Name: Explantations tumorales dérivées de patients en tant que plate-forme préclinique vivante pour prédire la résistance aux médicaments chez les patients (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Découvrez la méthode des explants tumoraux dérivés de patients pour prédire la réponse aux médicaments anticancéreux. Cette approche 3D préserve l'architecture tumorale et permet l'identification de biomarqueurs prédictifs.

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Nous remercions les chirurgiens et les pathologistes des hôpitaux universitaires de Leicester NHS Trust pour avoir fourni du tissu tumoral réséqué chirurgicalement. Nous remercions également l’installation d’histologie de Core Biotechnology Services pour son aide au traitement des tissus et à la section des blocs de tissus FFPE et Kees Straatman pour son soutien à l’utilisation du Vectra Polaris. Cette recherche a été soutenue et financée par le consortium Explant composé de quatre partenaires : l’Université de Leicester, l’unité de toxicologie du MRC, Cancer Research UK Therapeutic Discovery Laboratories et LifeArc. Un soutien supplémentaire a été fourni par le CRUK-NIHR Leicester Experimental Cancer Medicine Centre (C10604/A25151). Le financement des OGM, des CD et des NA a été fourni par le programme Catalyst de Breast Cancer Now (2017NOVPCC1066), qui est soutenu par un financement de Pfizer.

Rien à divulguer

Cet article décrit les méthodes de génération, de traitement médicamenteux et d’analyse des PDE et met en évidence les avantages de la plate-forme en tant que système de modèle préclinique. La culture ex vivo d’une tumeur fraîchement réséquée, qui n’implique pas sa déconstruction, permet la rétention de l’architecture tumorale13,24 et donc, les interactions spatiales des composants cellulaires dans le TME ainsi que l’hétérogénéité intratumorale. Cette méthode mon...

Le développement d’agents anticancéreux efficaces et sûrs nécessite des modèles précliniques appropriés qui peuvent également fournir un aperçu des mécanismes d’action qui peuvent faciliter l’identification de biomarqueurs prédictifs et pharmacodynamiques. L’hétérogénéité inter- et intratumorale1,2 ,3,4,5et le TME6,7 ,8,9,10,11,12 sont connus pour influencer les réponses médicamenteuses anticancéreuses, et de nombreux modèles de cancer précliniques existants tels que les lignées cellulaires, les organoïdes et les modèles murins ne sont pas en mesure de s’adapter pleinement à ces facteurs cruciaux. fonctionnalités. Un modèle « idéal » est celui qui peut récapituler les interactions spatiales complexes des cellules malignes avec les cellules non malignes dans les tumeurs ainsi que refléter les différences régionales au sein des tumeurs. Cet article se concentre sur les PDE en tant que plate-forme émergente pouvant répondre à bon nombre de ces exigences13.
Le premier exemple de l’utilisation de PDE humains, également connus sous le nom d’histocultures, remonte à la fin des années 1980 lorsque Hoffman et al. ont généré des tranches de tumeurs humaines fraîchement réséquées et les ont cultivées dans une matrice de collagène14,15. Cela impliquait la mise en place d’un système de culture 3D qui préservait l’architecture tissulaire, assurant le maintien des composants stromaux et des interactions cellulaires au sein du TME. Sans déconstruire la tumeur d’origine, Hoffman et al.16 ont annoncé une nouvelle approche de la recherche translationnelle, et depuis ce temps, de nombreux groupes ont optimisé différentes méthodes d’explant dans le but de préserver l’intégrité des tissus et de générer des données précises sur la réponse aux médicaments17,18 , 19, 20,21,22,23,24 , bien que certaines différences entre les protocoles soient évidentes. Butler et al. ont cultivé des explants dans des éponges de gélatine pour aider à la diffusion des nutriments et des médicaments à travers le spécimen20,21,25, tandis que Majumder et al. ont créé un écosystème tumoral en cultivant des explants sur une matrice composée de protéines tumorales et stromales en présence de sérum autologue dérivé du même patient22, 23.
Plus récemment, notre groupe a mis en place un protocole par lequel les explants sont générés par fragmentation des tumeurs en morceaux de 2 à 3 mm3qui sont ensuite placés sans composants supplémentaires sur des membranes perméables à l’interface air-liquide d’un système de culture24. Prises ensemble, ces nombreuses études ont démontré que les PDE permettent la culture de fragments intacts et vivants de tumeurs humaines qui conservent l’architecture spatiale et l’hétérogénéité régionale des tumeurs d’origine. Dans les expériences originales, les explants ou les histocultures étaient généralement soumises à une homogénéisation après un traitement médicamenteux, après quoi divers tests de viabilité ont été appliqués aux échantillons homogénéisés tels que le test de réponse au médicament histoculture20,21, le test MTT (bromure de 3-(6)-2,5-diphényltétrazolium), le test de la lactate déshydrogénase ou le test à base de résazurine26,27,28 . Les progrès récents dans les techniques d’analyse des paramètres, en particulier la pathologie numérique, ont maintenant élargi le répertoire des tests et des essais des paramètres qui peuvent être effectués sur les explants29,30. Pour appliquer ces nouvelles technologies, au lieu de l’homogénéisation, les explantes sont fixées dans du formol, incorporées dans de la paraffine (FFPE) puis analysées à l’aide de techniques d’immunocoloration, permettant un profilage spatial. Des exemples de cette approche ont été documentés pour le cancer du poumon non à petites cellules (CPNPC), le cancer du sein, le cancer colorectal et les explants de mésothéliome où la coloration immunohistochimique du marqueur de prolifération, Ki67, et du marqueur apoptotique, la poly-ADP ribose polymérase clivée (cPARP), a été utilisée pour surveiller les changements dans la prolifération cellulaire et la mort cellulaire24,31,32,33,34.
L’immunofluorescence multiplexée est particulièrement propice au profilage spatial des réponses médicamenteuses chez les explants au point d’extrémité35. Par exemple, il est possible de mesurer la relocalisation et la distribution spatiale de classes spécifiques de cellules immunitaires, telles que les macrophages ou les lymphocytes T, au sein du TME lorsd’untraitement médicamenteux13,36,37,38, et d’étudier si un agent thérapeutique peut favoriser la transition de la « tumeur froide » à la « tumeur chaude »39 . Au cours des dernières années, ce groupe s’est concentré sur la dérivation des PDE de différents types de tumeurs (CPNPC, cancer du rein, cancer du sein, cancer colorectal, mélanome) et sur le test d’une gamme d’agents anticancéreux, y compris les chimiothérapies, les inhibiteurs de petites molécules et les inhibiteurs du point de contrôle immunitaire (ICO). Les méthodes d’analyse des paramètres ont été optimisées pour inclure l’immunofluorescence multiplexée afin de permettre le profilage spatial des biomarqueurs pour la viabilité ainsi que des biomarqueurs pour différents constituants du TME.

