מאמר שיטה

תובלת pneumococcal אנוש ניסויית

DOI:

10.3791/50115

⸱

15 בפברואר 2013

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Respiratory Infection Group, Liverpool School of Tropical Medicine, 2Royal Liverpool and Broadgreen, University Hospital Trust, 3Comprehensive Local Research Network, 4NIHR Biomedical Research Centre in Microbial Diseases, Royal Liverpool and Broadgreen University Hospitals NHS Trust, 5Institute of Lung Health, Respiratory Biomedical Unit, University Hospitals of Leicester NHS Trust & University of Leicester, 6Department of Clinical Infection Microbiology & Immunology, Institute of Infection & Global Health, University of Liverpool

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מרכבת pneumococcal אנושית ניסויית מציעה מודל טבעי של קרון ומודל פוטנציאל לשימוש בפיתוח חיסון. טכניקה זו היא יקרה עדיין מורכבת וכרוכה בסיכון קליני על ידי החדרת הפתוגן לאדם. פתחנו פרוטוקול מפורט.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מרכבת pneumococcal אנושית ניסויית (EHPC) היא חשובה מבחינה מדעית כי כרכרת אף ולוע של Streptococcus pneumoniae היא המקור העיקרי להעברת מחלה והתנאי המוקדם של מחלה פולשנית. מודל של מרכבה יאפשר קביעה מדויקת של הקורלציה של הגנה החיסונית, ההשפעה המחסנת של עגלה ואת ההשפעה של לחץ על מארח הפתוגן בנישת האף והלוע. יתר על כן, שיטות איתור עגלה שימושי במחקרים אפידמיולוגיים, כולל מחקרי חיסון, ניתן להשוות.

מטרה

אנו שואפים לפתח פלטפורמה שEHPC היא שיטה לשחזור בטוחה ושימושית שיכולים לשמש לחיסוני pneumococcal רומן מועמד למטה בחרו במניעת מרכבה כפונדקאית של חסינות מושרה חיסון. זה יפעל לבדיקה של חיסונים מועמדים ותיאורים של מנגנוני הגנה והחיסון EHPC מcarria1 ge. חיסונים המצומד כנגד זרם pneumococcus להגן על ילדים מפני מחלה פולשנית למרות חיסונים חדשים יש צורך דחוף כחיסון הנוכחי אינו מעניק הגנה אופטימלית נגד דלקת ריאות שאינן bacteraemic ויש כבר ראיות להחלפת סרוטיפ עם זנים שאינם חיסון 2-4.

שיטה

אנחנו מחסנים עם ס דלקת ריאות תלויה ב100 μl של תמיסת מלח. בטיחות היא גורם מרכזי בהתפתחותו של מודל EHPC ומושגת באמצעות הקרנת מתנדב נמרץ וניטור. ועדת בטיחות המורכבת של רופאים ומדענים שאינם תלויים מהמחקר מספקת משוב אובייקטיבי על בסיס שבועי.

בידוד החיידקים הוא סטנדרטי ודורש שלא מוצרים מן החי מחוסנים למתנדבים (מדיה מבוססת ירקות ומלוחים). המנות שנדרשות להתישבות (10 4 -10 5) נמוכים בהרבה than אלו המשמשים במודלים של בעלי חיים (10 7) 5. גילוי מרכבת pneumococcal מוגבר על ידי נפח גבוה (רצוי> 10 מ"ל) לשטוף אף שהוא יחסית ריר חופשי. פרוטוקול זה יעסוק בחלקים החשובים ביותר של הפרוטוקול בתורו. אלה (א) בחירה מתנדב, (ב) הכנת הבידוד pneumococcal, (ג) חיסון, (ד) ומעקב (ה) גילוי מרכבה.

