זה פרוטוקול וידאו ממחישה את הבידוד של התרבות האנושית וריד הטבור בתאי האנדותל (HUVEC) מ חבל הטבור האדם. לאחר מבודד את התאים האלה יכול לשמש ב מבחני חוץ גופית אנגיוגנזה כמו Assay אופטימליים הפיברין ביד ג'ל הוכיח גם על ידי המעבדה יוז.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
אנגיוגנזה היא תהליך מורכב רב שלבי, שבו בתגובה לגירויים angiogenic, כלי חדש נוצרות vasculature הקיים. צעדים אלה כוללים: ירידה של התפשטות קרום, מרתף והגירה (נביטה) של בתאי האנדותל (EC) לתוך המטריצה תאיים, יישור של EC לתוך מיתרי, היווצרות לומן, השקה, ועל היווצרות קרום מרתף חדשה. רבים מבחני חוץ גופית פותחו כדי ללמוד את התהליך הזה, אבל רוב לחקות רק בשלבים מסוימים של אנגיוגנזה, ואת מורפולוגית כלי לעתים קרובות לא דומים כלי in vivo. כאן אנו מדגימים אופטימיזציה assay אנגיוגנזה במבחנה אשר מנצל האדם וריד הטבור EC ו fibroblasts. זה המודל משחזר את כל השלבים המוקדמים המפתח של אנגיוגנזה, ואת כלי חשוב להציג לומן פטנט אינטר מוקף EC מקוטב. כלי ניתן להבחין בקלות לעומת שלב ואת זמן לשגות מיקרוסקופ, והחלים בצורה הטהורה עבור יישומים במורד הזרם.
פרוטוקול
נוהל
- הנח חוט על משטח נקי טיפה את הדם העודף. לבצע חתכים טריים על שני קצוות של חוט.
- הוספת 21 02/01 מחט G עם נדן את המחט הפלסטיק, לתוך הווריד. (וריד היא הפתיחה הגדולה ביותר; 2 הקטנים הם העורקים)
- הצמד את המחט במקום עם hemostat ולצרף את המזרק 20cc של הנקס אל המחט.
- דחוף את הנקס דרך הווריד עם לחץ מתון. איסוף הפסולת בתוך כוס עם אקונומיקה. (מחזיק את ה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.1% Collagenase | 10 mL לכל חבל טבורי, מחומם ל-37 °C | ||
| בקבוקי תרבית רקמה | T75, אחד לכל חבל טבורי. | ||
| תווך Hanks | |||
| מספריים | סטריליים | ||
| ביਕਰ | סטרילי | ||
| מבחנות 50 mL |
הדפסות חוזרות והרשאות