<table><tbody><tr><td><fort>Acide acétique</fort></td><td>Sigma</td><td>320099</td><td>Réactif de coloration</td></tr><tr><td><fort> Diluant / Bloc d’anticorps, 1x</fort></td><td>Perkin Elmer ARD1001EA</td><td></td><td>Diluant/tampon de blocage d’anticorps</td></tr><tr><td><fort>Barnstead NANOpure Diamond</fort></td><td>Barnstead</td><td></td><td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td></tr><tr><td> Acide citrique monohydraté</fort></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7129</td><td>Réactif pour tampon de citrate</td></tr><tr><td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td><td>Corning Incorporated</td><td>3516</td><td>6 plaques multipuits</td></tr><tr><td>DAPI Dilactate</td><td>Life Technologies</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>100 x 17 mm Plat, Nunclon Delta</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>150350</td><td>Plat de 100 mm de diamètre pour la culture tissulaire</td></tr> <tr><td><fort>DMEM (1x) Dubelcco’s Modified Eagle Medium + 4,5 g/L de D-Glucose + 110 mg/mL de pyruvate de sodium</td><td>Gibco (Life Technologies)</td><td>10569-010</td><td>Milieu de culture tissulaire (500 mL)</td></tr><tr><td><fort>Montant DPX</fort></td><td>VWR</td><td>360294H</td><td>Milieu de montage</td></tr><tr><td><fort>DPX montant</td><td>Merck</td><td>6522</td><td>Milieu de montage</td></tr><tr><td><fort>Acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3609</td><td>Réactif pour tampon TE</td></tr><tr><td><fort>Éosine</fort>CellPath</td><td></td> <td>RBC-0100-00A</td><td>Réactif de coloration</td></tr><tr><td><fort>Sérum de veau fœtal</fort></td><td>Gibco</td><td>10500-064</td> Pour <td>la culture tissulaire moyen</td></tr><tr><td><fort >37 % Formaldéhyde</fort></td><td>Fisher (Acros)</td><td>119690010</td><td>10 % Formalin</td></tr><tr><td><fort>iGenix, four à micro-ondes IG2095</td><td>iGenix</td><td>IG2095</td><td>Micro-ondes utilisé pour le titrage antigénique</td></tr><tr><td><fort>alcool méthylé industriel (IMS)</fort></td><td>Genta Medical</td><td>199050</td><td>99 % d’alcool industriel dénaturé (IDA)</td></tr><tr><td>InForm Logiciel avancé d’analyse d’images</td><td>Akoya Biosciences</td><td>InForm</td><td></td></tr><tr><td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Automated Tissue Processor</td></tr><tr><td>Leica Arcadia H et C</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Bain de cire d’enrobage</td></tr><tr><td>Leica RM2125RT</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Microtome rotatif</td></tr><tr><td><fort>Leica ST4040 Colorateur linéaire</fort></td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>H& E colorant</td></tr><tr><td>Mayer’s Haematoxylin</td><td>Sigma</td><td>GHS132-1L</td><td>Réactif de coloration</td></tr><tr><td>Inserts de culture cellulaire millicellule, 30 mm, PTFE hydrophile, 0,4 & micro ; m</td><td>Merck Milipore</td><td>PICMORG50</td><td>Disque d’insertion de culture organotypique</td></tr><tr><td>Novolink Polymer Detection System</td><td>Leica Biosystems</td><td>RE7150-K</td><td>DAB staining kit</td></tr><tr><td>OPAL 480</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1500001KT</td><td>Fluorophore avec diluant de diluant de sulfoxyde de diméthyle (DMSO)</td></tr><tr><td><>OPAL 520</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1487001KT</td><td>Fluorophore avec diluant < sulfoxyde de diméthyle (DMSO)</td></tr> <tr><td>>OPAL 570</></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1488001KT</td><td>Fluorophore avec diluant < sulfoxyde de diméthyle (DMSO)</td></tr> <tr><td>>OPAL 620</fort></td><td>Akoya Biosciences FP1495001KT Fluorophore</td><td></td><td>avec diluant < sulfoxyde de diméthyle (DMSO)</td></tr> <tr><td>>OPAL 650</fort> </td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1496001KT</td><td>Fluorophore avec diluant au sulfoxyde de diméthyle (DMSO)</td></tr> <tr><td>< fort>OPAL 690</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1497001KT</td><td>Fluorophore avec diluant au diluant de diméthylsulfoxyde de diméthyle (DMSO)</td></tr> <tr><td>OPAL 780 / Réactif OPAL TSA-DIG </td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1501001KT</td><td>Fluorophore avec diluant au diluant au diluant de diméthylsulfoxyde de diméthyle (DMSO) et réactif TSA-DIG</td></tr><tr><td>Polymère Opal HRP Ms Plus Rb, 1x</td><td>Perkin Elmer</td><td>ARH1001EA</td><td>polymère HRP</td></tr><tr><td>solution de pénicilline/streptomycine</td><td>Fisher Scientific</td><td>11548876</td><td>Pour une utilisation dans le milieu de culture tissulaire</td></tr><tr><td>PhenoChart Entire Slide Contextual Viewer</td><td>Akoya Biosciences</td><td></td><td>PhenoChart Viewer logiciel pour images numérisées</td></tr><tr><td>Comprimés salins tamponnés au phosphate</td><td>Thermo Scientific Oxoid</td><td>BR0014G</td><td>PBS</td></tr><<tr><td>strong>1x Plus Amplification Diluant</td><td>Perkin Elmer</td><td>FP1498</td><td>Diluant fluorophore</td></tr><tr><td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td><td>Invitrogen</td><td>P36961</td><td>Montage medium</td></tr><tr><td>Slide Carrier</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Pour charger les diapositives dans le Slide Carrier Hotel pour les numériser avec Vectra Polaris</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/3160/63</td><td>10 % Formalin</td></tr><tr><td>Sodium Hydroxide pellets</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/4920/53</td><td>Réactif pour tampon de citrate</td></tr><tr><td>Tenatex Toughened Wax - Rose (500 g)</td><td>KEMDENT</td><td>1-601</td><td>Cire dentaire surface</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp ; Shandon Sequenza Rack de lames pour centre d’immunocoloration</td><td>Fisher</td><td>10098889</td> Scientific <td>Support pour lames et clips de diapositives</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td><td>Fisher Scientific</td><td>11927774 Clips de</td><td>diapositives</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252859</td><td>Réactif pour tampon TE</td></tr><tr><td>VectaShield</td><td>Vecta Laboratories</td><td>H-1000-10</td><td>Montage medium</td></tr><tr><td>Vectra Polaris Slide Scanner</td><td>Perkin Elmer</td><td>Vectra Polaris</td><td>Scanner de diapositives</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Genta Medical</td><td>XYL050</td><td>Agent déparaffinant</td></tr></tbody></table>