תוצאות

הפרוטוקול הנוכחי שלנו כבר בטוח בלמעלה מ 100 מתנדב במגוון של מינונים באמצעות שני זני חיידקים שונים 6. מחקר החל מינון באמצעות ס דלקת הריאות 6B ו23F כיום נערכים כדי לקבוע את מינון החיסון האופטימלי להובלה 50%. שיעור 50% חזה בכרכרה יאפשר מודל EHPC יש רגישות גבוהה ליעילות חיסון עם מספרי לימוד קטנים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. התנדבות בחירה והקרנה

  1. מתנדבים בריאים מגויסים באמצעות מודעות וכרזות באתר האוניברסיטה לפי NHS המחקר והדרכת ועדת אתיקה.
  2. את הקריטריונים להכללת השתתפות הם:
    1. מבוגרים בגילים 18-60 שנים.
    2. מדבר אנגלית רהוטה, והוא מסוגל לתקשר בקלות על ידי שני טלפונים סלולריים והודעות טקסט.
  3. את קריטריוני הפסילה להשתתפות הם:
    1. קשר הדוק עם אנשים בסיכון (ילדים, מבוגרי immunosuppressed, בריאות קשישים, כרונית חולה).
    2. היסטוריה הנוכחית מעשנים או משמעותי מעישון (> 10 שנתי חפיסה).
    3. אסטמה או מחלה נשימתית אחרת.
    4. הריון.
    5. אלרגיה לפניצילין או אמוקסיצילין.
    6. מעורבות שוטפת בניסוי קליני נוסף, אלא אם כן תצפית או בשלב שאינו התערבותית.
    7. אין אפשרות לתת הסכמה מהדעת באופן מלא.
  4. ביקור סינון ראשוני, כשבוע לפני החיסון, כולל היסטוריה קלינית ממוקדת ובדיקה קלינית ממוקדת.
  5. אם חריגות מוכרות קודם לכן נמצאה, מתנדבים יהיה נכללו במחקר והחקירה המתאימה תהיה מסודרת דרך טיפול ראשוני.
  6. במהלך הסינון הראשוני לבקר ספירת דם מלאה מתקבלת כדי להבטיח שספירת התאים הלבנה נמצאת בטווח נורמלי לפני ביקור החיסון. שטיפת אף מבוצעת כדי לשלול נישאים pneumococcal טבעי (ראה 6.1).
  7. לפני החיסון, מתנדב מתחנכים על הסיכונים כרוכים בהשתתפות במחקר ומסופקים עם כרוז חירום מטופל, מדחום דיגיטלי, מספרי טלפון לשעת חירום וכמובן 3 ימים של אמוקסיצילין.

