מחקרים גנטיים שמרים יכול להיות מועסק לחקור את הפונקציות מולקולרית תאית של הגנים האנושיים במטבוליזם DNA התאי. מתוארות שיטות לאפיון הגנטי של האדם WRN הגן הפגום של תסמונת הזדקנות מוקדמת ורנר הפרעה תפקודית המסלולים נשמרת באמצעות שמרים כמודל למערכת ממושמע המוצר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מחקרים גנטיים של חלבונים תיקון דנ"א אנושי באמצעות שמרים כמודל למערכת
במאמר זה
סיכום
תקציר
הבנת תפקידם של החלבונים תיקון דנ"א אנושי במסלולים גנטי הוא אתגר עצום לחוקרים רבים. מחקרים גנטיים במערכות יונקים היה מוגבל בשל היעדר כלים זמינים כולל מוטציה קווים מוגדרים התא הגנטי, מערכות רגולטוריות הביטוי, וסמנים לבחירה המתאימה. כדי לעקוף את הקשיים הללו, מערכות מודל גנטי אאוקריוטים נמוך הפכו בחירה אטרקטיבית לחקר תפקודית נשמרת לתקן דנ"א וחלבונים המסלולים. פיתחנו מודל שמרים המערכת כדי ללמוד את פונקציות גנטי מוגדר היטב של תסמונת ורנר helicase-nuclease (
פרוטוקול
1. זני שמרים
זנים עם wild-type SGS1 TOP3 (WT: W303-1A, גנוטיפ, מחצלת ade2-1 canl-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trpl-l ura3-1) [2], sgs1 מוטציה (W1292-3C ; גנוטיפ מחצלת SUP4-O:: URA3 sgs1-25 ade2-1 can1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rad5-535) ו sgs1 top3 מוטציה (W1058-11C, גנוטיפ, MAT SUP4-O:: URA3 sgs1-25 top3-2:: HIS3 ade2-1 can1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rad5-535) היה מאופיין [3] נמסרו חביב ד"ר רודני רוטשטיין (אוניברסיטת קולומביה).....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
אחד היתרונות של שימוש בשמרים כמודל למערכת הוא הזמינות של מוטציות בשכפול הדנ"א מוגדרים מסלולי תיקון אשר נשמרת בין שמרים ובני אדם. מבחר נוסף של transformants מחסה גנים ספציפיים קל ואמין כמו זנים במעבדה הם מוטנטים auxotrophic ו וקטורים עם סמנים auxotrophic זמינים. שימוש אלה וקטורים הביטוי של מוצרים גן יכול להיות מוסדר על ידי הצבתם בשליטת היזם ועין מתנהלת (למשל, מקדם גל ועין מתנהלת וכו '). לאור יתרונות אלה, פיתחנו מודל מבוסס מערכת שמרים ללמוד את הדרישות הפונקציונליות של הגן <.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
עבודה זו נתמכה באופן מלא על ידי תוכנית מחקר בין החומות של, NIH המכון הלאומי להזדקנות. אנו מודים לד"ר רודני רוטשטיין (קולומביה) על זני שמרים ד"ר בראד ג'ונסון (אוניברסיטת פנסילבניה הספר לרפואה, בפילדלפיה, פנסילבניה) לביטוי SGS1 הפלסמיד.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מקורות
- Aggarwal, M., Brosh, R. M. Jr WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3. Aging. 1, 219-233 (2009).
- Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
