פוטוסינתזה
- כרומטוגרפיית פיגמנט צמחי
- הערה: בניסוי זה תפרידו פיגמנטים מעלי תרד באמצעות נייר כרומטוגרפיה. פיגמנטים בודדים נעים לאורך הנייר בקצב שונה ועשויים להיות בעלי צבעים שונים. על ידי חישוב המרחק היחסי שהפיגמנטים עוברים, גורם הרזולוציה שלהם והשוואתם לערכי ספרות, ניתן לזהות פיגמנטים שונים. השערות: בתרגיל זה השערת הניסוי היא שיהיו פיגמנטים מרובים בתוך עלי התרד שיספגו אורכי גל שונים של אור השמש. השערת האפס היא שיש רק סוג אחד של פיגמנט בתוך עלה התרד.
- השתמש בעיפרון כדי ליצור קו שני סנטימטרים מקצה אחד של נייר הכרומטוגרפיה.
- לאחר מכן, הניחו מנקה צינורות אופקי על פני החלק העליון של נקייה של 400 מ"ל.
- מניחים את הצד המסומן בעיפרון של רצועת הכרומטוגרפיה בתחתית הכד.
- לאחר מכן, עטפו את הנייר סביב מנקה הצינור כך שהקצה התחתון בקושי ייגע בתחתית הכד ולאחר מכן הדקו אותו עם מהדק נייר.
- כאשר הנייר מאובטח סביב מנקה הצינורות, הסר אותו מהכד ולאחר מכן הנח עלה תרד יבש על הקו המסומן על נייר הכרומטוגרפיה.
- גלגלו מטבע על עלה התרד לאורך קו העיפרון, עברו הלוך ושוב מספר פעמים והפעילו לחץ יציב. כאשר העלה מוסר, קו ירוק צריך להיות נוכח בבירור.
- לאחר מכן, מניחים 8 מ"ל של ממס כרומטוגרפיה בכד.
- הנמיכו את פס הכרומטוגרפיה לתוך הכד כך שקצה הנייר ייגע בממס אך הקו הירוק לא. התאימו את מנקה הצינור במידת הצורך.
- מבלי להפריע לכד, התבונן בממס כשהוא נע במעלה הנייר והפיגמנטים הבודדים נפרדים.
- כאשר הממס עבר את מחצית הדרך במעלה נייר הכרומטוגרפיה, פעולה שתימשך כ-10 דקות, והפיגמנטים נפרדו לרצועות מוגדרות היטב, הסירו את הנייר מהכד.
- סמן כמה רחוק עבר הממס בעיפרון ולאחר מכן אפשר לנייר להתייבש. הערה: הממס מתאדה במהירות.
- לאחר מכן, רשום את מספר הפסים הגלויים ותאר את צבעם ואת גודלם היחסי.
- מדדו כמה רחוק עברו הממס והפיגמנטים, ורשמו מידע זה עבור כל פיגמנט בטבלה 1. לחץ כאן להורדת טבלה 1
- יש להשליך את ממס הכרומטוגרפיה למיכל פסולת מתחת למכסה אדים. זרקו את רצועות הכרומטוגרפיה לפח הרגיל, ואז נקו את הכוסות במים וסבון.
- דיסקיות עלים צפות בוואקום
- הערה: בניסוי זה תצפו בעקיפין בפוטוסינתזה ובנשימה התאית באמצעות דיסק עלה צף בתמיסה. במהלך הפוטוסינתזה, בועות אוויר יגרמו לעלים לצוף, ובמהלך הנשימה הדיסקים ישקעו. השערות: בתרגיל זה, השערת הניסוי היא שלדיסקות העלים יהיה קצב פוטוסינתזה גדול יותר בתמיסת ביקרבונט, מכיוון שביקרבונט מספק תוספתCO2 כדי לתדלק פוטוסינתזה, מה שגורם ליותר דיסקיות עלים לצוף. בנוסף, כל הדיסקים ישקעו בתנאים חשוכים בזמן שהם מבצעים נשימה תאית. השערת האפס היא שלא יהיה הבדל בקצב הפוטוסינתזה, ולכן במספר הדיסקים הצפים, בין ביקרבונט למים, או טיפולים באור ובחושך.
- כדי להניח דיסקיות עלים תחת ואקום, תחילה הסר את הבוכנות משני מזרקים של 20 מ"ל, ולאחר מכן הנח 10 דיסקיות עלים בתוך כל צינור מזרק. תייגו מזרק אחד "ביקרבונט", ותייגו את המזרק השני "מים".
