הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מערכת מוליד-נגזר Oligodendrocyte תרבות ממוח העוברי של אדם

14.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/4274

⸱

20 בדצמבר 2012

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Molecular Medicine and Neuroscience, National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health, 2Laboratory of Neurophysiology, National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health

במאמר זה

סיכום

ראשוני, תאים אנושיים עובריים מופקים ממוח, multipotential progenitor להתרבות במבחנה תוך שמירה על היכולת להתמיין לתאי עצב והאסטרוציטים. עבודה זו מראה כי אבות עצביים יכולים להיגרם להבחין דרך שלבים שונים של שושלת oligodendrocytic ידי מיזוג עם גורמי גדילה נבחרים.

תקציר

בידול של אבות עצביים אדם לסוגי תאים עצביים וגליה מציע מודל ללמוד והשווה תקנה מולקולרית של התפתחות משפחה של תאים עצבית. בהרחבה במבחנה של אבות עצביים מרקמת מערכת עצבים המרכזיים של עובר כבר מאופיין היטב. למרות זיהוי והבידוד של אבות גליה מחומר אנושי בוגרים תת קורטיקלי לבן ופיתוח של תנאי תרבות שונות לבידול ישיר של אבות העובריים עצביים לתוך oligodendrocytes ייצור המיאלין, רכישת oligodendrocytes אדם מספיק לניסויים במבחנה נותר קשה. בידול של galactocerebroside + (GalC) וO4 + מבשר oligodendrocyte או תאי אב (OPC) מתאים מבשרים עצביים כבר דיווח על שימוש במוח עוברי שליש שני. עם זאת, התאים האלה אינם מתרבים בהיעדר תאי תמיכה כולל האסטרוציטים ונוירונים, והולכים לאיבוד במהירות לאורך הזמן בתרבות. הצורך נותר למערכת כדי לייצר תרבות תאים של השושלת המתאימה לניסויים במבחנת oligodendrocyte.

תרבות של oligodendrocytes האנושי הראשוני יכולה, למשל, להיות מודל שימושי ללמוד פתוגנזה של חומרים מזהמים כמו neurotropic polyomavirus האנושי, JCV, שin vivo מדביק תאים אלה. תאים בתרבית אלה גם יכולים לספק מודלים של מחל demyelinating אחרות של מערכת העצבים המרכזית (CNS). ראשוני, עוברי של אדם שמופק ממוח, ותאים עצביים multipotential להתרבות במבחנה, תוך שמירה על היכולת להתמיין לתאי עצב (נוירונים מוליד-derived, PDN) והאסטרוציטים (האסטרוציטים מוליד-derived, מחשבי כף יד) מחקר זה מראה כי אבות עצביים יכולים להיגרם להבדיל דרך כל שלבי התפתחות השושלת oligodendrocytic (oligodendrocytes מוליד-derived, PDO). אנחנו בתאים עצביים התרבות בתקשורת DMEM-F12 סרום נטול supplemented עם גורם טסיות נגזר גידול (PDGF-AA) גורם בסיסי גדילה (bFGF), סוניק קיפוד (שש), גורם neurotrophic 3 (NT-3), N-2 וtriiodothyronine (T3). את התאים בתרבית הם passaged בתאים 2.5e6 לצלוחיות 75cm בערך כל שבעה ימים. שימוש בתנאים אלה, רוב התאים בתרבית לשמור מורפולוגיה המאופיינת במספר תהליכים וסמנים מפורשים של תאים טרום oligodendrocyte, כגון A2B5 ו-O-4. כאשר אנו מסירים את גורמי הגדילה 4 (GF) (bFGF, PDGF-AA, ששש, NT-3) ולהוסיף תקשורת ממוזגת מPDN, התאים להתחיל לרכוש יותר תהליכים וסמנים ספציפיים מפורשים של בידול oligodendrocyte, כגון GalC ומיאלין חלבון בסיסי (MBP). בצענו אפיון הפנוטיפי באמצעות cytometry זרימה הססגונית לזהות סמנים ייחודיים של oligodendrocyte.

