Name: La leishmaniose cutanée dans la peau dorsale de Hamsters: un modèle utile pour le dépistage des drogues antileishmanienne (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Découvrez une méthode d'inoculation intradermique de promastigotes de Leishmania dans le dos du hamster pour étudier la leishmaniose cutanée. Ce modèle optimise le suivi des lésions et l'évaluation des traitements antileishmaniens.

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Cette étude a été financée par des subventions de recherche Le Comité pour l&#39;Université d&#39;Antioquia (CODI), L&#39;Institut colombien pour le développement de la science et la technologie - COLCIENCIAS et le Centre pour le développement de produits contre les maladies tropicales - CIDEPRO.

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</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

La leishmaniose cutanée est endémique dans les régions tropicales et néotropicales. Il est souvent désigné comme un groupe de maladies à cause du spectre de manifestations cliniques variées, qui vont de petits nodules cutanés à la destruction du tissu brut muqueuse. La plupart des médicaments disponibles sont coûteux, nécessitent des traitements longs et sont de plus en plus inefficaces, ce qui nécessite la découverte de nouveaux médicaments. Le modèle de souris est largement utilisé, mais p...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Type </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> La kétamine </td><td> Réactif </td><td> Holliday-Scott SA </td><td></td></tr><tr><td> Xilacine </td><td> Réactif </td><td> Synthèse </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Réactif </td><td> GIBCO </td><td> 14190-136 </td></tr><tr><td> Pied à coulisse digital </td><td> Équipement </td><td> Pêcheur </td><td> 15-077-958 </td></tr><tr><td> Giemsa </td><td> Réactif </td><td> SIGMA </td><td> GS1L-1L </td></tr><tr><td> Formol </td><td> Réactif </td><td> Nouvelle-laboratoire </td><td> 11273 </td></tr><tr><td> Paraffine </td><td> Réactif </td><td> Pechiney Plastic Packaging </td><td> PM-996 </td></tr><tr><td> Haemotoxilin </td><td> Réactif </td><td> Nouvelle-laboratoire </td><td&gt; 10870103 </td></tr><tr><td> Eosine </td><td></td><td> Nouvelle-laboratoire </td><td> 10870203 </td></tr><tr><td> Kodak Ektachem sèche chimie </td><td> Équipement </td><td> Kodak Ektachem </td><td> DT-60 </td></tr><tr><td> antimoniate de méglumine </td><td> Réactif </td><td> Aventis </td><td></td></tr><tr><td> Microscopie </td><td> Équipement </td><td> Nikon </td><td> YS2-T </td></tr></tbody></table>

la leishmaniose cutanée dans la peau dorsale de hamsters: un modèle utile pour le dépistage des drogues antileishmanienne

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Traditionnellement, les hamsters sont expérimentalement inoculés dans le museau ou la patte. Toutefois, dans ces sites un ulcère n&#39;est pas toujours lieu, la mesure de la taille des lésions est une procédure difficile et les animaux montrent des difficultés à manger, respirer et bouger à cause de la lésion. Afin d&#39;optimiser le modèle du hamster pour la leishmaniose cutanée, jeune mâle adulte et femelle hamsters dorés (Mesocricetus auratus) ont été injectés par voie intradermique à la peau du dos avec 1 à 1,5 x l0 7 promastigotes de Leishmania et la progression des lésions subséquentes ont été évaluées pour un maximum de 16 semaines après l&#39;infection. Le hamster doré a été choisi parce qu&#39;il est considéré comme le modèle bio-suffisante pour évaluer les médicaments contre la Leishmania car ils sont sensibles à l&#39;infection par différentes espèces. Infection cutanée des résultats hamsters dans les lésions chroniques, mais contrôlée, et une évolution clinique avec des signes semblables à ceux observés chez l&#39;homme. Par conséquent, la mise en place of la mesure de l&#39;infection par mesure de la taille de la lésion selon l&#39;une matière de indurations et les ulcères est réalisable. Cette approche a prouvé sa polyvalence et une gestion facile lors de l&#39;inoculation, le suivi et la caractérisation des lésions typiques (ulcères), l&#39;application de traitements par le biais de différentes manières et l&#39;obtention d&#39;échantillons cliniques après différents traitements. En utilisant cette méthode, la qualité de la vie animale en ce qui concerne la locomotion, la recherche de nourriture et d&#39;eau, des activités ludiques et sociaux est également préservé.

Optimisation du modèle hamster expérimental pour la leishmaniose cutanée par injection intradermique de<em&gt; Leishmania</em&gt; Promastigotes à la peau du dos. Cette approche est utile lors de l&#39;inoculation, suivi, la caractérisation des lésions, l&#39;application de traitements et d&#39;obtenir des échantillons cliniques. Locomotion, la recherche de nourriture et d&#39;eau, des activités ludiques et sociaux sont préservés.

La leishmaniose cutanée dans la peau dorsale de Hamsters: un modèle utile pour le dépistage des drogues antileishmanienne

Traditionnellement, les hamsters sont inoculés expérimentalement au niveau du museau ou du coussinet plantaire. Cependant, un ulcère n'apparaît pas systématiquement sur ces sites, et la mesure de...

