Name: La Citrobacter rodentium: Étudier Contributions des agents pathogènes et lhôte de la colite infectieuse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 4 s
Description: Apprenez à induire la colite infectieuse chez la souris avec Citrobacter rodentium pour étudier les interactions hôte-pathogène et évaluer la fonction barrière intestinale.

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Ce travail a été soutenu par des subventions de fonctionnement aux BAV de la maladie de Crohn et la colite Foundation of Canada (CCFC) et les Instituts de recherche en santé du Canada (IRSC). Go a été financée par une bourse d&#39;études supérieures des IRSC. BAV sont les enfants souffrant de troubles intestinaux et du foie (ENFANT) Président de la Fondation de la recherche sur les MII de pédiatrie et la Chaire de recherche du Canada en gastroentérologie pédiatrique.

1. Préparation de l&#39;inoculum et Citrobacter rodentium gavage de souris <ol><li> Préparer et passer à l&#39;autoclave Luria Bertani (LB). </li><li> Obtenir viable C. rodentium à partir d&#39;un stock de glycerol congelé et sans stries sur gélose LB à l&#39;aide d&#39;une anse stérile inoculation ou de pointe de la pipette. Incuber à 37 ° C pendant la nuit. Inoculer 3 ml de bouillon LB stérile dans un tube de culture faucon avec des colonies de la plaque de LB en utilisant une boucle d&#39;inoculation ou de pointe de la pipette. Préparation de l&#39;inoculum doit être fait en utilisant des techniques aseptiques. </li><li> Incuber la C. culture rodentium en aérobiose à 37 ° C pendant la nuit dans une incubation de table agitateur à 200 tpm. Le bouillon LB inoculé devrait apparaître nuageux après une nuit de culture. </li><li> Utilisez une ampoule à pointe aiguille de gavage gastrique attachée à une seringue de 1 ml à chaque souris gavage avec 100 ul de la nuit C. rodentium culture. Doucement nuque de la souris, en tenant fermement la peau lâche sur son cou et le dosavec le pouce et les doigts. Tirez la tête de l&#39;animal avec votre index pour immobiliser la tête et redresser l&#39;œsophage pour l&#39;insertion de l&#39;aiguille de gavage. </li><li> Maintenir la souris dans une position verticale et de diriger la pointe de l&#39;aiguille ampoule gavage sur le côté de sa bouche et sur sa langue. Doucement passer l&#39;aiguille sur le toit de la bouche et le faire avancer dans l&#39;œsophage. S&#39;il ya une résistance ressentie lors de cette procédure, retirez l&#39;aiguille gavage et réinsérez-le. </li><li> Lentement, injecter 100 ml de l&#39;inoculum bactérien et retirez délicatement l&#39;aiguille de gavage. Surveiller le rythme de la respiration et le comportement de la souris après le retourner à sa cage. </li></ol> Notes: <ul><li> Dans les étapes 2 et 3, également préparer un tube de culture en utilisant des techniques aseptiques faucon avec 3 ml de bouillon LB stérile pour être cultivées pendant une nuit pour s&#39;assurer qu&#39;il n&#39;y ait pas de contamination bactérienne du bouillon lui-même. Le bouillon LB doit être limpide après une nuit de culture. </li><li&gt; Agiter doucement la culture dans le tube falcon avant le chargement des seringues pour gavage sorte qu&#39;une dose égale de bactéries est remis à chaque souris, à l&#39;étape 4. </li><li> Culture d&#39;une nuit doit être jeté s&#39;il a été vacciné depuis plus de 24 heures. </li><li> Toutes C. rodentium infections et de logement des animaux infectés doivent être effectuées dans un centre de biosécurité de niveau 2. </li></ul> 2. Mesure de la perméabilité colique barrière épithéliale en C. rodentium souris