הערכת Vivo לשעבר של התכווצות, ועיפנות Alternans בשרירי שלד מבודדים

סיכום

אנו מתארים שיטה ישירה למדידת כוח שרירים, כוח שרירים, התכווצות וקינטיקה עיפנות של שרירי שלד מבודדים ב במבחנה מערכת באמצעות גירוי תחום. מידע רב ערך על Ca ^{2 +} מאפייני טיפול ומכונה התכווצות של השריר ניתן להשיג באמצעות פרוטוקולים שונים המגרים את הדמיון.

תקציר

מתואר כאן היא שיטה למדידת התכווצות של שרירי שלד מבודדים. פרמטרים כגון כוח שריר, כוח השריר, קינטיקה התכווצות, עיפנות, והתאוששות לאחר עייפות ניתן להשיג להעריך היבטים ספציפיים של צימוד עירור הכיווץ (ECC) תהליך כגון רגישות, מכונה התכווצות וCa ^{2 +} יכולת טיפול. שיטה זו מסירה את אספקת דם והעצבים ומתמקדת בשרירי השלד המבודדים עצמו. אנו משתמשים באופן שגרתי בשיטה זו כדי לזהות מרכיבים גנטיים המשנים את נכס ההתכווצות של שריר השלד למרות ויסות Ca ^{2 +} מסלולי איתות. כאן, אנו מתארים פנוטיפ זיהה לאחרונה שלד שריר, כלומר, alternans מכונאי, כדוגמה למידע המגוון ועשיר שניתן להשיג באמצעות בדיקה בהתכווצות שרירי מבחנה. שילוב של assay זה עם מבחנים בודדים סלולריים, גישות גנטיות וbiochemiמבחני stry יכולים לספק תובנה חשובות למנגנונים של ECC בשרירי שלד.

מבוא

שרירי שלד לצרף לעצמות השלד וליצור כוחות התכווצות תחת השליטה של ​​מערכת העצבים המרכזית. צימוד עירור-התכווצות (ECC) מתייחס לתהליך של המרת גירוי חשמלי לתגובה מכאנית. Ca ^{2 +} איתות היא מרכיב חיוני בתפקוד כויץ בשרירי שלד. יעיל Ca ^{2 +} גיוס מreticulum sarcoplasmic (SR) הוא מרכיב חשוב לECC בתאי שריר ^{1, 2,} ושינויים בCa ^{2 +} איתות התאי בבסיס תפקוד כויץ המקביל במספר מחל שרירים ^3-5. הערכה נכונה של התכווצות שרירים היא חיונית ומחמיא לCa ^{2 +} הדמיה ומבחנים אחרים כדי להשיג תובנה לתפקוד שרירי שלד, ולא רק ברמת כויץ, ....

פרוטוקול

הרכב פתרון:

2.5 מ"מ Ca ^{2 +} פתרון Tyrode: 140 המ"מ NaCl, 5 המ"מ KCl, 10 HEPES מ"מ, 2.5 מ"מ CaCl _2, 2 מ"מ MgCl ₂ וגלוקוז 10 מ"מימ

0 מ"מ Ca ^{2 +} פתרון Tyrode: 140 המ"מ NaCl, 5 המ"מ KCl, 10 HEPES מ"מ, 2 המ"מ MgCl _2, חומצת אתילן גליקול 0.1 מ"מ tetraacetic (EGTA) וגלוקוז 10 מ"מימ

הערה: פתרון רחצה צריך להיות רווי עם 100% O ₂ אם משתמש בפתרון לעיל, אך עם 95% O ₂....

דיון

המדידה של כוח ועיפנות כויץ חשובה להערכה הכוללת של תפקוד שרירי שלד. המטרה העיקרית של בדיקה זו היא לזהות שינויים בכוח השרירים ומאפיינים מעייפים תחת מצבים פתולוגיים מסוימים, כגון sarcopenia ועייפות שרירים, ולבדוק את ההשפעה של תרופות / ריאגנטים על התכווצות שרירים. מאז כוח השריר קשור קשר הדוק עם Ca ^{2 +} שחרור התאי, תאית Ca ^{2 +} כניסה והדיבור בין שני אלה, אנחנו יכולים גם לאסוף מידע על Ca ^{2 +} מעמד איתות בשרירי שלד באמצעות שיטה זו. כאן אנו הראינו פנוטיפ ייחו.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
שם המגיב	חברה	מספר קטלוגים	תגובות (אופציונלי)
2-APB	Tocris	1224	חוסם של מספר Ca 2 + ערוצי כניסה כולל SOC וTRP וכו '
SKF96365	סיגמא	SKF-96365	חוסם של מספר Ca 2 + ערוצי כניסה כולל SOC וקולט בתיווך Ca 2 + כניסה וכו '
BTP-2	Millipore	203890-5mg	חוסם SOC יחסית ספציפי
רו"ח	סיגמא	C1530	חוסם SERCA הפיך
קפאין	סיגמא	C0750	אגוניסט RyR פעולה המהיר
מערכת מיקלוש רדנוטי כבר ארבע יחידת רקמות איברי אמבטיה	מיקלוש רדנוטי כבר	159920
תמיכת רקמות שילוב / אלקטרודה מגרה	מיקלוש רדנוטי כבר	160151	אנכי זגזג סוג עם תמיכת רקמות
Quad הגשר Amp	ADInstruments	FE224
PowerLab/400	ADInstruments		מוצר זה אינו זמין עוד. בחר גרסה אחרת של מערכת איסוף הנתונים.
מתמר כוח (5 מ"ג - 25 ז)	ADInstruments	MLT0201/RAD
תרשים v4.02	ADInstruments		LabChart 7.3 היא הגרסה האחרונה של תוכנת תרשים.
S8800 כפול Pulse דיגיטלי ממריץ	טכנולוגיות GRASS		מוצר זה אינו זמין עוד. S88X כפול פלט כיכר דופק הגירוי הוא גירוי חדש יותר.
יחידת בידוד שנאי RF	טכנולוגיות GRASS	דגם SIU5