explantations tumorales dérivées de patients en tant que plate-forme préclinique « vivante » pour prédire la résistance aux médicaments chez les patients

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

La compréhension de la résistance aux médicaments et le développement de nouvelles stratégies pour sensibiliser les cancers hautement résistants reposent sur la disponibilité de modèles précliniques appropriés capables de prédire avec précision les réponses des patients. L’un des inconvénients des modèles précliniques existants est l’incapacité de préserver contextuellement le microenvironnement tumoral humain (TME) et de représenter avec précision l’hétérogénéité intratumorale, limitant ainsi la traduction clinique des données. En revanche, en représentant la culture de fragments vivants de tumeurs humaines, la plate-forme d’explant dérivé du patient (PDE) permet d’examiner les réponses médicamenteuses dans un contexte tridimensionnel (3D) qui reflète le plus fidèlement possible les caractéristiques pathologiques et architecturales des tumeurs d’origine. Des rapports antérieurs avec des PDE ont documenté la capacité de la plate-forme à distinguer les tumeurs chimiosisttives des tumeurs chimiorésistantes, et il a été démontré que cette ségrégation est prédictive des réponses des patients aux mêmes chimiothérapies. Simultanément, les PDE permettent d’interroger les caractéristiques moléculaires, génétiques et histologiques des tumeurs qui prédisent les réponses aux médicaments, identifiant ainsi des biomarqueurs pour la stratification des patients ainsi que de nouvelles approches interventionnelles pour sensibiliser les tumeurs résistantes. Cet article décrit en détail la méthodologie pdE, de la collecte d’échantillons de patients à l’analyse des critères d’évaluation. Il fournit une description détaillée des méthodes de dérivation et de culture des explants, en mettant en évidence les conditions sur mesure pour des tumeurs particulières, le cas échéant. Pour l’analyse des critères d’évaluation, l’accent est mis sur l’immunofluorescence multiplexée et l’imagerie multispectrale pour le profilage spatial de biomarqueurs clés dans les régions tumorales et stromales. En combinant ces méthodes, il est possible de générer des données quantitatives et qualitatives sur la réponse aux médicaments qui peuvent être liées à divers paramètres clinicopathologiques et donc potentiellement utilisées pour l’identification de biomarqueurs.

L’imagerie multispectrale des coupes histologiques colorées par mIF permet l’identification et le phénotypage des populations cellulaires individuelles et l’identification des composants tumoraux et stromaux dans l’explant TME (Figure 2). L’imagerie multispectrale est particulièrement utile pour l’analyse des tissus à forte autofluorescence intrinsèque, tels que les tissus à forte teneur en collagène, car elle permet de déconfléchir le signal d’autofluorescence des autres signaux et de l’exc...

Cet article décrit les méthodes de génération, de traitement médicamenteux et d’analyse des explants dérivés du patient pour évaluer les réponses aux médicaments tumoraux dans un système de modèle préclinique vivant, pertinent pour le patient.