Afin d'optimiser le modèle de hamster pour les leishmanioses cutanées, nous décrivons ici une approche utilisant une inoculation intradermique de promastigotes sur la peau dorsale. Cette méthode a démontré sa polyvalence et sa facilité de manipulation lors de l'inoculation, du suivi et de la caractérisation des lésions typiques, de l'application de traitements par différentes voies, de la collecte d'échantillons paracliniques, ainsi que de l'obtention de données sur les différents composés prometteurs, sans nuire de manière significative à la qualité de vie du modèle.En ce qui concerne la locomotion, lors de la recherche de nourriture et d'eau, de jeux ou d'une activité sociale, effectuez des mouvements prudents, sûrs et stables. L'animal doit être immobilisé à la base du cou à l'aide des doigts, en profitant de la grande quantité de peau dont dispose le hamster. La paume de la main est utilisée pour offrir à l'animal une surface de soutien dans laquelle il se sent à l'aise. Une fois que l'animal est détendu, la peau du cou et des joues peut être étirée à l'aide de l'index et du pouce, tandis que les autres doigts maintiennent fermement la peau du flanc contre la paume, de sorte que l'animal soit complètement immobilisé.Une caractéristique distinctive chez la femelle est la visualisation de la ligne Mi Mary, bien apparente dès la première semaine de vie. Une autre caractéristique est la courte distance anogénitale. En ce qui concerne le déterminisme sexuel du mâle, on peut observer le sac scrotal contenant les testicules.En outre, et comme conséquence de cela, il existe une distance plus grande entre l’anus et la peau du quatrième membre. L’animal est saisi en tenant fermement la base du cou, puis placé dans un piège ou une boîte positionné sur une balance préalablement étalonnée, après quelques secondes d’attente. Lorsque l’animal est à l’aise dans cet espace, la lecture du poids est effectuée et immédiatement enregistrée dans le formulaire approprié.Les méthodes les plus courantes pour l'identification des hamsters sont la coloration d'une zone de la peau au piri-acide et la perforation de l'oreille pour la coloration. Pour le piri-acide, la procédure est la suivante : saisir l'animal comme indiqué précédemment, puis, à l’aide d’un coton-tige imbibé de piri-acide, imprégner la région à marquer, généralement le membre antérieur ou postérieur gauche ou droit, avec une quantité suffisante pour garantir que le marquage persiste jusqu’à la fin de l’expérience. Pour cette méthode d’identification, il est recommandé de placer l’animal sous sédation ou anesthésie.Bien qu’il ne soit pas strictement nécessaire, l’oreille à marquer est sélectionnée et désinfectée avec de l’alcool. Ensuite, la zone à percer est choisie, en évitant la région contenant des vaisseaux sanguins. Puis l’oreille est perforée à l’aide d’un poinçon auriculaire pour rongeurs ; la procédure doit être effectuée rapidement, mais de manière ferme et sûre.Étant donné qu'il devrait y avoir deux à trois animaux dans une cage, jusqu'à deux trous peuvent être réalisés par an. Pour appliquer l'anesthésique à l'animal, il doit être maintenu comme indiqué au début, de manière à empêcher les mouvements du hamster avec l'animal.En position supine, la zone abdominale où le médicament sera appliqué est désinfectée à l’aide d’alcool à 70 % et séchée avec un coton propre. La voie intrapéritonéale est utilisée avec l’animal légèrement incliné vers la tête afin qu’un déplacement viscéral se produise. L’aiguille est entièrement introduite de manière légèrement parallèle à la colonne vertébrale.Une aspiration initiale est effectuée afin de confirmer qu'aucun organe n'a été perforé, puis le produit est appliqué pour raser la zone cutanée à inoculer chez l'animal. Après avoir correctement positionné l'animal, un point est marqué à deux centimètres de la base de la queue. À l'aide de ciseaux, tous les poils sont retirés, dégageant soigneusement une surface d'environ deux centimètres carrés, en évitant toute blessure, dans une cabine de sécurité biologique et avec le hamster anesthésié. Dans une seringue d'un millilitre, 100 microlitres de la quantité connue de phase logarithmique.Le Pro maus de leishmania est administré. L'aiguille doit être fixée solidement sur la seringue afin de prévenir les accidents. Un coton imbibé de solution saline stérile est utilisé pour nettoyer la zone rasée de l'animal dans un seul sens.Ensuite, avec le bec de l'aiguille orienté vers le haut, la peau du hamster est pénétrée, en veillant à ce que l'aiguille entre progressivement et lentement dans le tissu sous-dermique. L'inoculum est injecté afin de former une papule sous-dermique, puis l'aiguille est légèrement tournée et retirée. Tout le matériel utilisé est mis au rebut.Après avoir suivi les normes de biosécurité afin de surveiller les lésions cutanées provoquées par leishmania, une immobilisation initiale de l'animal est recommandée dans un piège afin de faciliter le processus pour une mesure précise d'une lésion. La palpation de la zone cutanée inoculée est effectuée pour délimiter l'induration et l'ulcère formé à l'aide d'un pied à coulisse numérique ; la largeur de l'ulcère est mesurée, et la mesure en millimètres est enregistrée dans un formulaire conçu pour la surveillance clinique. De même, la longueur de l'ulcère est mesurée, ce qui doit également être noté après l'inoculation sous-cutanée.Il y a un délai d'attente de quatre à cinq semaines pour obtenir des lésions typiques comparables à celles présentées chez l'humain. L'animal est immobilisé dans un dispositif spécial qui permet d'exposer le dos, là où se situe la lésion.