פרוטוקול

הערה: לculturing השגרתי של אב עצבי ותאי שושלת oligodendrocytic, הדגירה מתבצעת על 37 מעלות צלזיוס ב5% 2 CO humidified אווירה. כל 2 ימים, הבינוני מוחלף בעזרת 50 עד 100% ממדיום טרי אם התרבות היא confluent 40-70%. בזמן confluency הקרוב, התרבויות הם passaged ב2-2.5e6/T75 בקבוק בדרך כלל על לוח זמנים שבועי.

1. הכנת הבקבוק המצופה

  1. כדי להכין צלוחיות מצופות לדלל 5 מ"ג של פולי-D-ליזין (PDL) ב100 מיליליטר מי deionized (DI-מים), ואז מעייל T75 צלוחיות עם 50 מיקרוגרם / מ"ל ​​של PDL בטמפרטורת חדר (RT) בחושך. לאחר ½ 1 שעות, לשאוב PDL ולשטוף את צלוחיות פעם אחת עם DI-מים. תן לצלוחיות היבשות לפני זריעת התאים (טבלה 1).

2. החל התמיינות של תאי אב עצביים לתוך oligodendrocytes derived-מולידו (PDO)

הפרוטוקול הואolate בתאים CNS אדם מתואר בפרסום קודם וזה לא חלק מ1 בפרוטוקול זה. תאי אב במערכת עצבים מרכזיים אדם בודדו מtelencephalon של מוח 8-שבוע הריון של עובר, המתקבל בהתאם להנחיות NIH.

  1. תגדל אוכלוסיית multipotential של תאי אב עצביים בצלוחיות מצופות בPDL בינוני neurobasal בתוספת 25 ng / ml של bFGF ו20 ng / מיליליטר גורם צמיחת אפידרמיס (EGF) (איור 1 א). אל תשתמש בם אם גבוה יותר מקטע 11 (P11).
  2. התחל כדי לבדל את תאי אב העצביים כאשר התרבות היא כ 70% confluent.
  3. הפוך בינוני oligodendrocyte בידול מלא באמצעות מדיום סרום ללא DMEM / קותלי חזיר של F12 01:01 בתוספת סרום שור אלבומין, L-גלוטמין, גנטמיצין, רכיבי N2, T3, ששש, NT-3, bFGF, וPDGF-AA (טבלה 1) . מדיום זה יוגדר כבינוני Oligo עם גורמי גדילה (Oligo הבינוני + GF).
  4. הסר Progenתקשורת itor מהצלוחיות, לשטוף תאים פעם אחת עם פוספט נאגר מלוח (PBS), לאחר מכן להוסיף Oligo בינוני + GF (פרטים מתוארים ב2.3) כדי להתחיל בידול oligodendrocyte. רק תאים המחויבים לשושלת oligodendrocytic יגדלו (1B איור). תרבות התאים במדיום הזה במשך 3 שבועות.
  5. בכל שבוע, כאשר התאים נמצאים בנקודת מפגש 90-95%, מעברם באמצעות טריפסין (0.05%)-EDTA (0.1%) (4 מ"ל לבקבוק T75). להעביר את כל בינונית מהתאים שpassaged לתוך צינור חרוטי 50 מ"ל; בינוני מזגן זה ישמש כדי להרוות טריפסין. ודא שלא לייבש את התאים. ואז להוסיף טריפסין.
  6. דגירת תאים בטריפסין למשך 5 דקות בRT, הכה בעדינות על הבקבוק מספר פעמים כדי לעזור ניתוק תא.
  7. להרוות את טריפסין על ידי הוספה של 4-5 מיליליטר מדיום מותנה לבקבוק עם תאים המשפחתיים.
  8. להעביר את המדיום ואת התאים לאותו הצינור 50 מיליליטר חרוטים. צנטריפוגה הבינונית והתאים של 1,200 סל"ד (~300 XG) למשך 5 דקות בRT.
  9. לשאוב supernatant, resuspend תא הגלול, בעדינות להטות את הצינור, ולאחר מכן להוסיף את המקור Oligo טרי + GF. עדינות פיפטה הבינונית ותאים למעלה ולמטה כדי להפוך את השעית תא אחידה.
  10. ספירת התאים, ו2.5e6 העברה לכל T75 בקבוק חדש PDL מצופה.