Explantations tumorales dérivées de patients en tant que plate-forme préclinique « vivante » pour prédire la résistance aux médicaments chez les patients

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

Les explants dérivés du patient sont une méthode à court terme fournissant des données de réponse immédiate au médicament qui peuvent prédire avec précision les résultats pour les patients. Les plates-formes permettent d’examiner les réponses des médicaments dans un contexte 3D qui reflète le plus fidèlement possible les caractéristiques pathologiques et architecturales des tumeurs régionales. Les explants ont le potentiel d’offrir de nouvelles perspectives sur le métabolisme et le mécanisme d’action d’un médicament et de faciliter l’identification de nouveaux biomarqueurs pharmacodynamiques.Avant de commencer l’expérience, nettoyez tout l’équipement chirurgical avec une solution d’alcool méthylé industriel à 70%. Remplissez un plat de culture de 10 centimètres avec 25 millilitres de milieu frais sur glace. À l’aide d’une pince à épiler, transférez l’échantillon sur une surface de cire dentaire et utilisez deux lames de greffe de peau pour découper le tissu en fragments d’environ deux à trois millimètres cubes.Transférer les explantations dans un plat de 10 centimètres et placer six à neuf morceaux de tissu dans un tube d’un millilitre contenant 10% de solution de formol non tamponnée pour une incubation de 24 heures à température ambiante. Remplissez le nombre de puits souhaité d’une plaque de six puits avec 1,5 millilitre de milieu frais par puits. Et placez un plat d’insertion de culture organotypique dans chaque puits afin qu’il flotte sur le milieu.Placez six à neuf explants sur chaque disque d’insertion et stockez-les pendant 16 heures dans un incubateur à 5% de dioxyde de carbone pour permettre la récupération. Le lendemain, ajoutez du milieu frais et du médicament à chaque puits d’une nouvelle assiette. Inclure un puits pour le contrôle du véhicule.Lorsque tous les traitements médicamenteux ont été préparés, utilisez une pince à épiler pour transférer un insert dans chaque puits de la nouvelle plaque de six puits pour une incubation de 24 à 48 heures dans l’incubateur à dioxyde de carbone. Après le traitement médicamenteux, transférer les disques dans six nouvelles plaques de puits contenant 10% de formol. Et ajoutez quelques gouttes de formol à 10% sur le dessus de chaque explante pour assurer une couverture complète avec le fixateur pendant 24 heures d’incubation à température ambiante.Le lendemain, faire tremper un nombre approprié de petites éponges histologiques dans une solution méthylée industrielle à 70%. Et placez les éponges à l’intérieur de cassettes d’histologie. Lorsque toutes les éponges ont été placées, transférez toutes les explants de la même condition de traitement médicamenteux sur une seule éponge avec le côté traité par médicament de chaque explante en contact avec le disque inséré.Placez une autre éponge pré-trempée sur le dessus de chaque explante et fermez la cassette pour fixer les explants dans la cassette. Ensuite, immergez les cassettes dans une solution méthylée industrielle à 70% avant de procéder au traitement histologique. Après la numérisation, effectuez une analyse de formation et chargez les numérisations contenant les tampons pour la formation dans le logiciel d’analyse approprié.En mode unique, naviguez à travers les images et sélectionnez les scans à analyser et le scan avec fluorescence intrinsèque. avec le balayage de fluorescence intrinsèque sur une seule vue, cliquez sur le sélecteur d’autofluorescence pour dessiner un segment sur une zone de tissu non coloré. Cliquez sur Modifier les marqueurs et les couleurs et entrez les noms des marqueurs dans la zone associée à chaque fluorophore.Cliquez sur Préparer les images pour permettre au logiciel de soustraire l’intensité de la fluorescence intrinsèque de toutes