infectées <ol><li> Mesurer intégrité de la barrière à un moment souhaité après l&#39;infection. </li><li> Le jour de l&#39;essai, préparer suffisamment de 4 kDa isothiocyanate de fluorescéine (FITC)-dextrane dissous dans un tampon phosphate salin (PBS) à une concentration de 80 -1 mg ml à chaque souris gavage avec 150 pi et de préparer la courbe d&#39;étalonnage. </li><li> Scruff la souris et le gavage avec 150 ul de FITC-dextran. Retirer la nourriture de la cage pour le moment. </li><li> Anesthésier les souris 4 heures aprèsgavage et de recueillir autant de sang que possible (~ 450 pi) par ponction cardiaque. Ajouter le sang à une concentration finale de 3% d&#39;acide citrate dextrose dans un microtube pour empêcher la coagulation. Euthanasier les souris et recueillir des tissus du côlon chez PBS pour le nombre de bactéries (étapes 3,1 à 3,5) et dans 10% de formol pour la fixation des tissus et, finalement, l&#39;immunofluorescence (étapes 4,1 à 4,8). </li><li> Faites tourner les échantillons de sang à 1000 xg pendant 12 min dans une centrifugeuse à 4 ° C. Recueillir le sérum et diluer à 1/10 et 1/100 dans du PBS. Ajouter 100 ul de chaque échantillon à ces deux dilutions sur une plaque de 96 puits dans répétitions. </li><li> Pour préparer la courbe d&#39;étalonnage, diluer l&#39;original 80 mg ml -1 FITC-dextran utilisé pour gavage des souris dans du PBS pour les concentrations suivantes: 800, 400, 200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25, et 0 pg / ml . Ajouter 100 ul de chaque concentration à une plaque de 96 puits en trois exemplaires. </li><li> Quantifier la fluorescence de chaque échantillon à l&#39;aide d&#39;un fluorimètre à une excitation wavelength de 485 nm et de longueur d&#39;onde d&#39;émission de 535 nm. </li><li> Analyser les données brutes en traçant la courbe standard. Saisissez les données brutes de chaque échantillon dans l&#39;équation de la droite engendrée par la courbe standard pour déterminer la concentration de FITC-dextran dans chaque échantillon. </li></ol> Notes: <ul><li> Partir de l&#39;étape 4 et suivants, conserver des échantillons de sang sur la glace et de minimiser l&#39;exposition à la lumière. </li><li> Lors de la mesure intégrité de la barrière épithéliale un point dans le temps, ou avant, 7 jours post-infection est optimale, car de graves lésions tissulaires partir de cet instant. Mesure intégrité de la barrière avant se produise des dommages graves vous permet de déterminer les différences maximales de perméabilité au cours de C. infection rodentium entre les souches de souris. </li><li> Assurez-vous que les souris témoins non infectés sont également testés pour intégrité de la barrière épithéliale. </li></ul> 3. Mesure de la charge bactérienne dans les tissus de C. rodentium souris infectées <ol><li> Ajouter 1 ml de PBS stérile d&#39;une un métal autoclave talon à fond rond d&#39;un tube de 2 ml centrifugeuse utilisant une technique aseptique. Les différents tissus prélevés sur chaque animal seront placés dans des tubes séparés PBS. Peser les tubes avant l&#39;addition du tissu. </li><li> Retirez le caecum et le côlon de la souris. Séparer le caecum du côlon et poussez le contenu luminal à l&#39;aide de pinces. Ajouter le contenu d&#39;un tube de PBS. Après séparation de 0,5 cm sections de la partie distale du côlon et du caecum pour la fixation au formol à 10%, couper le reste du côlon et du caecum longitudinalement et laver avec du PBS stérile avant de les placer dans des tubes de tissus. </li><li> Peser les tubes PBS avec le tissu, puis homogénéiser les échantillons à l&#39;aide