2. הכנת חיסון המניות

  1. הכנה של מניות החיסון צריך להיעשות בסביבה נקיה. את pipettes משמש רק צריך להשתמשד להכנת בידוד. כל הזכוכית וכלי פלסטיק צריכה להיות סטרילי. אנו ממליצים כי מניות חיסון תהיינה מוכנות בחדר ייעודי, באמצעות fumehood מסור וחממה.
  2. זני pneumococcal מחוסנים על גבי צלחת אגרה דם. צלחות מודגרת על 37 מעלות צלזיוס בלילה 2 CO 5%. היום לאחר את כל החיידקים הוא גרד מהצלחת אגרה דם ומחוסן למערכת שימור מניית חרוז. מניות חרוזים אלה משמשים להכנת מלאי חיסון. לבדוק את מלאי חרוזים לזיהום ואחידות מושבה לפני הכנת מלאי חיסון.
  3. כדי להכין את מניית החיסון לחסן את צלחת אגרה דם עם שני חרוזים ממניות חרוז סרוטיפ pneumococcal הרצויים, מזנק כדי לכסות את כל הצלחת. דגירת צלחות על 37 מעלות צלזיוס בלילה CO 2 5%. כל incubations הנוסף יהיה להשתמש באותם תנאים אלו. גם דגירת התקשורת במהלך הלילה כדי להבטיח סטריליות Vegitone.
  4. הספוגית למחרת בבוקרחצי מהצלחת, נזהר שלא להסיר כל אגר דם, ולהוסיף עד 12 מ"ל של מרק Vegitone מראש מחומם. חזור על שימוש במחצית השנייה של הצלחת. השאר את שני בקבוקונים 12 מ"ל ב 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות, או עד לשינוי בעכירות מתברר, מוקדם מבין שתיים.
  5. הוסף 12 מ"ל עד 40 מ"ל של מרק Vegitone מראש מחומם ומערבב היטב. חזור לבקבוקון 12 מ"ל האחר. זוהי נקודת זמן = 0. הסר 100 μl לקרוא צפיפות האופטית (OD) ב 600 ננומטר. להסיר 20 μl לכימות של חיידקים על ידי יחידת מושבה להרכיב (CFU) ספירה באמצעות וריאציה של השיטה של מיילס ומייסר (M & M) 7. דגירת שני הבקבוקונים.
    1. לM & M, לחלק צלחת אגרה דם לשישה חלקים. הוסף 180 μl של סטרילי PBS לשש בארות של צלחת גם 96 (U-תחתון). הוסף 20 μl של המרק לראש היטב ולערבב. סדרתי לדלל את דגימת השש פעמים 1:10 ולהשליך 20 μl מהבאר השישית. 3 10 טיפי μl מקום מן הבאר העליונה לחלקו הראשון שלצלחת אגר דם. חזור לחמש בארות האחרות. להבטיח את הצלחת יבשה לפני זה הוא הפוך ודגר.
    2. למחרת לספור את מספר המושבות מוצג בכל סעיף דילול ולהקליט. באמצעות שימוש בסעיף הדילול עם ספירה בין 30 ל 300, מחלק את מספר המושבות גלויות על ידי שלוש כדי להגיע לממוצע.
    3. הכפל את המספר הממוצע של מושבות על ידי גורם הדילול ולאחר מכן לחלק לפי 10 (כמות הירידה של 10 μl). זה נותן CFU / μl.
    4. תכפיל את המספר הזה ב -1000 כדי לקבל CFU / מ"ל.
  6. בצע 600 קריאות וכימות של חיידקי OD בשיטת M & M כל שעה עד השלב מוקדם אמצע היומן הוא הגיע, OD של 0.25.
  7. ברגע OD זו מגיעה, להוסיף גליצרול לעקר 10% לבקבוקון אחד ולהכין 1 aliquots מ"ל. aliquots בחנויות ב-80 ° C.
  8. למנייה מרוכזת יותר, סרכזת הבקבוקון השני ב3345 XG במשך 15 דקות ולהסיר את supernatant. Resuspend גלול ב 22.5 מ"ל של Vegitonבינוני דואר ולהוסיף גליצרול 10%. הכן 1 aliquots וחנויות מ"ל ב -80 ° C.
  9. השאר מניות ב-80 מעלות צלזיוס במשך לפחות 48 שעות לפני ההפשרה וכימות.
  10. לכמת את מלאי חיידקים קפוא בשיטת M & M. לבדוק שלושה צינורות מניות בנפרד כדי להבטיח שחזור. השתמש ערך המתקבל כדי לדלל את המניות לריכוז הבידוד הרצוי במלח, כמתואר להלן.
  11. לחיסון, כמות pneumococci בבידוד מחושבת לפני ואחרי החיסון. כימות זה של חיידקים על ידי שיטת M & M משמש כדי לקבוע את המספר הממוצע של pneumococci בבידוד המהווה את הזמן שנדרש כדי להשלים את כל ההליך.
    1. הכן בידוד, מוהל לריכוז הרצוי, ולבצע כימות בשיטת M & M עבור "חיסון מראש" הספירה.
    2. במתקן למחקר הקליני שלנו זה לוקח צוות 30 דקות כדי להשלים את הליך החיסון כולה. Pnמתלי eumococcal במלח ניתן בדרך כלל לראות ספירת ירד בפרק זמן זה. כדי להסביר את זה, אנחנו הנחנו לבידוד המדולל בטמפרטורת חדר למשך 30 דקות ולאחר מכן לבצע "שלאחר חיסון" כימות של החיידקים בשיטת M & M.
    3. קח הממוצע של לפני ואחרי כדי לקבוע את הריכוז המחוסן הסופי. התאם את הזמן "יושב" על פי הפרוטוקול הקליני שלך, אבל לשמור על מרווח זמן קצר ככל האפשר.
  12. כל המניות החדשות יש לשלוח למעבדת הפניה לאישור של טוהר מניות וזהות.