les images téléchargées. Cliquez sur l’étape segmenter le tissu en haut de l’écran pour ouvrir la fenêtre d’entraînement à la segmentation des tissus. Dans le panneau Catégories de tissus, entrez le nom de chaque catégorie de tissus à segmenter.Cliquez sur Dessiner pour dessiner des régions autour de groupes de cellules dans la catégorie de tissus qui vous intéresse. Passez ensuite à la catégorie de tissus suivante et dessinez de nouvelles régions. Lorsque toutes les régions d’entraînement ont été définies, utilisez la segmenteuse de tissu de train et attendez que la précision de l’entraînement s’installe.Peut-être à une valeur proche de 100%Cliquez sur le segment pour segmenter les tissus. Après avoir vérifié la qualité de la segmentation tissulaire, cliquez sur Segmentation cellulaire et sélectionnez les compartiments cellulaires à segmenter. Pour configurer le composant nucléaire, utilisez le curseur d’intensité standard pour ajuster le seuil utilisé pour détecter les pixels nucléaires.Les commentaires en direct sont fournis par la fenêtre d’aperçu. Pour diviser les grappes de pixels nucléaires, dans le panneau de fractionnement des composants nucléaires, sélectionnez le bouton qui décrit le mieux la qualité de coloration des noyaux et utilisez la barre de défilement pour ajuster la sensibilité de fractionnement. Cliquez ensuite sur segmenter tout pour segmenter toutes les images.Lorsque toutes les images ont été segmentées, dans le panneau Phénotypes, ajoutez la liste des phénotypes à détecter et entrez le nom des phénotypes dans la zone de texte correspondante. Cliquez sur Modifier les phénotypes pour sélectionner une cellule particulière et sélectionnez le phénotype correspondant dans le menu déroulant. Après avoir terminé la sélection pour la formation, cliquez sur le classificateur de train pour évaluer le résultat de chaque phénotype.Continuez avec le phénotype tout, enregistrez le projet et cliquez sur exporter. Sélectionnez l’onglet Analyse par lots et chargez le projet dans l’algorithme de traitement par lots ou la zone de projet. Pour exporter les images et les tableaux, sélectionnez toutes les zones des options d’exportation, cliquez sur Ajouter des diapositives et chargez toutes les images contenant les tampons pour les lots préparés précédemment.Cliquez ensuite sur Exécuter pour démarrer l’analyse par lots d’un tampon et exporter les données correspondantes lorsqu’elles ont été acquises. L’imagerie multispectrale du tissu explantaire du CPNPC coloré pour les marqueurs de la viabilité cellulaire permet l’identification et le phénotypage de populations cellulaires individuelles, ainsi que l’identification des composants tumoraux et stromaux dans le micro-environnement tumoral de l’explantation. La segmentation tissulaire et cellulaire des marqueurs de viabilité cellulaire colore des images multispectrales, comme démontré, peut être utilisée pour quantifier la mort et la prolifération cellulaires dans les explants dérivés de patients traités avec des médicaments d’intérêt.Par exemple, dans cette analyse, dans des échantillons de tissus de tumeurs traitées par Nivolumab, un nombre plus élevé de cellules mourantes a été identifié par rapport aux échantillons de tumeurs traitées par le contrôle. De plus, comme illustré, la capacité d’extraire des informations spatiales à partir de dissections colorées permet le calcul des distances intercellulaires. Les explants peuvent également être utilisés pour un profilage spatial étendu ou une cytométrie de masse, ce qui permet de profiler simultanément des centaines de biomarqueurs à une résolution subsidiaire tout en préservant la structure 3D de l’échantillon.Les pourraient prédire l’efficacité de l’immunothérapie. Par exemple, il pourrait être possible de distinguer les cas sensibles ou résistants aux inhibiteurs du point de contrôle immunitaire et d’étudier les mécanismes qui sous-tendent cette distinction.