À l’aide d’un compte-gouttes, le composé est appliqué sur la lésion et le liquide est laissé à sécher avant de remettre l’animal dans sa cage. L’animal étant solidement fixé comme illustré ci-dessus, la main la plus habile est utilisée pour désinfecter la zone avec de l’alcool et du coton en un seul sens. Ensuite, la même main est utilisée pour manipuler la seringue contenant le médicament à administrer, dans un volume maximal de 200 microlitres.Le médicament est injecté à travers les muscles semi-tendineux ou semi-berniens des membres postérieurs. Si l'administration du médicament doit être répétée sur plusieurs jours, il convient de changer de membre afin d'éviter tout inconfort et lésion chez l'animal ; avec une main moins habile, l'animal est fixé comme indiqué précédemment. L'autre main est utilisée pour manipuler la sonde orogastrique.14 garage qui se connecte à une seringue d'un millilitre afin de délivrer confortablement un volume n'excédant pas 200 microlitres. Le hamster est solidement fixé à l'aide d'un dispositif d'immobilisation exposant la zone à traiter, laquelle est nettoyée avec un coton stérile et une solution saline par un seul passage dans un sens, à l’aide d’une seringue d’un millilitre, avec l’aiguille orientée bec vers le bas et un volume n’excédant pas 100 microlitres. Une seule injection sous-dermique est réalisée au sommet des lésions, et le médicament est progressivement déposé, recouvrant toute la surface de la lésion avant la mise à mort. Les animaux sont anesthésiés comme décrit précédemment pour le processus d’euthanasie.Le hamster est placé dans une chambre en acrylique scellée, reliée à un cylindre ou à un réseau de dioxyde de carbone. La vanne est ouverte lentement pendant plusieurs minutes afin de prélever les échantillons des hamsters sacrifiés fixés sur une surface de dissection. Des lampes en verre sont nécessaires pour les empreintes de la peau et des organes internes.Des tubes Falcon de 15 millilitres avec du formol à 10 % pour les échantillons d'histopathologie, et le matériel comprend des instruments de dissection, des ciseaux, des pinces, un scalpel, un manche et des lames. Enfin, la présence de leishmania dans les échantillons provenant de lésions cutanées ou de cicatrices, de foie, de rate, de rein et de ganglions lymphatiques poplités est déterminée directement par l'examen de frottis colorés à la gémsa et par un examen histopathologique de ces tissus. Un prélèvement biopsique est fixé dans du formol à 10 % et inclus en paraffine.Des sections de tissus fixés de cinq micromètres ont été colorées à l'hématoxyline-éosine et examinées au microscope optique avec une immersion à l'huile 1000. Pour étudier la microarchitecture, les caractéristiques de l'infiltrat cellulaire et la présence ou l'absence de parasites. Des photomicrographies sont prises et des images numériques sont capturées.Tous les matériaux doivent être éliminés conformément aux réglementations de biosécurité relatives à l'élimination des déchets biologiques. Le hamster doré Mi s'est révélé particulièrement utile pour l'étude des lésions cutanées provoquées par des espèces de Leishmania du Vieux et du Nouveau Monde. L'inoculation de pro-magos est capable de provoquer des lésions cutanées entre un et deux mois après l'inoculation.Le hamster présente une évolution prévisible de la maladie après une infection expérimentale, caractérisée par le développement de lésions semblables à celles observées chez l'humain. En raison de la nature chronique des lésions cutanées dans le modèle du hamster, il est possible de surveiller les interventions thérapeutiques sur de longues périodes. Traditionnellement, les hamsters sont inoculés expérimentalement au niveau du museau ou de la plante des pieds ; toutefois, dans ces sites, l'apparition de lésions n'est pas toujours constatée. De plus, la mesure de la taille des lésions est difficile à réaliser, et les hamsters présentent des difficultés à manger, respirer et se déplacer.En résumé, cette approche démontre que les caractéristiques pathologiques cliniques des lésions cutanées de leishmaniose induites dans la peau dorsale de hamsters sont remarquablement similaires à celles de la maladie humaine, mais nettement différentes du modèle marin couramment utilisé. Ainsi, l'infection expérimentale dans la peau dorsale de hamsters représente un modèle utile pour valider le potentiel de composés candidats à devenir des médicaments contre la leishmaniose humaine.

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