3. הכנת בידוד

  1. הכנת הבידוד צריכה להתחיל 30 דקות לפני מינוי החיסון מתנדב המתוכנן.
  2. קח את אחד צינורות המניות שבוצעו בעבר של ° C -80 המקפיא, להפשיר אותה ולסובב את הצינור בmicrocentrifuge על 17,000 XG ל3 דקות.
  3. צלחות חמות דם אגר ב37 המעלות צלזיוס החממה. להכיןצלחת 96 גם לכימות חיידקים בשיטת M & M ולהכין צינורות דילול בהתאם למינון הרצוי.
  4. הסר את supernatant המרק מצינור centrifuged וresuspend גלול ב 1 מ"ל של תמיסת מלח. צעד זה מסיר את המרק מהבידוד.
  5. חזור על שלב צנטריפוגה.
  6. הסר את supernatant המלוח וresuspend גלול ב 1 מ"ל של תמיסת מלח.
  7. בצע סט לדילול ריכוז בידוד רצוי ולכמת בשיטת M & M.
  8. קח את הבידוד למינוי ההתנדבות ולאחר inoculating המתנדבים, חזור כימות במעבדה. תייג את הצינור עם התאריך ומינון בידוד ולאחסן ב -80 ° C.
  9. כדי להבטיח עקביות מחיסון לחיסון, חשוב להשתמש באותם pipettes וציוד מעבדה ייעודי בכל פעם.

4. התחסנות

  1. מתנדב צריך להיות יושב בנוחות בתנוחה שכיבה למחצה.
  2. השימוש P200 פיפטה וטיפי סינון סטריליים לצייר עד 100 μl של הבידוד ולהכניס את הקצה ממש בתוך חלל האף.
  3. לאט לגרש את הבידוד על רירית האף בתנועות מעגליות.
  4. זה חיוני כי קצה פיפטה אינו בא במגע עם רירית האף כהפרעה בשלמות האפיתל עלול לגרום לחיידקים להיכנס לזרם הדם.
  5. הוא גם חיוני כי הבידוד אינו ממוקם רחוק מדי בחזרה או שזה יפעל במורד הגרון, זה צריך לשכון בתוך חלל האף.
  6. חזור לnaris האחר.
  7. יש מתנדבים להישאר בעמדה שכיבה למחצה עבור 10 דקות ללא מרחרח או נושב האף. זה מאפשר זמן לחיידקים להתפזר על פני הרירית.