3. שלב סופי בבידול של oligodendrocytes

  1. לאחר 3 שבועות של התרבות בOligo בינוני + GF, כאשר התאים נמצאים בנקודת מפגש 70-80%, להתחיל את התהליך הסופי של התמיינות (התרשים 1C).
  2. הכן בינוני באותה הדרך כמו Oligo הבינוני + GF אך מבלי להוסיף 4 GF: ששישה, NT-3, bFGF וPDGF-AA. המדיום הזה ללא 4 GF יוגדר כבינוני Oligo - GF.
  3. לשאוב את מדיום Oligo + GF מהבקבוק, ולשטוף פעם עם PBS ולאחר מכן להוסיף בנפח כולל של 16 מ"ל של מדיום, ש¾ (12 מ"ל) הוא Oligo בינוני - GF ו¼ (4 מ"ל) הוא מדיום מותנה PDN, עבור 6-10 ימים). השימוש במדיום מותנה מPDN אינו חיוני לתהליך ההתמיינות או להישרדות של התאים. אנחנו למעשה ציינו כי קשר היחיד ישיר של PDO עם תאי PDN בניסויי שיתוף התרבות הייתה השפעה על משך הישרדות PDO. זמן ההישרדות בOligo בינוני - GF עשוי להתמשך, לשבועות או שלושה, אם תאי PDO הם שיתוף תרבית עם תאים-PDN. הפרוטוקול להבדיל ובתאים עצביים אדם לPDN מתואר בפרסום קודם וזה לא חלק מ1 בפרוטוקול זה. נסיגה גורם גדילה מהתוצאות הבינוניות התרבות בתרבות מובחנת בהדרגת תאים עם תהליכים מרובים (1D איור).

4. Assay הזרימה cytometry

בדיקת זרימת cytometry משווה את הרכישה של סמני oligodendrocyte במהלך תהליך ההתמיינות במערכת יחסים עם אלו של אוכלוסיית הוריהם.