d&#39;un fouet perles pendant 6 min à 30 Hz. </li><li> En utilisant des techniques aseptiques, ajouter 180 ul de PBS stérile par puits d&#39;une plaque 96 puits. Ajouter 20 ul de chaque échantillon homogénéisé au premier puits de chaque rangée. Bien mélanger et diluer en série, en ajoutant 20 pl de chaque précédente ainsi d&#39;obtenir des dilutions de 10 -1 (d&#39;abord nousll) à 10 -6. Planche 10 ul de chaque dilution de chaque échantillon en triple sur une plaque LB fond carré avec une grille. Incuber une nuit à 37 ° C. </li><li> Comptez unités formant colonies (UFC), puis la moyenne des 3 chefs, et d&#39;enregistrer la dilution à laquelle chaque échantillon a été compté. Multipliez moyenne UFC par 50, comme 20 pl de l&#39;original 1 ml d&#39;échantillon a été utilisé, et par le facteur de dilution à laquelle l&#39;échantillon a été compté résultant en UFC / ml. Finalement, diviser par la masse de tissu afin de déterminer UFC / g. </li></ol> 4. Évaluation histologique et la coloration par immunofluorescence de tissus infectés Colon <ol><li> Recueillir des tissus comme à l&#39;étape 3.2. Boutique de tissus dans le formol durant la nuit, puis laver avec de l&#39;éthanol à 70%. Intégrer les tissus en paraffine et coupé 5 sections um pour la coloration. Tache avec de l&#39;hématoxyline et de l&#39;éosine pour évaluation histologique et procéder aux étapes suivantes pour immunofluorescence. </li><li> Pour Déparaffiner tissus avant la coloration, le lieu glisse dansune cuvette Coplin et mettre en bain d&#39;eau à 65 ° C pendant 10 min. Ensuite, placer les lames dans du xylène pendant quatre lavages de 2 minutes chacun. Les lames doivent être réhydratés avec deux 5-minute lavages dans de l&#39;éthanol 100%, suivi par une 5 min de lavage dans chacune des catégories suivantes: éthanol 95%, éthanol à 75% et dH 2 0. Ces lavages doit être effectuée sous une hotte pour éviter l&#39;exposition à des vapeurs nocives. </li><li> Placer les lames dans la jarre Coplin avec préchauffé tampon citrate de sodium, puis le placer dans un bateau à vapeur pendant 30 min, puis laisser reposer 30 min. Ce processus rompt la réticulation de la protéine formée par la fixation au formol récupérer sites antigéniques potentiels. </li><li> Laver avec du PBS azide pendant 5 min, trois fois. Lames sèches et la zone autour du tissu marque avec un stylo PAP pour créer une barrière hydrophobe, en gardant les réactifs de coloration localisés sur le tissu. </li><li> Bloquer les tissus pendant 1 heure à température ambiante avec un tampon de blocage (par exemple α-sérum de chèvre) dans une chambre humide immunomarquage. </li><li> Diluer primary anticorps à la concentration souhaitée à l&#39;aide du tampon de dilution d&#39;anticorps. Verser tampon bloquant et ajouter 50 à 100 ul de l&#39;anticorps primaire dans les tissus. Incuber à 4 ° C pendant la nuit ou à la température ambiante pendant 2 heures. </li><li> Laver avec du PBS azide pendant 5 min, trois fois. Ajouter 50-100 ul d&#39;anticorps secondaire dilué dans un tampon de dilution d&#39;anticorps dans les tissus et les incuber à température ambiante pendant 1 heure dans l&#39;obscurité. Laver avec dH 2 O pendant 5 minutes, trois fois. </li><li> Déshydrater les lames, ajouter DAPI Prolongez moyen d&#39;or de montage et recouvrir d&#39;une lamelle. Afficher les diapositives sous un microscope à fluorescence. </li></ol> Notes: <ul><li> PBS azide peut être substitué par du PBS fraîchement préparé comme alternative pour éviter la prolifération bactérienne dans le milieu de lavage provenant de l&#39;étape 4 en avant. </li></ul>