5. ניטור

  1. מתנדבים נמצאים במעקב יומי לאחר חיסון. זה כולל הודעת טקסט יומית נשלחה על ידי מתנדב לחוקרים לפני 2 בצהריים.
  2. אם טקסטילא קבל ב 2 הצהרים מתנדבים יהיה קשר כדי להבטיח / הרגשתו הטובה. אם הוא / היא לא מגיב, שאר הבשר הבא יוקצו יהיה קשר כדי להבטיח הרווחה של המתנדב.
  3. מתנדב מתבקשים לדווח על כל תסמינים בדרכי נשימה עליונים בכל פגישה. צוות קליני יבקש מתנדב לתיאור הסימפטומים שלו / שלה ויודיע לי שום תלונה.
  4. את האנטיביוטיקה שניתנה למתנדבים הן רק לתילקח בשלוש נסיבות: במקרה שהם אינכם חשים בטוב וקבלו הנחיות לקחת אותם על ידי צוות המחקר, אם הם נושאים pneumococcus בסוף המחקר, או אם הם אינכם חשים בטוב והצליח ליצור קשר עם צוות המחקר. מתנדב מתבקש לשמור על חבילת חירום זה איתם בכל העת במהלך המחקר ומתבקש ליצור קשר עם צוות המחקר על בסיס יומי במשך 7 הימים הבאים.
  5. צוות שלנו זמין 24/7 באמצעות מגע אחות במהלך שעתי עבודה ושני רופאים זמינים מתוך הואורס. כל שאילתות מטופלות על ידי שיחת טלפון ו / או ביקורת מיידית. הוראות זמינות להודאה מיידית וישירה למחלקת מחל מדבקות, במידת צורך.

6. אף Wash (NW) נוהל

  1. שטיפות אף (NW) מתבצעות בביקור ראשוני הקרנה, כמו גם 48 שעות, 7 ו 14 ימים לאחר החיסון. שיטת NW משמשת נלקחת מNaclerio et al. 8 מתנדב באופן טבעי מאוכלס על ידי ס דלקת ריאות אינן נכלל בחיסון והמעקב.
  2. מתנדב יושב בנוחות ובראשו מוטה לאחור 30 מעלות מהאנך.
  3. שאל מתנדב לקחת נשימה עמוקה ובלעצור את נשימתם בזמן דוחף את הלשון שלהם למעלה ואחורה על הגג של הפה. בעוד בעמדה זו, המתנדב בקש לאותת שהם מוכנים.
  4. מזרק מלא בתמיסת מלח 20 מ"ל מוכנס לתוך חלל האף הקדמי ו5 מ"ל של תמיסת מלח הוא גורש. Volunteer ורוכן באופן מיידי והרחקת הנוזל על ידי נשיפה דרך אפם במהירות לתוך קערת נייר כסף.
  5. חזור על תהליך זה 3 פעמים נוספות, כך שכל naris כבר שטף פעמים ו20 מ"ל המלא כבר בשימוש.
  6. ברכה לכל הדוגמות יחד בצינור צנטריפוגה ולשלוח למעבדה בטמפרטורת חדר לעיבוד.

7. אף שטפי עיבוד

  1. צנטריפוגה את הדגימות למשך 10 דקות ב3345 x גרם.
  2. הסר את supernatant וחנות כ1 aliquots מ"ל בשפופרות Eppendorf שכותרת ב-80 ° C.
  3. הוסף 100 μl של STGG בינוני 9 לגלולה ומערבבת היטב. ודא שעוצמת הקול הכוללת בצינור בשלב זה נקבעה. דילול זה ישמש בחישוב CFU של עגלת NW החיובי.
  4. צלחת טיפת μl 20 מתוך STGG מכיל גלולת resuspended על גבי צלחת אגרה דם המכילה גנטמיצין ופס כל הצלחת.
    1. אם NW הוא שלאחר החיסון, להסיר 10 μl מSTGG מכיל גלולה ושימוש לכימות חיידקים בשיטת M & M resuspended.
  5. הוסף 800 μl נוסף של STGG לצינור NW ומערבב היטב.
  6. 25 μl צלחת על גבי צלחת אגר דם ו25 μl על גבי צלחת אגרה שוקולד, נמרח כל הצלחת.
  7. לחלק את חיידקי הסכום הנותרים המרחפים בSTGG בינוני לתוך 2 cryovials וחנויות ב-80 ° C.
  8. דגירת הצלחות על 37 מעלות צלזיוס בלילה ב5% CO 2.
  9. לבחון את הצלחות למחרת לpneumococcus ומזיקים פוטנציאליים אחרים בדרכי נשימה.
  10. Pneumococci מזוהים על ידי צלחות מורפולוגיה מושבה. מושבות haemolytic אלפא עם מורפולוגיה שרטט הן תת תרבותיות על אגר דם עם דיסק optochin וטופחו במשך הלילה.
  11. מושבות pneumococcal משוערות שoptochin רגישים מוכתמות גראם לאשר diplococci גראם החיובי וserotyped באמצעות Statens סרום מכון Pneuערכת motest-אטקס.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנחנו ניסיון יש inoculating 159 אנשים, מתוכם 35 בצעו pneumococcus. המינון הנמוך ביותר שהשגנו עגלה עם שימוש סרוטיפ 6B היה 11,100 CFU/100 μl לnaris, המינון הגבוה ביותר היה 313.000 CFU/100 μl לnaris. המינון הנמוך ביותר שהשגנו עגלה עם שימוש 23F סרוטיפ היה 9000 CFU/100 μl לnaris, המינון הגבוה ביותר היה 84,500 CFU/100 μl לnaris.