  1. השתמש פרו עצביgenitors כשליטה. תאי זרע PDO ב2.5x10 6 תאים בשתי T75 צלוחיות מצופות ב- D-ליזין פולי בOligo הבינוני + GF.
  2. שבוע לאחר מכן, החלף בינוני עם בינוני Oligo טרי + GF בצלוחיות כתרבות שליטה לכדאיויות תא, בעוד צלוחיות אחרות היו Oligo בינוני - GF.
  3. כדי לנתק את תאי PDO בשני אמצעי התקשורת להשתמש 20 U / מ"ל ​​של פפאין וטריפסין לא. הסיבה לכך היא פפאין יש השפעה עדינה על התאים במהלך דיסוציאציה שימור המורפולוגיה התאית.
  4. הוסף 5 מ"ל של תמיסת המלח המאוזנת של ארל (EBSS) לבקבוקון פפאין. הנח את הבקבוקון על 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות או עד שהוא נמס לגמרי פפאין והפתרון נראה ברור. זהו פתרון פפאין נהג לנתק את התאים.
  5. הוסף 0.5 מ"ל של EBSS לDeoxyribonuclease בקבוקוני (DNase) (טבלה 1). מערבב בעדינות. הוסף 0.25 מ"ל של פתרון זה לבקבוקון של פפאין המומס. התכשיר מכיל ריכוז סופי של כ 20 U / ml פפאין ו0.005% DNase.
  6. פתרון המקום פפאין (כמתואר לעיל) על תאים ולדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך 15-30 דקות; לפקח על הניתוק של התאים באמצעות מיקרוסקופ. עצור את התגובה עם 5 מ"ל של מדיום עם או בלי GF וצנטריפוגה בסל"ד 1200 עבור 7 דקות.
  7. העברת כדורים סלולריים משתי הצלוחיות לשני צינורות פוליפרופילן 5 מ"ל שונים ורחץ אותם במדיום הפיזיולוגי הנורמלי (NPM: 145 המ"מ NaCl, 5 המ"מ KCl, 1.8 mM CaCl 2, 10 מ"מ וHepes הגלוקוז mM 10) בתוספת 1 ​​מ"ג / מ"ל שור אלבומין (NPM + BSA).
  8. לבצע משטח immunostaining ב 4 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות באמצעות נוגדנים ספציפיים עיקריים וכראוי לטיטרציה A2B5, O4, GalC (טבלה 2).
  9. שטפו תאים עם NPM + BSA ב 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות ודגירתם עם נוגדנים ספציפיים משניים ב4 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות (טבלה 2).
  10. להכתים אנטיגנים תוך תאיים כולל nestin, גליה fibrillary חומץ חלבון (GFAP), מעמד שלישי ויהיהת"א;-טובולין, וחלבון המיאלין בסיסי (MBP) (טבלה 2), לתקן את התאים בparaformaldehyde 2% (PFA) במשך 20 דקות בRT וpermeabilize עם אתנול 70% קר במשך 15 דקות ב -20 ° C.
  11. שטוף תאים עם 1x PBS ו דגירה עם נוגדנים ספציפיים משניים (טבלה 2).
  12. כדי להבחין בין תאים שלמים ופסולת subcellular במהלך ניתוח cytometry זרימה, תאים עם כתם 4,6-diamidino-2-phenyllindole, dihydrochloride (DAPI) (חיים טכנולוגיים, גרנד איילנד, ניו יורק).
  13. באופטימיזציה של הפרוטוקול לעיל, בצעו את כל ניסויי הבקרה המתאימות על מנת לאשר את הספציפיות של כל immunoreagent. בקצרה, לנוגדנים שכותרתו ישירות, השליטה השלילית המתאימה הייתה נוגדן ישירות מצומדת של אותה כיתת אימונוגלובולינים אלוטיפ (או תת) והצמוד fluorochrome כנוגדן ראשוני (כלומר, שליטת אלוטיפ). לimmunostaining העקיף של נוגדנים עיקריים, השליטה השלילית w המתאיםכנוגדן מצומד לfluorochrome עניין שממוקד ברמת אימונוגלובולינים (או תת) של המארח שבו הנוגדן הראשוני נוצר דווקא משני. כאשר נוגדנים עיקריים ממארחים מרובים (עכבר, ארנבת, עוף) היו בשימוש יחד, השתמש בנוגדן המשני מיקוד הנוגדן הראשוני של כל מארח וכל נוגדן משני השתמש היה לחצות adsorbed-בדרך כלל נגד נוגדנים מהצבאות האחרים כדי למזער צולב תארח immunoreactivity. הפקדים החיוביים כללו immunostaining ישיר או עקיף של הכנות סלולריות הידועות לבטא את האנטיגנים של עניין או באמצעות immunoreactions ישיר או עקיף עם נוגדנים הספציפיים לאנטיגנים אלה העיקריים. שיטות אופטימיזציה הנ"ל בוצעו פעם אחת עבור כל סוג של immunostaining ניסויים. immunoreactions הבקרה עולה כי אין immunoreactivity הצולב epitope משמעותי בין נוגדנים ראשוניים ומשניים. cytometry הזרימה בוצע באופן אחידתאים מושעים כותרתו fluorescently באמצעות FACVantage SE תא סדרן (BD Biosciences, סן חוזה, קליפורניה) מצויד בשלושת לייזרים, המספקים אורכי גל עירור מכוון ל488 ננומטר, 647 ננומטר, וUV רחב (351-364 ננומטר) (איור 2) .

5. Assay immunofluorescence

הערה: לניסויי immunofluorescence, PDO מצופים בOligo הבינוני + GF או Oligo בינוני - GF ב2.5e5 ב 6 גם צלחות מצופות PDL. התאים הם קבועים ב2% PFA בנקודתי זמן שונים לאחר נסיגה של גורמי גדילה. נוגדן כתם מבוצע על 6 גם צלחות פלסטיק במקום זכוכית coverslips.