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</ol>

Les auteurs déclarent n&#39;avoir aucun conflit d&#39;intérêts financiers.

Citrobacter rodentium infection constitue un modèle précieux pour l&#39;étude de deux maladies infectieuses et de la colite chez la souris. Ce modèle unique permet de caractériser des réponses de l&#39;hôte, ainsi que les propriétés pathogènes de bactéries. Les étapes décrites dans ce protocole détail l&#39;utilisation réussie de ce modèle. Il ya plusieurs étapes critiques de ce protocole à garder à l&#39;esprit lors de l&#39;induction de colite et de l&#39;analyse des réponses. Tou...

L&#39;infection par des bactéries pathogènes entériques déclenche gastro-intestinal (GI) l&#39;inflammation, ainsi que pathologie intestinale et la physiopathologie, y compris la diarrhée intestinale et dysfonction de la barrière épithéliale. Les mécanismes de virulence des bactéries pathogènes qui colonisent le tractus gastro-intestinal de leurs hôtes, ainsi que les réponses spécifiques de l&#39;hôte qui défendent contre de telles infections sont mal comprises, mais les progrès récents dans la modélisation des infections entériques bactériennes ont commencé à nous aider dans notre compréhension de ces processus. Les bactéries entériques ont également été associés à des maladies inflammatoires de l&#39;intestin (MICI). Maladie de Crohn Le MII (CD) et UC sont des maladies complexes d&#39;étiologie inconnue, caractérisée par une inflammation intestinale chronique et des lésions tissulaires. De nombreux modèles murins d&#39;inflammation intestinale existent, d&#39;une inflammation spontanée des souches génétiquement modifiés, tels que l&#39;IL10 - / - souris, aux défis chimiques avec des composés tels que le sulfate de dextrane sodique (DSS) et dinitrobenzene sulfonique (DNBS) 1. Il a été émis l&#39;hypothèse que les réponses inadaptées chroniques inflammatoires présentes chez les patients MICI se développer en individus génétiquement sensibles à l&#39;exposition anormale du système immunitaire intestinal muqueuse de bactéries entériques 2, donc l&#39;étude des modèles de colite infectieuse offre également un potentiel important pour la définition de l&#39;hôte potentiellement pathogène . réponses à des bactéries entériques Citrobacter rodentium colite induite est l&#39;un des rares modèles de colite infectieuse qui a été bien caractérisés 1,3, ce qui permet l&#39;analyse des réponses de l&#39;hôte aux bactéries entériques et de la compréhension de nouveaux mécanismes potentiels de la pathogenèse de MICI, une étape essentielle dans le développement de nouveaux traitements préventifs et thérapeutiques. C. rodentium est une gram négatif attachant et effaçant (A / E), murin pathogène bactérien spécifique qui est étroitement liée à l&#39;humain importantentéropathogène pathogènes E. coli (EPEC) et entérohémorragique E. coli (EHEC) 3-8. La famille d&#39;un des agents pathogènes / E intimement joindre à la membrane de la cellule hôte apicale de l&#39;épithélium du caecum et du côlon, la formation d&#39;un non-invasive piédestal structure en forme de la cellule hôte. Provocation par voie orale avec C. rodentium de 10 8 -10 9 organismes produisant un modèle robuste d&#39;une colite infectieuse caractérisée par une hyperplasie du côlon ou de l&#39;allongement des cryptes, infiltration mononucléaire cellules immunitaires et l&#39;épuisement des cellules caliciformes 3,4. Le site initial de la colonisation, quelques heures après la provocation, est le patch du caecum, suivie par une progression dans le côlon distal 2 à 3 jours après l&#39;infection 3. Dans souches de souris immunocompétentes, l&#39;élimination de l&#39;agent pathogène est atteinte 3 à 4 semaines après l&#39;infection 1,3,4. Cependant, de nombreuses souches génétiquement modifiés, c.-à-gène déficient ou KO (- / -) des souris, ont été trouvés pour afficher augsed susceptibilité à l&#39;infection causant des dommages exagérés et / ou d&#39;une infection chronique et l&#39;inflammation 9-14. L&#39;utilisation de ce modèle de colite infectieuse chez ces souches huitièmes de finale, beaucoup manquent innées protéines de signalisation, a été indispensable pour révéler plusieurs protéines de l&#39;hôte faisant partie intégrante de la résolution de l&#39;infection et de l&#39;inflammation intestinale.