סינתזה קומבינטורית של שחרור חלבון ותפוקה גבוהה מסרט הפולימר וספריות Nanoparticle

Summary

שיטה זו מתארת ​​את הסינתזה קומבינטורית של סרט polyanhydride מתכלה וספריות nanoparticle וזיהוי התפוקה גבוהה של שחרור חלבון מהספריות הללו.

Abstract

Polyanhydrides הוא קבוצה של חומרים ביולוגיים עם biocompatibility מצוין ויכולות אספקת סמים. בזמן שהם נחקרו רבים עם קונבנציונלי אחד מדגם ב-A-זמן טכניקות סינתזה, גישה אחרונה יותר תפוקה גבוהה פותחה מאפשרת סינתזה והבדיקה של ספריות גדולות של ¹ polyanhydrides. זה יאפשר ביצוע אופטימיזציה יעילה יותר ותהליך עיצוב של biomaterials אלה עבור יישומי משלוח סמים וחיסון. שיטת עבודה זו מתארת ​​את הסינתזה קומבינטורית של סרט polyanhydride מתכלה וספריות nanoparticle וזיהוי התפוקה גבוהה של שחרור חלבון מהספריות הללו. בשיטת רובוט מופעל זה (איור 1), ומפעיל ליניארי ומשאבות מזרק נשלטים על ידי LabVIEW, המאפשר פרוטוקול אוטומטי ללא ידות, ביטול שגיאות משתמש. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת ייצור המהיר של ספריות פולימר מייקרו בקנה מידה, אדוםucing הגודל יצווה תוך כתוצאה מהיצירה של מערכות פולימרי multivariant. גישה זו לסינתזה קומבינטורית פולימר מאפשרת סינתזה של עד 15 פולימרים שונים בסכום שווה ערך של זמן זה ייקח לסנתז פולימר 1 כמקובל. בנוסף, ספריית פולימר קומבינטורית יכולה להיות מפוברקת בגיאומטריות ריקות או חלבון טעונים כוללים סרטים או חלקיקים עם פיזורה של ספריית הפולימר בממס ומשקעים אל הלא ממס (עבור חלקיקים) או על ידי ייבוש ואקום (לסרטים). בעקבות טעינת חלבון fluorochrome מצומדות לספריות הפולימר, קינטיקה שחרור החלבון ניתן להעריך בתפוקה גבוהה באמצעות שיטת זיהוי מבוססת פלואורסצנטי (איורים 2 ו 3) כפי שתואר לעיל ^1. פלטפורמת קומבינטורית זו אומתה בשיטות קונבנציונליות ² וסרט polyanhydride וספריות nanoparticle התאפיינו עם ברעילות סלולרית מבחנה, ציטוקינים ייצור, משטח סמן ביטוי, הדבקה, הפצה ובידול, ובbiodistribution וmucoadhesion ^1-11 vivo. השיטה פותחה קומבינטורית להלן מאפשרת סינתזת תפוקה גבוהה פולימר וייצור של חלבון nanoparticle הטעון וספריות סרטים, שיכול, בתורו, להיות מוקרן במבחנת in vivo לאופטימיזציה של ביצועים ביולוגיים.

Protocol

1. סינתזה קומבינטורית פולימר הספרייה (משתנה בכימיה של פולימרים) - ראה איור 1 להגדרת רובוטית

1. ממס מונומר אחד ב( הריכוז = 25 מ"ג / מ"ל) הממס המתאים ולטעון בכל לתוך מזרק גז הדוק 10cc.
2. חבר את צינורות הממס עמיד לפתות נעילת נימים לסוף כל מזרק.
3. הנח את המזרקים על משאבות המזרק (משאבות מזרק לתכנות חדשות Era) ולנעול למקומו.
4. הגדר את המפעילים ליניארי (Zaber) למצב ההתחלתי.

Discussion

ידע של תנאי הסינתזה הדרושות ואת טמפרטורות מעבר הזכוכית (T _g ים) של הפולימרים המסונתזים חיוני לייצור ספרייה. אם T _g שלהם מתחת לטמפרטורת חדר, צעד ייצור nanoparticle ייתכן שיצטרך להתבצע בסביבה מבוקרת טמפרטורה מתחת T _g של הפולימרים. בנוסף, זהירות יש לנקוט על מנת להבטיח שכל הציוד שבא במגע עם טמפרטורות גבוהות והממסים חייב להיות בכושר כדי להתמודד עם תנאים אלה. כמה מהפרמטרים של פרוטוקול זה יכול להיות מותאם (כלומר, טמפרטורה, ואקום, זמני דגירה, ממסי.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
שם	חברה	מספר קטלוגים
שלב ממונע XYZ: 3x T-LSM050A, נסיעות 50 מ"מ בציר	טכנולוגיות Zaber	T-XYZ-LSM050A-KT04
משאבת מזרק יחידה NE-1000	מערכות משאבת עידן חדשות	NE-1000
פיירקס * Vista * צינורות תרבות מוקדיות שימוש חוזרים זכוכית	קורנינג	07-250-125
cuvettes זכוכית	אסטרטגיות מדעיות	G102
LabVIEW	מכשירים הלאומיים	776671-35
מזרקי SGE גז הדוקים, luer Loc	סיגמה אולדריץ	509507
U96 DeepWell צלחות 1.3 מ"ל ו2.0 מ"ל	Thermo Scientific: Nunc	278743
גם מחצלות כובע	Thermo Scientific: Nunc	276000
טיפון 9400	GE Healthcare	63-0055-79
Whatman כיתת 50 מעגלים 90 מ"מ	Whatman	1450-090