שיטת הערכת כרכרה שלנו היא שטיפת אף, נבחרה כי מחקר שנערך לאחרונה הראה כי 10 91% ממתנדבים מצאו שטיפת אף להיות יותר נוח מספוגית אף ולוע; שטיפת האף הייתה גם סיכוי גבוהה יותר לזהות פתוגנים באמצעות תרבות מיקרוביולוגית. פלורה של חיידקים שנמצאה על צלחות אגרו דם מחוסן עם NW יכולה להיות משתנית וקשה לקריאה. גנטמיצין משמש בצלחת אגרה הדם הראשונה לבחירה לpneumococcus. הצלחת אגרה שוקולד והצלחת אגרו דם 2 המשמשים לאיתור נתיב נשימה פוטנציאלי אחרogens שעשויה לעזור או להפריע קולוניזציה pneumococcal. דוגמה של צלחת אגרה דם מחוסן עם NW שהוא קל לקריאה מוצגת באיור 1 א; צלחת קשה המכילה סוגים רבים של צמחייה מוצגת באיור 1b.

בכל מתנדבי מינוי התבקשו לתאר כל תסמינים בדרכי נשימה עליונים, אם קיים, והשוואה בין ספקי תקשורת וספקים שאינם הייתה מודגשת. מבין 145 האנשים מחוסנים לאחרונה עם pneumococcus, 28 התלוננו על תסמינים (טבלה 1). שמונה מתוכם היו נישאים, 20 לא היו. התסמינים השכיחים ביותר היו תסמיני אף שאינם ספציפיים (טבלה 1). מהמקרים שבם דווחו תסמינים מערכתיים, כולל חום ו / או תחושת חולי, אף אחת מהחקירות שבוצעו הראה עדות למחלה ותסמיני דלקת ריאות היו עקבית עם זיהום ויראלי במקביל למעט במקרה אחד של דלקת שקדים. שתי positiv pneumococcalמתנדבי דואר טופלו באנטיביוטיקה. אחד התלונן על כאבי גרון וכאבי אוזניים, ולאחר פגישה עם רופא המחקר, המליץ ​​לו לקחת אנטיביוטיקה כאמצעי זהירות. מתנדב האחרים אובחן קליני עם דלקת שקדים. כל המתנדבים היו החלטה מהירה של תסמינים.

figure-results-1
איור 1. צלחת אגרה דם מחוסן עם NW. הצלחות אגרו דם מחוסן עם NW יכולות להיות קשות לקריאה. 1a הוא דוגמה לצלחת שהיא קל לקריאה עם pneumococci נראה בבירור. 1b הוא צלחת עם המון צמחיית שיתוף מיישבת שהופך אותו יותר קשה לזהות אם pneumococci הוא הווה.

