Induisant myointimale hyperplasie Versus athérosclérose chez la souris: An Introduction de deux modèles valides

L’objectif général de l’expérience suivante est d’introduire deux modèles animaux valides conduisant à un rétrécissement de l’aorte par différents mécanismes. Le premier modèle est le cathétérisme par ballonnet de l’aorte pour créer le développement d’une hyperplasie myo-intimale. Tout d’abord, l’aorte abdominale infrarénale est exposée et clampée.

Ensuite, l’aorte est ouverte par une incision transversale et le cathéter à ballonnet est introduit. L’endothélium de l’aorte est ensuite dénudé avec le cathéter gonflé et la chirurgie est terminée. Le deuxième modèle est une manipulation alimentaire de souris nulles APOE transgéniques pour créer des plaques d’athérosclérose.

Ces souris sont logées dans des conditions standard et nourries avec un régime occidental riche en lipides pendant quatre à six mois. En fin de compte, l’analyse histologique de l’hyperplasie myo-intimale induite chirurgicalement et du modèle de restriction alimentaire montre qu’elles entraînent un rétrécissement luminal différent. Aujourd’hui, nous allons vous montrer deux modèles différents pour induire le rétrécissement luminal : le modèle de souris utilisant un cathéter à ballonnet pour induire des lésions vasculaires et le modèle de sclérose artérielle.

En utilisant des souris transgéniques dans le régime alimentaire occidental, le modèle du cathéter à ballonnet peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la sténose. Le modèle murin transgénique homozygote supérieur mutant E est utilisé pour étudier la physiopathologie de l’athérosclérose. Pour le modèle d’hyperplasie intimale, obtenez des souris C 57 noires six souris J qui pèsent environ 25 grammes.

Maintenez-les dans des conditions normales avec un régime alimentaire normal. Après avoir anesthésié la souris avec 2 % de fluor, coupez les poils abdominaux, fournissez du carprofène par injection sous-cutanée pour l’analgésie. Ensuite, vous pouvez également désinfecter la peau avec de l’iode Provo et de l’éthanol à 80 % en deux cycles.

Vérifiez maintenant l’absence de réflexes à l’aide d’un pincement des orteils. Commencez la chirurgie en séparant la peau et le muscle le long de l’alba linéaire. Ensuite, enveloppez les intestins dans un gant imbibé de solution saline, puis nettoyez attentivement le tissu adipeux en recouvrant l’aorte abdominale.

Exposez maintenant l’aorte infrarénale jusqu’à sa bifurcation. En prenant soin de ne pas blesser les vaisseaux de la branche. Clampez maintenant l’aorte.

Placez d’abord une pince microchirurgicale sur l’aorte infrarénale proximale pour arrêter le flux sanguin. Deuxièmement, appliquez une deuxième pince distale à côté de la bifurcation aortique. Lorsque le flux sanguin est interrompu, faites une petite incision dans l’aorte près de la pince proximale.

Insérez le cathéter vers la pince distale de l’aorte pour faire une lésion endothéliale. Dénudez l’aorte en gonflant soigneusement le ballonnet du cathéter et en tirant lentement le cathéter dans la direction de la pince proximale. Répétez cette opération, manœuvrez deux fois pour un total de trois gonflages de l’aorte.

Retirez maintenant le cathéter et fermez l’incision aortique à l’aide de 10 sutures de course au proline. Une fois les sutures en place, ouvrez soigneusement la pince distale s’il y a un saignement au site de l’autotomie AOR. Refermez la pince, localisez le saignement et arrêtez-le avec des points interrompus supplémentaires.

Lorsqu’il n’y a pas de saignement, ouvrez lentement la pince proximale. Un pouls aortique doit être visible distal de l’incision. Disposez maintenant les intestins en C deux.

Ensuite, fermez la paroi abdominale en commençant par la couche musculaire à l’aide de six sutures de course OTT proline. Fermez ensuite la peau avec cinq sutures OTT et transférez la souris dans sa cage. Au cours des trois premiers jours postopératoires, fournir du métrazole à l’eau potable pour contrôler la douleur.

Surveiller l’animal tout au long de son rétablissement, qui prend environ 28 jours. Pour le modèle d’athérosclérose, obtenez des souris déficientes en A POE âgées de quatre semaines. Hébergez ces souris dans des conditions standard avec un régime occidental riche en lipides pendant quatre à six mois.

Maintenir ce régime tout au long de l’expérience. Six heures avant la récolte de l’aorte, retirez l’accès à la nourriture. Préparez ensuite la souris pour la chirurgie comme décrit dans la section précédente.

Commencez la chirurgie en ouvrant la poitrine. Ensuite, coupez l’apex du cœur et perfusez-le sous une légère pression avec trois millilitres de 4 % d’aldéhyde paraforme à travers la racine aortique pour fixer l’aorte. Libérez ensuite l’aorte de la racine à sa bifurcation.

Essayez d’enlever autant de tissu adipeux que possible. Ensuite, coupez l’arc aortique et stockez-le dans 4 % de para formaldéhyde. Transférez maintenant le cœur et l’arbre aortique dans un plat en silicone avec du PBS dans le plat.

Coupez une extrémité de l’arbre aortique et fixez-la sur la couche de silicone à l’aide de fines épingles. Ouvrez l’aorte longitudinalement et laissez le tissu aortique reposer dans du PBS à température ambiante pendant quelques minutes. Ensuite, rincez une fois le mouchoir avec de l’éthanol à 50 % et plongez-le dans un bain de Soudan.

Trois, solution de coloration pendant environ 15 minutes. Après la coloration, rincez rapidement le tissu avec de l’éthanol à 50 % pendant quelques secondes pour éliminer uniquement l’excès de Sudan. Trois rinçages excessifs enlèveront trop de tache, rinceront immédiatement le tissu à l’eau distillée et procéderont à l’imagerie Pour le modèle d’hyperplasie myo-intimale, des aortes de souris dénudées ont été prélevées, intégrées à la paraffine et colorées au chrome

À l’aide d’une analyse informatique suivie d’un calcul du rapport, l’épaisseur maximale de la plaque a été mesurée comme l’épaisseur intimale maximale dans la lumière par l’arbre morpho informatique. Le pourcentage d’oblitération luminale a été calculé comme le rapport entre la nouvelle lumière interne et l’ancienne lumière. La surface de la plaque a été calculée en soustrayant la nouvelle lumière interne de l’ancienne lumière.

Les mêmes analyses ont été effectuées sur des coupes transversales colorées au trichrome du modèle d’athérosclérose au niveau de la valve aortique, de l’arc aortique et de l’aorte descendante pour le modèle d’athérosclérose uniquement. L’aorte descendante a été ouverte longitudinalement et tachée de rouge Soudan. La surface de la plaque et la surface aortique totale ont été mesurées à l’aide d’un ordinateur pour l’analyse des deux modèles.

D’autres méthodes telles que l’histopathologie et la microscopie confocale par immunofluorescence peuvent être effectuées afin de répondre à des questions telles que l’oblation luminale, la morphologie et la cellularité. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.