Induisant myointimale hyperplasie Versus athérosclérose chez la souris: An Introduction de deux modèles valides

L'objectif général de l'expérience suivante est de présenter deux modèles animaux valides conduisant à un rétrécissement de l'aorte par des mécanismes différents. Le premier modèle consiste en une cathétérisation par ballonnet de l'aorte afin d'induire le développement d'une hyperplasie myointimale. Tout d'abord, l'aorte abdominale sous-rénale est exposée et clampée.

Ensuite, l'aorte est ouverte par une incision transversale et un cathéter à ballonnet est introduit. L'endothélium de l'aorte est alors décapé à l'aide du cathéter gonflé et la chirurgie est terminée. Le deuxième modèle consiste en une manipulation alimentaire de souris transgéniques APOE nulles afin de provoquer la formation de plaques athéroscléreuses.

Ces souris sont élevées dans des conditions standard et nourries avec un régime occidental riche en lipides pendant quatre à six mois. En fin de compte, l'analyse histologique de l'hypertrophie myo-intimale induite chirurgicalement et du modèle de restriction alimentaire montre qu'elles entraînent un rétrécissement luminal différent. Aujourd'hui, nous allons vous présenter deux modèles distincts permettant d'induire un rétrécissement luminal : le modèle murin utilisant un cathéter à ballonnet pour provoquer une lésion vasculaire, et le modèle de sclérose artérielle.

En utilisant des souris transgéniques sous un régime occidental, le modèle de cathéter-ballonnet peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la sténose. Le modèle de souris mutante transgénique homozygote upper E est utilisé pour étudier la physiopathologie de l'athérosclérose. Pour le modèle d'hyperplasie intimale, obtenir des souris C57BL/6J pesant environ 25 grammes.

Les maintenir dans des conditions normales avec une alimentation standard. Après avoir anesthésié la souris avec 2 % d'isoflurane, raser les poils abdominaux, administrer du carprofène par injection sous-cutanée pour l'analgésie. Ensuite, désinfecter alternativement la peau avec de la providone-iodée et de l'éthanol à 80 % en deux cycles.

Recherchez maintenant l'absence de réflexes en pinçant l'orteil. Commencez la chirurgie en séparant la peau et les muscles le long de la ligne alba. Ensuite, enveloppez les intestins dans un gant humidifié avec du sérum physiologique, puis retirez attentivement le tissu adipeux recouvrant l'aorte abdominale.

Exposer maintenant l'aorte infrarénale jusqu'à sa bifurcation, en prenant soin de ne pas endommager les vaisseaux collatéraux. Pincer ensuite l'aorte.

Placez d'abord un clamp microchirurgical sur l'aorte infrarénale proximale afin d'interrompre le flux sanguin. Ensuite, appliquez un deuxième clamp distal près de la bifurcation aortique. Lorsque le flux sanguin est interrompu, pratiquez une petite incision dans l'aorte à proximité du clamp proximal.

Insérez le cathéter vers la pince distale de l'aorte pour provoquer une lésion endothéliale. Dénudez l'aorte en gonflant soigneusement et lentement le ballonnet du cathéter, puis en tirant progressivement le cathéter en direction de la pince proximale. Répétez cette manœuvre deux fois, pour un total de trois gonflages de l'aorte.

Retirez maintenant le cathéter et fermez l'incision aortique à l'aide de points continus en proline 10 au. Avec les points en place, ouvrez soigneusement le clamp distal s'il y a un saignement au site d'autotomie de l'AOR. Refermez à nouveau le clamp, localisez la source du saignement et arrêtez-la par des points séparés supplémentaires.

Lorsqu'il n'y a pas de saignement, ouvrez lentement le clamp proximal. Un pouls aortique doit être visible au niveau de la partie distale par rapport à l'incision. Réorganisez maintenant les intestins en C deux.

Ensuite, fermez la paroi abdominale en commençant par la couche musculaire à l'aide de six sutures continues en proline OTT. Puis, fermez la peau avec cinq sutures OTT et transférez la souris dans sa cage. Au cours des trois premiers jours postopératoires, ajoutez du métrazole à l'eau de boisson pour le contrôle de la douleur.

Surveillez l'animal tout au long de sa récupération, qui dure environ 28 jours. Pour le modèle d'athérosclérose, obtenez des souris déficientes en APOE âgées de quatre semaines. Élevez ces souris dans des conditions standard avec un régime occidental riche en lipides pendant quatre à six mois.

Continuer ce régime pendant toute la durée de l'expérience. Six heures avant la récolte de l'aorte, supprimer l'accès à la nourriture. Préparer ensuite la souris pour la chirurgie comme décrit dans la section précédente.

Commencez la chirurgie en ouvrant la poitrine. Ensuite, sectionnez l'apex du cœur et perfusez-le sous une pression douce avec trois millilitres de paraformaldéhyde à 4 % par la racine aortique afin de fixer l'aorte. Puis, libérez l'aorte depuis sa racine jusqu'à sa bifurcation.

Essayez de retirer autant que possible le tissu adipeux. Ensuite, sectionnez l'arc aortique et conservez-le dans du paraformaldéhyde à 4 %. Transférez maintenant le cœur et l'arbre aortique dans une boîte en silicone contenant du PBS.

Coupez une extrémité de l'arbre aortique et fixez-la sur la couche de silicone à l'aide d'épingles fines. Ouvrez l'aorte longitudinalement et laissez le tissu aortique reposer dans du PBS à température ambiante pendant quelques minutes. Rincez ensuite le tissu une fois avec de l'éthanol à 50 % et immergez-le dans un bain de Soudan.

Trois, colorer la solution pendant environ 15 minutes. Après la coloration, rincer rapidement le tissu avec de l’éthanol à 50 % pendant quelques secondes afin d’éliminer uniquement l’excès de Soudan. Un rinçage excessif éliminerait trop de colorant ; rincer immédiatement le tissu avec de l’eau distillée et procéder à l’imagerie. Pour le modèle d’hyperplasie intimale myo, des aortes de souris dénudées ont été prélevées, incluses dans la paraffine et colorées au trichrome. Les rapports Im ont été calculés à partir des coupes colorées au trichrome en mesurant l’épaisseur de l’intima et de la média.

À l'aide d'une analyse informatique suivie du calcul du rapport, l'épaisseur maximale de la plaque a été mesurée comme l'épaisseur maximale de l'intima dans la lumière par arbre morpho informatique. Le pourcentage d'obstruction luminale a été calculé comme le rapport entre la nouvelle lumière interne et l'ancienne lumière. La surface de la plaque a été calculée en soustrayant la nouvelle lumière interne de l'ancienne lumière.

Les mêmes analyses ont été effectuées sur des coupes transversales colorées au trichrome du modèle d'athérosclérose au niveau du valvule aortique, de l'arc aortique et de l'aorte descendante, uniquement pour le modèle d'athérosclérose. L'aorte descendante a été ouverte longitudinalement et colorée au rouge Soudan. La surface de la plaque et la surface totale de l'aorte ont été mesurées à l'aide d'un ordinateur pour l'analyse des deux modèles.

D'autres méthodes, telles que l'histopathologie et la microscopie à immunofluorescence confocale, peuvent être réalisées afin de répondre à des questions concernant l'oblation luminale, la morphologie et la cellularité. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.