תסמינים מרכבה (n = 32) לא מרכבה (n = 112)
כלתסמינים 24% 18%
מערכתי חום 3% 4%
* מועקה 9% 4%
מקומי אוזניים 9% 3%
אף 0 10%
גרון 12% 3%

טבלת 1. אפיונו של המתנדב דיווח על תסמינים בעקבות ס דלקת ריאות 6B חיסון. כל התלונות נבדקות על ידי ועדת הבטיחות החיצונית, ובעקבות חקירות מלאות, אין לו סימפטומים יוחסו למחלת דלקת ריאות. התסמינים השכיחים ביותר היו כאב גרון, אף ממולאים ומחל דמויית שפעת.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פלטפורמת EHPC יש מספר השימושים פוטנציאליים כוללים שימוש כמודל חיסון רירי וכפונדקאי של הגנה לבדיקת חיסוני חלבון רומן. השיטה תלויה בטכניקת הדבקה עקבית ואיכות גבוהה NW.

שחזור יכול להיות בעיה עם הבידוד. בשל האופי המשתנה של aliquots החיידקים הקפואים, זה יכול להיות קשה לשכפל את המינון הרצוי. Halving או הכפלת המינון הרצוי נחשב בטווח. זה חיוני כי כימות החיידקים להיעשות מייד לפני והחיסון בא, כדי לקבוע במדויק כימות של חיידקים על ידי CFU ספירה. מסיבה זו יכולה להיות מועיל אם מינויי התנדבות מתרחשים בו זמנית, כך שרק בידוד איש צריך להיות מוכן וציפוי הכימות שנעשה לפני ואחרי החיסון קורה לא יותר מ -30 דקות זו מזו.

שיטת NW דורשת coopeמנה של המתנדב, ולא הייתה שיטה אידיאלית בילדים. אם התשואה היא פחות מ 5 מ"ל, ההליך ניתן לחזור על שימוש עד 20 מ"ל נוסף. תותבות לובשות עשויות להפחית את תשואת NW. אם יש מתנדב אף חסום / צפוף ומלוח ואוזל anteriorly אחרי החדרה, לפוצץ את האף, הכנס את המזרק מעט רחוק יותר, והטה את הראש אחורה יותר במידת צורך.

NW הוא טכניקה שמשתפרת עם תרגול. קצת נפח בדרך כלל יאבד כך המטרה היא לתשואה של לפחות 10 מ"ל. אם מתנדב יכול לטעום מלוח במהלך NW אז הקשר בין לוע האף והלוע התחתון האחוריים לא נסגר כראוי על ידי לשונו של המתנדב. אם בולעת ההתנדבות רוב המלוח, להסביר את ההליך שוב, תוך שימת דגש על הדחיפה של הלשון כנגד גג הפה. ואז לחזור על התהליך כדי להגביר את עוצמת הקול חזרה.

אם NW מכיל substantכמות IAL של ליחה, עדיף להסיר אותו לפני צנטריפוגה. מערבולת המדגם כדי לשחרר כל דבר שעשוי להיות קשור לליחה ולאחר מכן להסיר כמה שיותר את החתיכות הגדולות ככל האפשר תוך הסרה אשר מלוח מעט ככל האפשר.