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Ici, nous avons établi une méthode pour tester l'efficacité des médicaments avec des spécimens chirurgicaux de tumeurs du cerveau, appelée «méthode des explants tumoraux». Avec cette méthode, nous pouvons évaluer l'efficacité des médicaments sans casser le microenvironnement des tumeurs solides. Afin de valider la fiabilité de cette méthode, nous décrivons les données représentatives de notre échantillon de gliome traités avec le courant de première ligne agent chimiothérapeutique, le...

Méthode pour le développement de nouveaux médicaments anti-cancer en utilisant des explants des tumeurs des spécimens chirurgicaux

Lignées de cellules cancéreuses établies et les xénogreffes ont été le pilier de la recherche sur le cancer au cours des dernières décennies. Cependant, des données récentes suggèrent que la réponse thérapeutique est fortement influencée par le micro-environnement des cellules tumorales. Par conséquent, nous avons développé une analyse ex vivo des échantillons de tumeurs primaires à des fins de développement de médicaments.

La réponse au traitement ex vivo de tumeurs primaires et / ou métastases associées préclinique et développement clinique de la thérapeutique

Utilisant des tumeurs provenant de patients dans un modèle préclinique sous-cutanée est une excellente façon d'étudier l'efficacité de nouvelles thérapies, la découverte de biomarqueurs prédictifs et les voies résistantes aux médicaments. Ce modèle, dans le processus de développement de médicaments, est essentielle pour déterminer le sort de nombreuses thérapies anticancéreuses avant investigation clinique.