  1. הסר את המדיה ולהוסיף 2% PFA. דגירה במשך 10 דקות ב RT. השלך PFA. שטוף תאים 3 פעמים עם PBS, 5 דקות בכל פעם. יש להיזהר שלא לייבש את התאים.
  2. Permeabilize תאים לסמנים תאיים באמצעות 0.25% פתרון טריטון ב PBS עבור 10 דקות ב RT.
  3. כדי למנוע, תאים לחסום מחייבים שאינם ספציפיים ואו 10 דקות עם HHG (1 חיץ mM HEPES, סרום סוס 2%, וסרום עיזים 10% בתמיסת המלח המאוזנת "הנקס). דלל נוגדנים ספציפיים עיקריים (טבלה 2) לריכוז שנקבע מראש בHHG. הנח נוגדנים מדוללים על גבי תאים. דגירת 1 שעות בRT בייקר או ב 4 ° C למשך הלילה.
  4. שטוף תאים 3 פעמים עם PBS, למשך 5 דקות בכל פעם. דלל נוגדנים משניים מתאימים (טבלה 2) בשילוב עם fluorochrome לריכוז שנקבע מראש בHHG. הנח את התערובת של נוגדנים משניים מדוללים על גבי תאים. דגירת 1 שעות בRT על שייקר בחושך.
  5. שטוף תאים 3 פעמים עם PBS, למשך 5 דקות בכל פעם.
  6. כדי להימנע מphotobleaching להוסיף 10 μl של להאריך זהב עם DAPI לתאים ומקום coverslip זכוכית על ראשם. דמיינו תאים שכותרתו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי Axiovert 200 מ'(Zeiss, Thornwood, ניו יורק) (איור 3).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

חשוב מאוד להתחיל את תהליך הבידול מתרבות 70% -80% confluent העצבית מוליד תא (איור 1 א). תאים רבים יגוועו לאחר שינוי התרבות הבינונית ממוליד עד בינוני Oligo שכן הוא כולל גורמי גדילה ספציפיות. זה מצביע על כך שהצמיחה של תאי אב עצביים אינה מחויבים לפנוטיפ oligodendrocytic לא להיות נתמכת על ידי המדיום החדש (1B איור). הדגירה בOligo בינוני + GF במשך שבוע אחד הביאה תרבות ביניים מציגה, מורפולוגיה דו קוטבית צרה (האיור 1B). התאים נשמרים בOligo...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מתאר כיצד להפיק oligodendrocytes העוברי מתאי אב עצביים עיקריים אדם ולאפיין פנוטיפ שלהם הוא באמצעות cytometry זרימה ומכתימה immunofluorescence. הגידול וההתרחבות של אבות עצביים ממערכת עצבים מרכזיים בעובר תוארה 1-4 טובים מאוד. עם זאת, קבלת oligodendrocytes אדם מספיק לניסויים במבחנה עדיין קשה, למרות שזה אפשרי לזהות ולבודד מבשרי גליה מחומר לבן אדם בוגר 5-13. היו ניסיונות שונים בהתפתחות של תנאי תרבות שונות לבידול ישיר של אבות עצביים עובריים ליי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי תכנית המחקר העירונית, במכונים הלאומיים לבריאות, NINDS. המחברים מבקשים להודות לכל אנשי המעבדה לרפואה המולקולרית ומדעי המוח, ריק דרייפוס עזר עם מיקרוסקופיה וניפוי ג פמלה לסיוע בעריכה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
שם המגיב חברה מספר קטלוגים ריכוז סופי
DME / קותלי חזיר של F12 01:01 אומגת מדען DM-251 1X
שור אלבומין סיגמא A9418 1%
גנטמיצין איכות ביולוגית 120-098-031 50 מיקרוגרם / מ"ל
L-גלוטמין איכות ביולוגית 118-084-061 2 מ"מ
T3 סיגמא T2877 3 ננומטר
רכיבי N2 Gibco BRL 17502 1:100
NT-3 PeproTech Inc 450-03 2 ng / ml
ששישה מערכת מו"פ 1314-SH/CF 2 ng / ml
bFGF PeproTech Inc 100-18B 20 ng / ml
PDGF-AA PeproTech Inc 100-13A 10 ng / ml
PDL סיגמא P6407 50 ק"ג / מ '
PFA מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים 15712 2%
טריפסין איכות ביולוגית 118-087-721
פפאין וורטינגטון LK003178 20 U / ml
בקבוקוני DNase וורטינגטון LK003172 0.005%
EBSS וורטינגטון LK003188
להאריך זהב
עםDAPI 		Invitrogen P36931

טבלת 1. ריאגנטים.