מחקר EHPC קודם בארה"ב הסתיים בשלום ולא היו תופעות לוואי 11. כדי להבטיח את השלום המתמשך של פלטפורמת EHPC, הקמנו פרוטוקול חירום המבוסס סביב גישת 24 שעות לצוות המחקר. מתנדבים מקבלים פרטי התקשרות, ומאפשרים להם גישת 24 שעות לצוות המחקר ביום. כל טיפול הרפואי דרושים מסופק בבית החולים של האוניברסיטה המלכותית של ליברפול. כאמצעי נוסף להגנה, ועדת בטיחות המורכבת של רופאים ומדענים מחוץ לקבוצת המחקר מקבלת דו"ח בטיחות שבועית. הדו"ח מכיל את מינון החיידקים כל מתנדב קבל והאם כל סימפטומים או מחלה דווחו. דו"ח זה מאפשר בטיחות של המחקר דואר שהעביר ביקורת חיצונית ללא משוא פנים. ועדת הבטיחות זמינה גם 24 שעות ביום במקרה הלא הסביר של חירום.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מומנה על ידי קרן ביל ומלינדה גייטס (פרס חקירת אתגר הגדול לSBG), המכונים הלאומיים לבריאות מחקר (NIHR), מרכז המחקר ביו במחל מיקרוביאלית, ומחקר ברשת המקומית המקיפה NIHR. אנו מכירים בNWDA לתמיכה תשתיתית. אנו מודים לפרופ 'יעקב וייזר, אוניברסיטת פנסילבניה ופרופ' P הרמן, אוניברסיטת ניימיכן לבידודי pneumococcal. תודה לועדת בטיחות EHPC לתמיכה ותעוץ, לכל המתנדבים להשתתפותם ומתייה Bangert ללוקח את התמונות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
שם חברה חתול #
גליצרול דיג G/0650/08
0.9% נתרן כלוריד B. Braun 3627667
אבקת חלב דל שומן Fluka 70166
Tryptone סויה המרק הקיטון דיקינסון 211768
גלוקוז BDH 284504S
אגר קולומביה בדם הסוס chocolated Oxoid PB0124
Pneumotest-לטקס ערכה Statens סרום המכון 51823

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ferreira, D. M., Jambo, K. C., Gordon, S. B. Experimental human pneumococcal carriage models for vaccine research. Trends in Microbiology. 19, 464-470 (2011).
  2. Mera, R., Miller, L. A., Fritsche, T. R., Jones, R. N. Serotype replacement and multiple resistance in Streptococcus pneumoniae after the introduction of the conjugate pneumococcal vaccine. Microbial Drug Resistance. 14, 101-107 (2008).
  3. Tocheva, A. S., et al. Declining serotype coverage of new pneumococcal conjugate vaccines relating to the carriage of Streptococcus pneumoniae in young children. Vaccine. 29, 4400-4404 (2011).
  4. Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination. Lancet. 378 (10), 1962-1973 (2011).
  5. Wu, H. Y., et al. Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice. Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).
  6. Wright, A. K. A., Ferreira, D. M., Gritzfeld, J. F., Wright, A. D., Armitage, K., Jambo, K. C., Bate, E., Batrawy, S. E. l, Collins, A., Gordon, S. B. Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage. PloS Pathogens. 8 (4), e1002622(2012).
  7. Miles, A. A., Misra, S. S., Irwin, J. O. The estimation of the bactericidal power of the blood. The Journal of Hygiene. 38, 732-749 (1938).
  8. Naclerio, R. M., et al. Mediator release after nasal airway challenge with allergen. Am. Rev. Respir. Dis. 128, 597-602 (1983).
  9. O'Brien, K. L., Nohynek, H. Report from a WHO working group: standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae. Pediatr. Infect. Dis J. 22, 133-140 (2003).
  10. Gritzfeld, J. F., Roberts, P., Roche, L., Batrawy, S. E. l, Gordon, S. B. Comparison between nasopharyngeal swab and nasal wash, using culture and PCR, in the detection of potential respiratory pathogens. BMC Research Notes. 4, 122(2011).
  11. McCool, T. L., Cate, T. R., Moy, G., Weiser, J. N. The immune response to pneumococcal proteins during experimental human carriage. J. Exp. Med. 195, 359-365 (2002).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Experimental Human Pneumococcal CarriageStreptococcus pneumoniaeNasal Wash ProtocolVolunteer InoculationBacterial QuantificationMiles and Misra MethodNasopharyngeal CarriageVaccine Efficacy TestingSafety MonitoringMicrobiological Detection

מאמרים קשורים