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de réactif / Matériel </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Luria Broth </td><td> ABM </td><td> G247 </td><td> Ajouter 25 g de poudre de LB pour 1L d&#39;eau. Autoclave avant d&#39;utiliser. </td></tr><tr><td> Plaque de fond carrée avec grille </td><td> Pêcheur </td><td> 08 à 757-11A </td><td></td></tr><tr><td> Tube de culture Falcon </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> Ampoule à pointe aiguille de gavage gastrique </td><td> Outils Fine Science </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> Seringue de 1 ml </td><td> BD Biosciences </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 kDa FITC-dextran </td><td> Sigma </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> Acide citrique </td><td> Sigma </td><td> C7129 &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> Le citrate de sodium </td><td> Pêcheur </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> Dextrose </td><td> Pêcheur </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> Acide citrate dextrose </td><td></td><td></td><td> 20 mM d&#39;acide ctiric, 110 mM de citrate de sodium, 5 mM de dextrose </td></tr><tr><td> Noir Plaque 96 puits </td><td> Pêcheur </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> Perles en métal (5 mm) </td><td> Qiagen </td><td> 69989 </td><td></td></tr><tr><td> Formol à 10% </td><td> Pêcheur </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> Flacon de 5 ml </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> Hématoxyline </td><td> Pêcheur </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> Eosine </td><td> Pêcheur </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> Xylène </td><td> Pêcheur </td><td&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Sigma </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Cuve de coloration Coplin </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> Tampon citrate de sodium </td><td></td><td></td><td> 10 mM de citrate de sodium, 0,05% Tween 20, pH 6,0 </td></tr><tr><td> Stylo Pap </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de chèvre </td><td> Sigma </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> Albumine de sérum bovin (BSA) </td><td> Pêcheur </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;azoture de sodium </td><td> Sigma </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> Tampon de blocage </td><td></td><td></td><td> 2% de sérum de chèvre, 1% BSA, 0,1% de Triton X-100, 0,05% Tween 20, 0,05% de sodiumazide, PBS 0,01 M, pH 7,2, mélanger et conserver à 4 ° C. </td></tr><tr><td> Tampon de dilution d&#39;anticorps </td><td></td><td></td><td> 0,1% de Triton X-100, 0,1% de BSA, 0,05% d&#39;azoture de sodium, 0,04% d&#39;EDTA </td></tr><tr><td> Tampon de blocage tampon de dilution et d&#39;anticorps pour tir </td><td></td><td></td><td> Mêmes recettes que ci-dessus, mais sans addition de détergents (Triton X-100 et Tween 20) </td></tr><tr><td> Prolongez réactif Antifade or avec DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P-36931 </td><td></td></tr><tr><td> Lamelles de </td><td> Pêcheur </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> Incubation de table shaker </td><td> Barnstead Lab Line </td><td> Max Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> Fluorimètre </td><td> Perkin Elmer </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> Centrifugeuse réfrigérée </td><td> Beckman Coulter </td><td> Microfuge 22R</td><td></td></tr><tr><td> Bateau à vapeur </td><td> Black &amp; Decker </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscope à fluorescence </td><td> Zeiss </td><td> Axio Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

la<em&gt; citrobacter rodentium</emmodèle de souris&gt;: Étudier contributions des agents pathogènes et l&#39;hôte de la colite infectieuse