עיקריים שרירי בטן (כולם במיקרוגרם 1 / מ"ל) אלוטיפ מינים מקור Abs המשני
זרימת cytometry
A2B5-ביוטין עכבר IgM מתנת ג'נילסון Streptavidin פטר, Invitrogen, CA
O4FITC עכבר IgM מתנה מג' נילסון
A2B5 עכבר IgM Millipore, MA gαm IgM-FITC, Invitrogen, CA
O4 עכבר IgM Millipore, MA gαm IgM-FITC, Invitrogen, CA
GalC עכבר 3 IgG Millipore, MA gαm IgG 3-PE, הדרום יוטק, אל על
MBP עוף IgY Millipore, MA dαck IgY-AMCA, ג'קסון Immu., הרשות הפלסטינית
Nestin עכבר 1 IgG Messam et al. 2000 28 gαm IgG 1-PECy5, Invitrogen, CA
GFAP ארנב IgG Millipore, MA gαrb IgG-PE, ג'קסון Immu, הרשות הפלסטינית
טובולין βIII עכבר IgG 2 Covance, קליפורניה gαm IgG 2-הפטר, Invitrogen, CA
Immunocytochemistry
טובולין βIII
(1:1,500) 		עכבר IgG 2a Covance, קליפורניה gαm IgG 2a-FITC, Invitrogen, CA
(1:1,000)
GFAP
(1:1,000) 		ארנב IgG Millipore, MA gαrb IgG-FITC, ג'קסון Immu, הרשות הפלסטינית
(1:500)
MBP
(1:50) 		עוף IgY Millipore, MA dαck IgY-FITC, ג'קסון Immu, הרשות הפלסטינית
(1:100)
O4
(1:100) 		עכבר IgM Millipore, MA gαm IgM-AF546, Invitrogen, CA
(1: 100)
GalC
(1:10) 		ארנב IgG Millipore, MA gαm IgM-AF750, Invitrogen, CA
(1:100)

. טבלה 2 נוגדנים (ABS) המשמשים לזרימה cytometry ומבחני immunocytochemistry conjugates נוגדנים: PE, phycoerythrin; פטר, phycoerythrin טקסס אדומה; AMCA,-methyl-coumarin-יצטט אמין; סי, cyanine; FITC, isothiocyanate fluorescein IG:. אימונוגלובולינים. . AF: Alexa פלואוריד; gαm: עיזים אנטי עכבר; gαrb: עיזים נגד ארנב; dαck: חמור אנטי עוף.

