מאמר שיטה

פיתוח מודל של תרבות משותפת של תאים כדי לחקות איסכמיה לב/רפרטפוזיה במבחנה במבחנה

DOI:

10.3791/62913

⸱

13 באוקטובר 2021

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Vanderbilt University Medical Center, 2Anesthesiology, TVHS VA Medical Center, 3Department of Pharmacology, Vanderbilt University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מרחק מרחבי הוא פרמטר מרכזי בהערכת פגיעה היפוקסיה/ראוקסיגניה במודל של תרבות משותפת של שכבות תאי אנדותל וקרדיומיוציטים נפרדות, מה שמרמז, לראשונה, כי אופטימיזציה של הסביבה המרחבית של תרבות משותפת נחוצה כדי לספק מודל הפריה חוץ גופית חיובי לבדיקת התפקיד של תאי אנדותל בהגנה על קרדיומיוציטים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת לב איסכמית היא הגורם המוביל למוות ולמוגבלות ברחבי העולם. רפרטפוזיה גורמת לפציעה נוספת מעבר לאיסכמיה. תאי אנדותל (ECs) יכולים להגן על קרדיומיוציטים (CMs) מפני פגיעה ברפרטוזיה באמצעות אינטראקציות בין תאים לתאים. תרבויות משותפות יכולות לעזור לחקור את התפקיד של אינטראקציות בין תאים לתאים. תרבות משותפת מעורבת היא הגישה הפשוטה ביותר, אך מוגבלת מכיוון שטיפולים מבודדים וניתוחים במורד הזרם של סוגי תאים בודדים אינם אפשריים. כדי לחקור אם ECs יכול למנות תלוי מינון להחליש נזק לתאי CM והאם הגנה זו יכולה להיות ממוטבת עוד יותר על ידי שינוי מרחק המגע בין שני קווי התאים, השתמשנו בתאי אנדותל עורק הכלילי הראשי של העכבר הראשי ובקרדיומיוציטים של עכבר בוגר כדי לבדוק שלושה סוגים של תוספות תרבית תאים שהשתנו במרחק השכבה הבין-תאית שלהם ב- 0.5, 1.0, ו 2.0 מ"מ, בהתאמה. ב- CMs בלבד, פגיעה תאית כפי שהוערכה על ידי שחרור לקטט דהידרוגנאז (LDH) גדלה באופן משמעותי במהלך היפוקסיה ובהמשך על reoxygenation כאשר המרחק היה 2.0 מ"מ לעומת 0.5 ו 1.0 מ"מ. כאשר ECs וCMs היו במגע כמעט ישיר (0.5 מ"מ), היה רק החלקה קלה של פגיעה reoxygenation של CMs בעקבות היפוקסיה. הנחתה זו הוגדלה באופן משמעותי כאשר המרחק המרחבי היה 1.0 מ"מ. עם מרחק של 2.0 מ"מ, ECs החלישו פגיעת CM במהלך היפוקסיה והיפוקסיה / reoxygenation, המציין כי התרחקות תרבותית מספקת נחוצה עבור ECs כדי להצליב עם CMs, כך מולקולות אות מופרש יכול להסתובב ולעורר באופן מלא מסלולי הגנה. הממצאים שלנו מראים, בפעם הראשונה, כי אופטימיזציה של הסביבה המרחבית של תרבות משותפת EC / CM נחוצה כדי לספק מודל הפריה חוץ גופית חיובי לבדיקת התפקיד של ECs בהגנה CM מפני איסכמיה מדומה / פגיעה reperfusion. מטרתו של דו"ח זה היא לספק גישה צעד אחר צעד לחוקרים להשתמש במודל חשוב זה לטובתם.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת לב איסכמית היא הגורם המוביל למוות ונכות ברחבי העולם 1,2. עם זאת, תהליך הטיפול של רפרטפוזיה יכול עצמו לגרום למוות cardiomyocyte, המכונה איסכמיה שריר הלב / רפרטפוזיה (IR) פגיעה, אשר עדיין אין תרופה יעילה3. תאי אנדותל (ECs) הוצעו להגן על cardiomyocytes (CMs) באמצעות הפרשת אותות paracrine, כמו גם אינטראקציות תא לתא4.

מודלים של תרבות משותפת של תאים שימשו בהרחבה כדי לחקור את התפקיד של אינטראקציות אוטוקרין ו/או פראקרין תא-תא על תפקוד התא וההבחנה. בין מודלים של תרבות משותפת, תרבות משותפת מעורבת היא הפשוטה ביותר, שבה שני סוגים שונים של תאים נמצאים במגע ישיר בתוך תא תרבות יחיד ביחס התא הרצוי5. עם זאת, טיפולים נפרדים בין סוגי תאים וניתוח במורד הזרם של סוג תא יחיד אינם אפשריים בקלות בהתחשב באוכלוסייה המעורבת.

מחקרים קודמים הצביעו על כך עלבונות היפוקסיים ואיסכמיים לגרום נזק משמעותי לשלמות של קרום התא כפי שנמדד על ידי שחרורו של לקטט דהידרוגנאז (LDH). פציעה זו מחמירה עם reoxygenation, מחקה פגיעה reperfusion 6,7,8. מטרת הפרוטוקול הנוכחי הייתה לבדוק את ההשערות כי נוכחותם של רדיקלים אלקטרוניים יכולה להחליש באופן תלוי במינון דליפת קרום התא של CMs הנגרמת על ידי היפוקסיה ו reoxygenation (HR) וכי ההשפעה המגנה של ECs ניתן למטב על ידי שינוי מרחק המגע בין שני קווי התא. לכן, העסקנו שלושה סוגים של תוספות תרבית תאים ותאי אנדותל עורקים כליליים עיקריים עכבר ו Cardiomyocytes עכבר מבוגר. התוספות, ממותגות על ידי קורנינג, מרק מיליפור, ו Greiner Bio-One אפשרו לנו ליצור שלושה תנאים שונים של תרבית תאים צולבת עם מרחקי קו בין תאים של 0.5, 1.0 ו -2.0 מ"מ, בהתאמה. 100,000 ECs היו מצופים לכל הוספה בכל מקרה.