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Ce protocole décrit les étapes nécessaires pour produire un modèle robuste d&#39;une maladie infectieuse et la colite, ainsi que les méthodes utilisées pour caractériser l&#39;infection Citrobacter rodentium chez la souris. C. rodentium est une gram négatif, murin pathogène spécifique bactérienne qui est étroitement liée à l&#39;importance clinique humaine entéropathogène pathogènes E. coli entérohémorragique et E. coli. Lors de l&#39;infection à C. rodentium, souris immunocompétentes souffrent de la perte de poids modeste et transitoire et de la diarrhée. Histologiquement, l&#39;allongement crypte intestinale, l&#39;infiltration de cellules immunitaires, et l&#39;épuisement des cellules caliciformes sont observées. Garde d&#39;infection est atteinte après 3 à 4 semaines. Mesure de l&#39;intégrité barrière épithéliale intestinale, la charge bactérienne, et les dommages histologiques à différents moments après l&#39;infection, permettent la caractérisation des souches de souris sensibles à l&#39;infection. Le mécanisme de virulences par des bactéries pathogènes qui colonisent le tractus intestinal de leurs hôtes, ainsi que les réponses spécifiques de l&#39;hôte qui défendent contre de telles infections sont mal compris. Par conséquent, le C. rodentium modèle d&#39;infection bactérienne entérique constitue un outil précieux pour aider à la compréhension de ces processus. Les bactéries entériques ont également été associés à des maladies inflammatoires de l&#39;intestin (MICI). Il a été émis l&#39;hypothèse que les réponses inflammatoires chroniques inadaptés observés chez les patients MICI se développer en individus génétiquement sensibles après une exposition anormale du système immunitaire intestinal des muqueuses à des bactéries entériques. Par conséquent, l&#39;étude des modèles de colite infectieuse offre un potentiel important pour la définition potentiellement pathogènes réponse de l&#39;hôte aux bactéries entériques. C. rodentium colite induite est un modèle du genre rare qui permet l&#39;analyse des réponses de l&#39;hôte aux bactéries entériques, approfondir notre compréhension des mécanismes potentiels de la pathogenèse du commerce international;essentiel dans le développement de nouveaux traitements préventifs et thérapeutiques.

Au cours d&#39;une expérience d&#39;infection standard, les souris sont infectées avec environ 2,5 x 10 8 UFC par gavage de 100 pi C pendant une nuit rodentium culture. L&#39;infection des souris C57BL / 6 avec C. rodentium résultats dans la perte de poids modeste et transitoire et de la diarrhée. Bien que rare avec souris C57BL / 6, les animaux peuvent tomber malades et nécessitent l&#39;euthanasie. Par conséquent, les souris doivent être surveillés pour le degré de perte de poids ...

Citrobacter rodentium infection constitue un modèle précieux pour l&#39;étude des infections bactériennes entériques ainsi que l&#39;hôte réponses immunitaires et la colite chez la souris. Ce protocole décrit la mesure du intégrité de la barrière, la charge de pathogènes et les dommages histologiques permettant la caractérisation approfondie des contributions pathogène et de l&#39;hôte à la colite infectieuse murin.

La<em&gt; Citrobacter rodentium</emModèle de souris&gt;: Étudier Contributions des agents pathogènes et l&#39;hôte de la colite infectieuse