מקורות

  1. Messam, C. A., Hou, J., Gronostajski, R. M., Major, E. O. Lineage pathway of human brain progenitor cells identified by JC virus susceptibility. Ann. Neurol. 53, 636-646 (2003).
  2. Vescovi, A. L., Reynolds, B. A., Fraser, D. D., Weiss, S. bFGF regulates the proliferative fate of unipotent (neuronal) and bipotent (neuronal/astroglial) EGF-generated CNS progenitor cells. Neuron. 11, 951-966 (1993).
  3. Johe, K. K., Hazel, T. G., Muller, T., Dugich-Djordjevic, M. M., McKay, R. D. Single factors direct the differentiation of stem cells from the fetal and adult central nervous system. Genes Dev. 10, 3129-3140 (1996).
  4. McKay, R. Stem cells in the central nervous system. Science. 276, 66-71 (1997).
  5. Belachew, S., et al. Postnatal NG2 proteoglycan-expressing progenitor cells are intrinsically multipotent and generate functional neurons. J. Cell Biol. 161, 169-186 (2003).
  6. Almazan, G., McKay, R. An oligodendrocyte precursor cell line from rat optic nerve. Brain Res. 579, 234-245 (1992).
  7. Filipovic, R., Zecevic, N. Neuroprotective role of minocycline in co-cultures of human fetal neurons and microglia. Exp. Neurol. 211, 41-51 (2008).
  8. Goldman, S. A., Natesan, S. A niche-defying feat: induced oligoneogenesis in the adult dentate gyrus. Cell Stem Cell. 3, 125-126 (2008).
  9. Nunes, M. C., et al. Identification and isolation of multipotential neural progenitor cells from the subcortical white matter of the adult human brain. Nat. Med. 9, 439-447 (2003).
  10. Lyssiotis, C. A., et al. Inhibition of histone deacetylase activity induces developmental plasticity in oligodendrocyte precursor cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 14982-14987 (2007).
  11. Sim, F. J., Goldman, S. A. White matter progenitor cells reside in an oligodendrogenic niche. Ernst Schering Res. Found Workshop. , 61-81 (2005).
  12. Raff, M. C., Miller, R. H., Noble, M. A glial progenitor cell that develops in vitro into an astrocyte or an oligodendrocyte depending on culture medium. Nature. 303, 390-396 (1983).
  13. Windrem, M. S., et al. Progenitor cells derived from the adult human subcortical white matter disperse and differentiate as oligodendrocytes within demyelinated lesions of the rat brain. J. Neurosci. Res. 69, 966-975 (2002).
  14. Chen, Y., et al. Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protoc. 2, 1044-1051 (2007).
  15. Armstrong, R. C. Isolation and characterization of immature oligodendrocyte lineage cells. Methods. 16, 282-292 (1998).
  16. Hu, B. Y., Du, Z. W., Li, X. J., Ayala, M., Zhang, S. C. Human oligodendrocytes from embryonic stem cells: conserved SHH signaling networks and divergent FGF effects. Development. 136, 1443-1452 (2009).
  17. Gard, A. L., Williams, W. C. 2nd, Burrell, M. R. Oligodendroblasts distinguished from O-2A glial progenitors by surface phenotype (O4+GalC-) and response to cytokines using signal transducer LIFR beta. Dev. Biol. 167, 596-608 (1995).
  18. Hu, B. Y., Du, Z. W., Zhang, S. C. Differentiation of human oligodendrocytes from pluripotent stem cells. Nat. Protoc. 4, 1614-1622 (2009).
  19. Reubinoff, B. E., et al. Neural progenitors from human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 19, 1134-1140 (2001).
  20. Pfeiffer, S. E., Warrington, A. E., Bansal, R. The oligodendrocyte and its many cellular processes. Trends Cell Biol. 3, 191-197 (1993).
  21. Zhang, S. C., Ge, B., Duncan, I. D. Tracing human oligodendroglial development in vitro. J. Neurosci. Res. 59, 421-429 (2000).
  22. Bradl, M., Lassmann, H. Oligodendrocytes: biology and pathology. Acta Neuropathol. 119, 37-53 (2010).
  23. Chong, S. Y., Chan, J. R. Tapping into the glial reservoir: cells committed to remaining uncommitted. J. Cell Biol. 188, 305-312 (2010).
  24. Jakovcevski, I., Filipovic, R., Mo, Z., Rakic, S., Zecevic, N. Oligodendrocyte development and the onset of myelination in the human fetal brain. Front Neuroanat. 3, 5(2009).
  25. Rao, R. C., Boyd, J., Padmanabhan, R., Chenoweth, J. G., McKay, R. D. Efficient serum-free derivation of oligodendrocyte precursors from neural stem cell-enriched cultures. Stem Cells. 27, 116-125 (2009).
  26. D'Intino, G., et al. Triiodothyronine administration ameliorates the demyelination/remyelination ratio in a non-human primate model of multiple sclerosis by correcting tissue hypothyroidism. J. Neuroendocrinol. 23, 778-790 (2011).
  27. Cui, Q. L., et al. Human fetal oligodendrocyte progenitor cells from different gestational stages exhibit substantially different potential to myelinate. Stem Cells Dev. , (2012).
  28. Messam, C. A., Hou, J., Major, E. O. Coexpression of nestin in neural and glial cells in the developing human CNS defined by a human-specific anti-nestin antibody. Exp. Neurol. 161, 585-596 (2000).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

תאי אב עצבייםהתמיינות לאוליגודנדרוציטיםציטומטריית זרימהמיקרוסקופיה של אימונופלואורסצנציהנסיגה של גורמי גדילהסמני אוליגודנדרוציטיםתאי אב גליאלייםחלבון בסיסי של מיאלין
מערכת מוליד-נגזר Oligodendrocyte תרבות ממוח העוברי של אדם
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.