מאמר זה מתאר גישה ניסויית לוויסות דינמי של תא תא אינטראקציות בין תאים חסיד בקנה מידה מיקרומטר. מניפולציה של התקשורת בין אינטר hepatocytes תא סטרומה מודגם. הפלטפורמה שפותחה מאפשרת חקירה של תאים תאים אינטראקציות במגוון רחב של תהליכים ביולוגיים, כולל פיתוח בפתוגנזה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הסיליקון מיקרוצ'יפים עבור מניפולציה Cell-cell אינטראקציה
במאמר זה
סיכום
תקציר
תפקידה של microenvironment הסלולר מוכר מכרעת בקביעת גורל התא ותפקודו כמעט בכל הרקמות יונקים מפיתוח שינוי ממאיר. בפרט, אינטראקציה עם stroma השכנות היה מעורב שפע של תופעות ביולוגיות, עם זאת, טכניקות קונבנציונאלי להגביל את היכולת לחקור את האלמנטים מרחבית דינמית של אינטראקציות כאלה.
בתרבות Reconfigurable micromechanical (RC), אנחנו מעסיקים מצע סיליקון micromachined עם חלקים נעים באופן דינמי לשלוט תאים תאים אינטראקציות דרך מחדש מכני. קודם לכן, שיטה זו יושמה כדי לחקור תקשורת אינטר ב שיתוף תרבויות hepatocytes ולא parenchymal תאים, הוכחת תלוי זמן אינטראקציות מגוון מצומצם של איתות מסיסים 1.
כאן אנו מתארים בפרוטרוט את הכנת השימוש במערכת RC. אנחנו מתחילים ידי הוכחת את הטיפול חלקי המכשיר באמצעות פינצטה, כולל actuating הפער בין תצורות קשר (אוכלוסיות תאים המופרדים פער של 80 מיקרומטר צרים, או במגע ישיר). הבא, אנחנו בפרוטרוט את תהליך הכנת מצעים לתרבות, ואת רב שלבי תהליך זריעת תא הנדרש לקבלת monolayers תא ומחוברות. באמצעות מיקרוסקופ לחיות, אז אנחנו להמחיש בזמן אמת מניפולציה של תאים בין תצורות שונות ניסיוני אפשרי. לבסוף, אנו מדגימים את הצעדים הנדרשים על מנת לחדש את פני המכשיר לשימוש חוזר: טולואן וניקוי פיראניה, ציפוי קלקר, פלזמה טיפול חמצן.
פרוטוקול
הכנת תרביות תאים:
- התחל עם חלקים סיליקון מצופה קלקר פלזמה שטופלו.
- מעיל עם חלקים המתאימים חלבונים תאי מטריקס לתמוך מצורף מסוג התא הרצוי. עבור hepatocytes, דגירה בתמיסה 50 גרם / מ"ל קולגן 1 ב 37 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות. עבור fibroblasts 3T3, מטריצה לא נחוץ.
- נעל חלקים עם חלקים משלימים בתצורת קשר.
- משרים אתנול 70% עבור מינימום של 10 דקות לעקר. לשטוף 2x ב DDH 2 O, ו 1x בתקשורת תרבי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מערכת זו היא ייחודית בכך שהיא מאפשרת את הארגון המרחבי של רקמות כדי לטפל באופן דינמי ברמה התאית. לפיכך, התקן זה איפשר מספר ניסויים ביולוגיים רומן, פורש נושאים כגון דינמיקה איתות אינטר, פנה בתיווך מול איתות מסיסים, גורל החלטות התא, טוקסיקולוגיה, ועל crosstalk הסלולר. מכשיר זה יש להכליל נרחב מאז המצע התרבות היא תרבות רקמות פלסטיק רגיל, והמערכת תואמת שיטות התרבות מבחני סטנדרטי. לפיכך, אנו מאמינים כי פלטפורמה זו יהיה עניין רחב ככלי לחקר תאים תאים האינטראקציה בין תאים שונים ברקמות רבות.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין הצהרות גילוי נאות.
תודות
המחברים מודים סלמאן Khetani, ג'ארד אלן, כריס Flaim, ואוסטין Derfus לדיונים מועיל בתהליך של עיצוב המכשיר הזה. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע הפקולטה מוקדם תוכנית פיתוח קריירה, המכונים הלאומיים לבריאות / המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול כליות, ואת דיוויד ולוסיל פקארד קרן. EEH נתמכה על ידי ל 'רות פרס Kirschstein השירות הלאומי למחקר.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| מצעי סיליקון מסרק (Silicon Comb Substrates) | כלי | N/A | N/A | החלקים זמינים עבור פרויקטים של מחקר שיתופי. נא ליצור קשר עם Elliot Hui (eehui @ alum . mit . edu) או Sangeeta Bhatia (sbhatia @ mit . edu). |
מקורות
- Hui, E. E., Bhatia, S. N. Micromechanical control of cell-cell interactions. Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=ShowDetailView&TermToSearch=17389399&ordinalpos=2&itool=EntrezSystem....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
