אנו מתארים שיטה לזיהוי התפתחות קשריות גידול בריאות של מודל עכבר אדנוקרצינומה באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת והשימוש בה לניטור שינויים בגודל הגוש לאורך זמן ובתגובה לטיפול. דיוק ההערכה אושר באמצעות כימות היסטולוגי של נקודת הקצה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
באמצעות טומוגרפיה מיקרו שחושבת הערכת התפתחות גידול ומעקב של תגובה לטיפול במודל עכברי של סרטן הריאות
במאמר זה
סיכום
תקציר
סרטן ריאות הוא הסרטן הקטלני ביותר בעולם. מחקר אינטנסיבי נמשך ברחבי העולם לזיהוי טיפולים חדשים לסרטן הריאות. מספר מודלים עכבריים של סרטן ריאות משמשים לחקר מנגנון התפתחות הסרטן ולניסויים באסטרטגיות טיפוליות שונות. עם זאת, היעדר טכניקה בזמן אמת לזיהוי התפתחות גושי גידול בריאות עכברים ולניטור השינויים בגודלם בתגובה להתערבויות ניסיוניות וטיפוליות שונות פוגע ביכולת לקבל תיאור מדויק של מהלך המחלה ותגובתה בזמן לטיפולים. במחקר זה מתוארת שיטה המשתמשת בסורק טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (CT) לאיתור התפתחות גידולי ריאה במודל עכבר של אדנוקרצינומה ריאתית. לאחר מכן, אנו מראים כי מעקב חודשי עם מיקרו-CT יכול לזהות שינויים דינמיים בגידול הריאה, כגון הופעת גושים נוספים, עלייה בגודל הגושים שזוהו בעבר וירידה בגודל או ברזולוציה המלאה של גושים בתגובה לטיפול. לבסוף, הדיוק של שיטת הערכה בזמן אמת זו אושר באמצעות כימות היסטולוגי של נקודת הקצה. טכניקה זו סוללת את הדרך לתכנון וביצוע ניסויים מורכבים יותר במודלים של בעלי חיים של סרטן ריאות, והיא מאפשרת לנו להבין טוב יותר את מנגנוני הסרטן ואת ההשפעות של שיטות טיפול שונות תוך חיסכון בזמן ובמשאבים.
מבוא
סרטן הריאות הוא הגורם המוביל למוות מסרטן ברחבי העולם 1. מחקר לתוך מניעה, איתור מוקדם וטיפול של סרטן ריאות הוא מתמשך מרכזי מחקר רבים ברחבי העולם 2,3. במודלים של בעלי חיים כמה לסרטן הריאות פותחו, והם הוכיחו שימושיים לחקר המנגנונים של סרטן ריאות תאים ממוצא, בקביעת הנוכחות של תאי גזע סרטני, ובבחינת אסטרטגיות טיפוליות חדשניות שונות 4. דגמים קודמים הסתמכו על התחלה של גידול נגרם מסרטן זנים רגישים של עכברים 5. התפתחות בנוקאאוט ומודלים עכבר מהונדס בהם סרטן הריאות עולה כתוצאה נגעים גנטי מניפולציות במיוחד השתפרה היכולת שלנו באופן משמעותי לשלוט אינדוקציה הגידול והיבטים לחקות כמה סרטן ריאה אנושית ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
ניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש של Keio University.
הערה: במחקר זה, השתמשנו Sftpc-rtTA ו Tre-FGF9-ires-egfp DT עכברים שבו אדנוקרצינומה ריאות מפתחת במהירות לאחר אינדוקציה על ידי האכלה צ'או המכיל דוקסיציקלין 6,7. עם זאת, כל נהלי ההערכה ניתן ליישם מודלים עכבריים של סרטן הריאה אחרים.
מתאר ניסוי 1.:
- לזהות את המצב של הריאות על קו הבסיס:
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
זיהוי של עכברים עם מומי ריאות בוצע בתחילת המחקר. לפני אינדוקציה הגידול, כאשר העכברים DT היו 8 - 12 שבועות של גיל, הריאות של כל העכברים נסרקו עם-CT מיקרו. באופן מפתיע, כ 50% של עכברים הראו מומים כי הכריחו אותנו רואה אותם מתאימים להכללה במחקר שלאחר מכן. ליקויים אלה היו צללים דמויים גולים, בולות emphysematous קטנות אחד או מספר גדולים ו / או תמט ריאות אוֹנִי (איור 1 א, ג, DE, GH). לאחר מכן, אינדוקצית transgene ואת גידול FGF9 ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שיטת מייקרו-CT המבוסס המתואר כאן לזיהוי בזמן האמת של מומי ריאות והניטור של התפתחות גושים סרטניים ואת התגובה לטיפול בבעלי חי סרטן הריאות תאפשרנה למדענים שמנהלי ניסויים הקשורים לסרטן ריאות לתכנן יותר ניסויים מדויקים ויעילים תוך חיסכון בזמן ומשאבים. השתמשנו בעבר MRI לאותה מטרה 6. הבהירות של הסריקה סף לצורך זיהוי של גושים ריאות עם MRI היו נחותים מאלו עם סריקות מיקרו-CT המתוארים במחקר זה 6.
מחקרי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי גרנט ב- Aid מן JSPs KAKENHI עבור AEH (גרנט מספר 25,461,196) ו TB (במדבר גרנט 23,390,218 ו 15H04833) ו National Institutes of HL111190 לבריאות מענק (DMO). המחברים מבקשים להודות מיוקי ימאמוטו על מאמציה לסייע עם גנוטיפ חיה והכנת סעיפים היסטולוגית. אנו מודים משאבי המחקר המשותפים, בית הספר לרפואה, Keio University לתמיכה ריאגנטים טכניות.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרו-רנטגן– טומוגרפיה ממוחשבת | Rigaku | R_mCT2 | |
| NanoZoomer RS מערכת פתולוגיה דיגיטלית | Hamamatsu | RS C10730 | |
| NDP.view2 תוכנת צפייה | Hamamatsu | U12388-01 | |
| וופורייזר איזופלורן http://www.hamamatsu.com/jp/en/U12388-01.html - תא | VETEQUIP | 911103 | |
| , 2 ליטר W9.5 ופעמים; D23 וזמנים; H9.5 | VETEQUIP | 941444 | |
| Isoflurane | Mylan | ES2303-01 | |
| AZD 4547 | LC Labratories | A-1088 | |
| Pentobarbital | Kyoritsu | SOM02-YA1312 | |
| G24 צינורית | Terumo | SP-FS2419 | |
| Paraformaldehyde | Wako | 163-20145 | |
| Microtome | Leica | RM2265 | |
| Doxycycline | SLC Japan/PMI Nutrition International | 5TP7 | |
| ImageJ תוכנה | המכון הלאומי לבריאות | http://imagej.nih.gov/ij/ | |
| משחה וטרינרית Puralube (חומר סיכה אוקולרי) | Dechra | NDC 17033-211-38 |
מקורות
- Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. Int. J. Cancer. 136, 359-386 (2015).
- Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. Lost in translation: animal models and ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