Développement et maintenance d&#39;une tumeur du patient Préclinique dérivé modèle de xénogreffe de l&#39;enquête de Novel Anti-Cancer Therapies

Pour permettre une détection très sensible de la diffusion du cancer colorectal humain cellules (CRC) qui colonisent les tissus, nous montrons ici un protocole pour la transduction efficace des Particules Lentivirales protéine fluorescente verte (GFP) dans les cellules organoïde CRC PDX-dérivés avant leur injection à des souris bénéficiaires, avec l’observation au microscope stéréo-fluorescence.

Haute sensibilité détection des micrométastases générés par GFP Lentivirus-transduites organoïdes cultivé à partir d’une tumeur du côlon dérivé de Patient

Les modèles de xénogreffe (PDX) dérivés du patient récapitulent plus solidement les caractéristiques moléculaires et biologiques du mélanome et sont plus prédictifs de la réponse thérapeutique par rapport aux essais traditionnels fondés sur la culture des tissus plastiques. Nous décrivons ici notre protocole d'exploitation standard pour l'établissement de nouveaux modèles PDX et la caractérisation/expérimentation des modèles PDX existants.

Un modèle de xénogreffe dérivé du mélanome

Ici, nous présentons un protocole pour tester l’efficacité des thérapies ciblées sélectionnées basées sur la composition génomique d’une tumeur. Le protocole décrit l’identification et la validation des réarrangements structurels d’ADN, l’engraftment des tumeurs des patients dans les souris et les réponses d’essai aux drogues correspondantes.

Test de thérapies ciblées dans le cancer à l’aide de l’analyse structurale de l’altération de l’ADN et des Xénogreffes dérivées du patient

Nous introduisons un protocole pour mesurer la réponse de drogue en temps réel dans les tranches organotypic de tissu de tumeur. La stratégie expérimentale décrite ici fournit une plate-forme pour effectuer des écrans de drogue à débit moyen-élevé sur des tranches de tissu dérivées des tumeurs cliniques ou de souris dans des conditions ex vivo.

Mesurer la réponse en temps réel des médicaments dans les tranches de tissu tumoral organotypique

Les modèles de xénogreffes dérivées de patients (PDX) et les modèles murins génétiquement modifiés transplantables récapitulent fidèlement les maladies humaines et sont des modèles préférés pour la recherche fondamentale et translationnelle sur le cancer du sein. Ici, une méthode est décrite pour transplanter orthotopiquement des fragments de tumeur mammaire dans le coussinet adipeux mammaire afin d’étudier la biologie tumorale et d’évaluer la réponse médicamenteuse.

Transplantation orthotopique de tumeurs mammaires comme modèles précliniques pour le cancer du sein

Une méthode est décrite pour créer des organoïdes à l’aide de xénogreffes dérivées du patient (PDX) pour le dépistage in vitro, ce qui donne des paires appariées de modèles in vivo/in vitro. Des tumeurs de PDX ont été moissonnes/traitées en petits morceaux mécaniquement ou enzymatiquement, suivies du Clevers' méthode pour cultiver des organoids de tumeur qui ont été passaged, cryopreserved et caractérisés contre le PDX original.

Création de paires de modèles appariés in vivo/in vitro dérivés du patient d’organoïdes dérivés de PDX et de PDX pour la recherche en pharmacologie du cancer

Un système de dosage in vitro à haut débit très précis a été développé pour évaluer les médicaments anticancéreux utilisant des organoïdes tumoraux dérivés du patient (PDO), similaires aux tissus cancéreux, mais ne conviennent pas aux systèmes de dosage in vitro à haut débit avec des plaques de 96 puits et 384 puits.

Test in vitro à haut débit utilisant des organoïdes tumoraux dérivés du patient

Ce protocole décrit une évaluation standardisée des sensibilités médicamenteuses aux inhibiteurs de signalisation ciblés dans des modèles organoïdes dérivés de patients atteints de CPNPC.

Profilage de la sensibilité aux thérapies ciblées dans les organoïdes dérivés de patients atteints de CPNPC mutants EGFR

Découvrez la méthode des explants tumoraux dérivés de patients pour prédire la réponse aux médicaments anticancéreux. Cette approche 3D préserve l'architecture tumorale et permet l'identification de biomarqueurs prédictifs.

Explantations tumorales dérivées de patients en tant que plate-forme préclinique vivante pour prédire la résistance aux médicaments chez les patients (Vidéo) | JoVE Journal

Explantations tumorales dérivées de patients en tant que plate-forme préclinique « vivante » pour prédire la résistance aux médicaments chez les patients

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