מאמר שיטה

Micro-דיסקציה של מוח החולדה עבור הפקת RNA או חלבון מן אזור מסוים במוח

DOI:

10.3791/269

⸱

30 באוגוסט 2007

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Micro-לנתיחה במוח חולדה לתוך אזורים שונים מאוד חשוב לחקר מחלות ניווניות שונות. וידאו זה מדגים דיסקציה מיקרו ארבעה אזורים במוח העיקריים כוללים נורת חוש הריח, הקורטקס פרונטלי, היפוקמפוס ו בסטריאטום ברקמת מוח החולדה טרי. עצות שימושיות עבור סילוק מהיר של האזורים השונים, כדי למנוע פירוק חלבונים ו-RNA של הרקמה מקבלים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Micro-לנתיחה במוח חולדה לתוך אזורים שונים מאוד חשוב לחקר מחלות ניווניות שונות. וידאו זה מדגים דיסקציה מיקרו ארבעה אזורים במוח העיקריים כוללים נורת חוש הריח, הקורטקס פרונטלי, היפוקמפוס ו בסטריאטום ברקמת מוח החולדה טרי. עצות שימושיות עבור סילוק מהיר של האזורים השונים, כדי למנוע פירוק חלבונים ו-RNA של הרקמה מקבלים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שלב 1

הקורבן חולדה על פי פרוטוקולים הוקמה. הסר את המוח מהגולגולת ולשטוף אותו קרח קר DEPC טיפול במים מילי Q כדי להסיר כל משטח דם.

שלב 2

מניחים על צלחת מתכת קר. חותכים את המוח דו וחצי לתוך הכדור ימינה ושמאלה.

figure-protocol-1

באיור 1. עמדות חיתוך מהעין המדיאלי של האונה עכברוש

שלב 3

אסוף את הנורה חוש הריח מיד לאחר לחתוך הראשונה. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C.

figure-protocol-2

איור 2. הנורה חוש הריח לנתיחה

שלב 4

איסוף קליפת המוח הקדמית הימנית לאחר לחתוך את השני, באמצעות להב מס '5 דומון מלקחיים. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C.

figure-protocol-3

איור 3. דיסקציה הקורטקס פרונטלי

שלב 5

אסוף את הסטריאטום (גרעין caudate) מיד לאחר לחתוך השלישית בעזרת שני מלקחיים דומון No.5. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C.

figure-protocol-4

איור 4. הסטריאטום (caudate גרעין) דיסקציה

שלב 6

כדי לאסוף את ההיפוקמפוס, לשים בצד הגחוני של המוח ולאחר מכן להסיר את המוח התיכון לחשוף את ההיפוקמפוס. מנתחים את ההיפוקמפוס מהקורטקס באמצעות שני דומון מלקחיים No.5. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C.

figure-protocol-5

איור 5. ההיפוקמפוס לנתיחה

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אזורי מוח שונים לקשר עם מחלות ניווניות שונות. לדוגמה, קליפת המוח הקדמית ואת בסטריאטום קשורות עם מחלת פרקינסון בזמן של ההיפוקמפוס קשור עם מחלת אלצהיימר. דיסקציה מיקרו מדויק של המוח מאפשר לנו לזהות את ה-mRNA וחלבון שינויים באזור הפגוע באופן מדויק יותר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
החיות טופלו לפי פרוטוקול לשימוש בבעלי חיים במחקר שאושר על ידי הוועדה על השימוש בבעלי חיים בהוראה ומחקר (CULATR) באוניברסיטת הונג קונג על פי המכון הלאומי לבריאות הנחיות לשימוש בבעלי חיים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מיקרוסקופOlympus Corporation
כלי ניתוחלוח מתכת, פינצטות, להב וכדומה. עטופים בנפרד בנייר אלומיניום וחוממו ב-180oC למשך שמונה שעות כדי לסלק RNase. קולחלו לטמפרטורה של קרח לפני השימוש.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

RNA

מאמרים קשורים