- החלף את הבוכנה ודחף את הבוכנה עד שנשארת רק כמות קטנה של אוויר במזרק. יש להקפיד שלא לפגוע בדיסקי העלה.
- משוך 5 מ"ל של תמיסת ביקרבונט לאחד המזרקים. הפוך וסובב את המזרק כדי לתלות את דיסקיות העלה בתמיסה.
- לדחוף כמה שיותר אוויר החוצה מבלי לגרש את התמיסה או לפגוע בדיסקי העלים.
- לאחר מכן משוך 5 מ"ל של תמיסת המים לתוך המזרק השני ומערבל אותו כפי שתואר קודם לכן (שלב 3).
- כדי ליצור ואקום, החזיקו אצבע אחת על קצה המזרק תוך משיכה לאחור על הבוכנה. החזק את זה במשך 10 שניות תוך כדי סיבוב המזרק כדי לשמור על דיסקיות העלה בהשעיה.
- לאחר מכן, שחררו את הוואקום. הערה: הדיסקים היו צריכים לספוג את התמיסה לתוך חללי האוויר ברקמות שלהם ואתה צריך לראות אותם שוקעים. אם הדיסקים אינם שוקעים, ניתן לחזור על יצירת הוואקום עד שלוש פעמים.
- לאחר מכן, הוסף 50 מ"ל של תמיסת ביקרבונט לכוס פלסטיק או זכוכית, ולאחר מכן הוסף בעדינות את הדיסקיות ממזרק ואקום ביקרבונט.
- עבור הבקרה, הוסף את אותה כמות מים לכוס זהה, ולאחר מכן הוסף את דיסקיות העלים ממזרק ואקום המים. תייגו את המכלים בהתאם.
- מניחים את שתי הכוסות תחת מקור אור.
- כל חמש דקות רושמים את מספר הדיסקים הצפים על פני הספל בטבלה 3 עד שחלפו 20 דקות. לחץ כאן להורדת טבלה 3
- לאחר מכן, הסר את הכוסות ממקור האור ולאחר מכן סובב אותן כך שהדיסקים על פני השטח יתערבבו עם גזים כלשהם גם על פני השטח.
- העבר את הכוסות למקום חשוך. כל חמש דקות רושמים את מספר דיסקיות העלים הצפות על פני השטח עד שחלפו 20 דקות. סובבו את הספל בכל פעם לפני שתחזירו אותו לחשיכה.
- כדי לנקות, השליכו את דיסקיות העלים לפח ושפכו את תמיסת הביקרבונט במורד הניקוז. שטפו היטב את המזרקים והכוסות.
- Results
- הערה: בניסוי הראשון הבחנתם כמה רחוק עברו פיגמנטים מעלי תרד על נייר כרומטוגרפיה. פיגמנטים שונים בולעים אור באורכי גל שונים.
- באמצעות עטים או עפרונות צבעוניים, ציירו את מיקומם של רצועות הפיגמנט והממס באיור 3.
- חישוב מקדם השמירה, או ערכי Rf עבור הפיגמנטים, אשר נעשה על ידי חלוקת המרחק שהפיגמנט המדובר עבר במעלה הנייר מהקו במרחק שהממס עבר במעלה הנייר מהקו.
- השווה את ערכי Rf המחושבים שלך לערכים בטבלה 2 כדי לקבוע את זהות הפיגמנט. לחץ כאן להורדת טבלה 2
- רשום נתונים אלה בטבלה 1. הערה: בניסוי השני צפיתם בדיסקי עלים צפים ושוקעים כמדידה עקיפה של פוטוסינתזה ונשימה.
- גרף את התוצאות עם זמן ודקות על ציר x ומספר דיסקים צפים על ציר Y. השתמש בשני קווים שונים כדי לייצג את בקרת המים ואת הטיפול בויקרבונט.
- הוסף קו לגרף כדי לציין את הנקודה שבה הדיסקים הוצאו ממצב האור והונחו בחושך.
- לאחר מכן, החל ממצב ביקרבונט, השתמש בגרף כדי לקבוע את הנקודה שבה 50% מדיסקיות העלה צפו. זה נקרא הזמן האפקטיבי, או ET50. הערה: סביר להניח שהדיסקים מגיעים לסימן הצף של 50% פעם אחת במצב האור ואז שוב במצב חשוך.
- ייתכן שדגימות המים שלך הגיעו או לא הגיעו לסימן ET50. אם כן, הוסף גם את השורה עבור דוגמה זו.
- לבסוף, השווה את ערכי ET50 והגרפים שלך עם שאר המחלקה.