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

L'objectif général de cette procédure est d'induire une colite en infectant des souris avec l'agent pathogène gram-négatif Citrobacter rodentium, permettant ainsi l'étude des interactions entre pathogène et hôte dans le tractus gastro-intestinal. Ceci est réalisé en premier lieu par l'inoculation d'une culture de Citrobacter rodentium incubée toute une nuit. Dans la deuxième étape, les souris sont infectées par gavage oral avec l'inoculum préparé au cours de la nuit.Ensuite, au septième jour post-infection, le cæcum, le côlon et le contenu luminal sont prélevés lors de l'étape finale. Les tissus sont ensemencés, les colonies bactériennes sont dénombrées, et les tissus sont soumis à une immunomarquage pour les protéines d'hôte d'intérêt. En définitive, la charge pathogène, la fonction de barrière, les lésions histologiques et les modifications de la réponse de l'hôte peuvent être évaluées par immunohistochimie.Bien que cette méthode offre un modèle solide de colite infectieuse, permettant l'étude des interactions hôte-pathogène et des réponses immunitaires, elle peut également être adaptée pour examiner les effets d'une infection bactérienne sur le risque de cancer du côlon. En géné

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Établir un modèle de chroniques bactériennes de souris infectées par la...

Chronique Salmonella Modèle de souris infectées

Source : Winston, J. A., et al. Modèle murin traité par Cefoperazone de souche cliniquement pertinente de Clostridium difficile R20291.  J. Vis. Exp. (2016)Cette vidéo montre la procédure d’inoculation des souris pré-traitées par antibiotiques avec des spores de Clostridium difficile afin d’établir un modèle murien d’infection pour étudier la pathogenèse et les réponses de l’hôte.

Établissement d’un modèle murin de l’infection à Clostridium difficile

Imagerie multi-modalité est une approche intéressante pour l'étude de la colonisation bactérienne dans les petits modèles animaux. Ce protocole décrit l'infection de souris avec...

4D imagerie multimodalité des<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infections chez les souris

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Un modèle de souris pour l&#39;inflammation chronique induite par pathogène sur les sites locaux et systémiques

Ici, un procédé est décrit pour la mise en place d'une infection systémique chez le rat nouveau-né avec des cultures d'Escherichia coli K1. Cette procédure non invasive permettant la colonisation du tractus gastro-intestinal, de la translocation de l'agent pathogène dans la circulation systémique, et l'invasion du système nerveux central chez le plexus choroïde.

Modèle non-invasive de neuropathogènes Escherichia coli Maladies infectieuses chez le rat nouveau-né

La capacité à modéliser les infections des voies urinaires (IVU) est cruciale pour pouvoir comprendre la pathogenèse bactérienne et favoriser le développement de nouvelles thérapies. L’objectif de ce travail est de démontrer des modèles murins d’infections urinaires expérimentales et d’infections urinaires associées à un cathéter qui récapitulent et prédisent les résultats observés chez l’homme.

Création et caractérisation de l&#39;UTI et Cauti dans un modèle de souris

Ce protocole décrit le modèle de souris céfopérazone d'infection à Clostridium difficile (CDI) en utilisant une souche cliniquement pertinente et génétiquement traitable, R20291. L' accent mis sur la surveillance clinique de la maladie, C. énumération bactérienne difficile, la toxine cytotoxicité, et des changements histopathologiques tout au long de CDI dans un modèle de souris sont détaillés dans le protocole.

Céfopérazone traité Souris Modèle de Cliniquement pertinentes<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Strain R20291

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Détection de la colonisation de Escherichia Coli entéro-hémorragique en hôte murin par système de Bioluminescence Non invasif In Vivo

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Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6

Dans ce protocole, un modèle de colite adoptive de transfert de lymphocytes T spécifiques à l’antigène du microbiote intestinal est décrit. Les lymphocytes T CD4+ sont isolés à partir de souris transgéniques TCR CBir1. Ceux-ci sont spécifiques pour un antigène immunodominant du microbiote intestinal CBir1 flagellin, qui est transféré dans les souris Rag1-/- receveuses, entraînant une inflammation intestinale.

Induction de l’inflammation intestinale par transfert adoptif de lymphocytes T CD4+ transgéniques CBir1 TCR à des souris immunodéficientes

Apprenez à induire la colite infectieuse chez la souris avec Citrobacter rodentium pour étudier les interactions hôte-pathogène et évaluer la fonction barrière intestinale.

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