, puis incubez à température ambiante pendant environ 20 minutes. Séchez délicatement la grille, puis ajoutez une petite quantité de molybdate d'ammonium à 1 % et incubez pendant 10 secondes. Après avoir soigneusement éliminé la goutte, laissez la grille sécher pendant cinq minutes. Ensuite, réglez le microscope électronique à 200 kiloélectrons-volts. Placez ensuite la grille sur le porte-objet et introduisez ce dernier dans le microscope. Cliquez sur l'icône de visualisation du vide et vérifiez le niveau de vide. Fermez alors les vannes, puis réglez une taille de spot de cinq et un grossissement de 25 000 avant de commencer l'observation. Une fois un virus géant localisé sur l'écran d'acquisition, utilisez l'outil de mesure pour mesurer le virus.
Réaliser la biologie moléculaire et le séquençage du génome viral conformément au protocole décrit dans le texte.