דיסקציה של הרשתית האנושית ואת RPE-Choroid לניתוח פרוטיאומיה מבנית

Thiago Cabral; Marcus A. Toral; Gabriel Velez; James E. DiCarlo; Anuradha M. Gore; MaryAnn Mahajan; Stephen H. Tsang; Alexander G. Bassuk; Vinit B. Mahajan

doi:10.3791/56203

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

דיסקציה של הרשתית האנושית ואת RPE-Choroid לניתוח פרוטיאומיה מבנית

11.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/56203

⸱

12 בנובמבר 2017

Thiago Cabral^*¹^,²^,⁷^,⁸ , Marcus A. Toral^*³^,⁴ , Gabriel Velez³^,⁴ , James E. DiCarlo¹^,² , Anuradha M. Gore³ , MaryAnn Mahajan³ , Stephen H. Tsang¹^,² , Alexander G. Bassuk⁵^,⁶ , Vinit B. Mahajan³^,⁹

¹Barbara & Donald Jonas Stem Cell Laboratory, and Bernard & Shirlee Brown Glaucoma Laboratory, Department of Pathology & Cell Biology, Institute of Human Nutrition, College of Physicians and Surgeons, Columbia University, ²Edward S. Harkness Eye Institute, New York-Presbyterian Hospital, ³Omics Laboratory, Byers Eye Institute, Department of Ophthalmology, Stanford University, ⁴Medical Scientist Training Program, University of Iowa, ⁵Department of Pediatrics, University of Iowa, ⁶Department of Neurology, University of Iowa, ⁷Department of Ophthalmology, Federal University of Sao Paulo (UNIFESP), ⁸Department of Ophthalmology, Federal University of EspÍrito Santo (UFES), ⁹Palo Alto Veterans Administration, Palo Alto, CA

^* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

הרשתית האנושית מורכבת מולקולרי ושאיכות אזורים הנבדלים זה מזה, לרבות fovea, macula, הרשתית ההיקפית. כאן, אנו מתארים שיטה באמצעות ניקוב ביופסיות להסרה ידנית של רקמות שכבות מן העין האנושית כדי לנתח ולאסוף אלה אזורים הנבדלים זה מזה ברשתית לניתוח פרוטיאומיה מבנית במורד הזרם.

תקציר

הרשתית האנושית מורכבת את neuroretina חישה ברשתית כבסיס פיגמנט האפיתל (RPE), אשר הוא ומורכבת בחוזקה על השכבה דמית העין כלי הדם. אזורים שונים של הרשתית מופרדים מבחינה אנטומית, מולקולרי, הקלת פונקציות ייחודיות, הוכחת דיפרנציאלית ולרגישות למחלות. ניתוח פרוטיאומיה מבנית מכל סוג של אזורים אלה שכבות יכול לספק תובנות חיוני לתהליך מולקולריים של מחלות רבות, כולל ז ניוון מקולרי (AMD), סוכרת, גלאוקומה. עם זאת, הפרדת רשתית אזורים שכבות חיוני לפני ניתוח כמותי פרוטיאומיה מבנית יכול להתבצע. כאן נתאר שיטת ניתוח ואוסף של אזורים רשתית foveal מקולרי, ציוד היקפי, שבבסיס RPE-דמית העין מורכבת, מעורבים ביופסיות אגרוף אזוריות ו להסרה ידנית של רקמות שכבות של העין האנושית. עמודים מרחביות חד-ממדי, כמו גם ניתוח פרוטיאומיה מבנית במורד הזרם, כגון ספקטרומטר מסה טנדם-כרומטוגרפיה נוזלית (LC-MS/MS), ניתן להשתמש כדי לזהות חלבונים בכל אחת מהשכבות ברשתית גזור, חשיפת סמנים מולקולריים של מחלות רשתית.

מבוא

הרשתית, RPE דמית העין הן רקמות מורכבות המדגימים חשוב הבדלים אזוריים ביטוי חלבון, תפקיד פיזיולוגי ו susceptibilities פתולוגית¹^,². לדוגמה, מחלות כגון ז ניוון מקולרי (AMD), רטיניטיס פיגמנטוזה, רטינופתיה הצפק במרכז כל להדגים לוקליזציה האופיינית בתוך fovea, macula, או רשתית לפריפריה¹^,³^, ⁴^,⁶. כאן, אנו מציגים שיטה הוכחת כמה ברורים רשתית אזורים ניתן לטעום באופן עצמאי. המטרה הכוללת של שיטה זו היא לספק מדריך אמין עבור אוסף של דגימות רקמות מאזורים foveal מקולרי, היקפי של הרשתית האנושית ואת RPE....