בנוסף, על מנת לקבוע אם הצפיפות של ECs בתרבות משותפת תורמת להחלשת פגיעה במשאבי אנוש במודל זה, חקרנו את יחסי תגובת המינון בין ריכוז EC לשחרור LDH על ידי CMs. ECs היו מצופים ב 25,000, 50,000 ו 100,000 לכל הוספה, בהתאמה, בתוספת 2.0 מ"מ.

דו"ח זה מספק גישה צעד אחר צעד לחוקרים להשתמש במודל חשוב זה לטובתם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנה/ציפוי ניסיוני

  1. שמור על CMs ו- ECs בהתאם להוראות היצרן.
    1. להפשיר את שני קווי התא כאשר הם מגיעים מספקים. צלחת בבקבוקונים T25 לאחר שטף עם מדיה טרייה. מומלץ לרכוש כל מדיה של תרבית תאים מאותם ספקים שמהם נרכשו התאים. למחרת, רענן את התאים עם מדיה והשתמש כאשר הם נפגשים.
    2. לשמור על אינקובטור תרבית התא ב 37 °C (37 °F) עם 21% O2, 5% CO2, 74% N2 ולשמור אותו לח.
      הערה: תאי אנדותל העורק הכליליים העיקריים המשמשים בפרוטוקול זה מבודדים מעורקים כלילית של עכברי C57BL/6, וקרדיומיוציטים של עכברים בוגרים מבודדים מלבבות עכבר C57BL/ 6J בוגרים ומתקבלים באופן מסחרי (ראה טבלת חומרים).
  2. לוחות CMs בתנאים סטריליים על החלק התחתון של לוחות 24 בארות (שכבה נחותה). 24 שעות מאוחר יותר, צלחת ECs לתוך הכנס (או חלק מעולה) של התרבות המשותפת היטב. 24 שעות לאחר ציפוי EC, מקם תוספות EC על בסיס לוח CM, החל את תקופת התרבות המשותפת. אפשר לתאים להתאים לתרבות משותפת למשך 12-24 שעות לפחות לפני השימוש. שלבים אלה מתוארים בפירוט להלן.
    1. הערכת מפגש קו תא CM תחת מיקרוסקופ אור. כאשר תאים נראים 90%-100% מפגש בבקבוקי תרבות, להמשיך עם ציפוי ניסיוני.
    2. הסר את המדיה מן הבקבוקונים המכילים תרביות תאים בולווים ו trypsinize עם 3-5 מ"ל של חומצה טריפסין / אתילנדימינטטטראסטית (EDTA) עבור בקבוקונים T25. להסעיר את הבקבוק בעדינות, לדגור ב 37 °C (5 °F) במשך 2-5 דקות, ולאחר מכן להעריך את ההתקדמות אנזימטית תחת מיקרוסקופ אור. לאחר שהתאים מתחילים לעגל כלפי מעלה, השתמש במגרד תאים כדי לנתק את התאים מפני השטח.
    3. לאחר הניתוק, להשבית את פתרון הטריפסין על ידי הוספת פתרון טריפסין / תא לצינור 50 מ"ל המכיל 10 מ"ל של מדיה עבור צלוחיות T25. צנטריפוגה השעיית התא ב 120 x g במשך 2 דקות כדי לקבל גלולה תא רך. הסר את supernatant ו resuspend את הכדור ב 5 מ"ל של מדיה.
    4. כדי לבצע ספירת תאים ולאשר את הכדאיות של התא, לערבב aliquot של 10 μL של תאים resuspended ו 10 μL של צבע כחול טריפאן. ספור את התאים החיים באמצעות מונה תאים. לדלל את התאים עם מדיה רגילה טרייה כדי להשיג את צפיפות הזריעה הרצויה. כרכים מחושבים בהתאם לצפיפות הזרעים הרצויה וריכוז התאים של פתרונות מלאי. כל הציפוי צריך להתבצע בתנאים סטריליים.
    5. CMs צלחת בצפיפות זריעה של 300,000 לבאר על החלק התחתון של צלחת 24 באר מצופה מראש עם מטריצה חוץ תאית. לשמור על התאים ב 37 °C (55 °F) עם 21% O2 ו 5% CO2 לילה.
    6. לאחר 24 שעות, לוח ECs לתוך תוספות בצפיפות ציפוי אופטימלית של 100,000 לכל הוספה (שטח התרבות הוא 33.6 מ"מ2), (איור 1). לאחר 24 שעות של ציפוי EC, למקם EC מוסיף בתוך בארות CM, ייזום תרבות משותפת. אפשר לתאים לתרבות משותפת למשך 12-24 שעות לפני ביצוע הניסויים.
    7. ודא כי עד לביצוע הניסויים, הן ספקי שירותי אינטרנט והן מחשבים אלקטרוניים הגיעו למפגש של 80%-90%.

2. היפוקסיה/reoxygenation כדי לדמות איסכמיה / פגיעה reperfusion במבחנה

הערה: השלבים הבאים צריכים להתבצע כמתואר, לא להשהות בין לבין.

  1. הכן את המדיה היפוקסית על ידי שפיכת ~ 25 מ"ל של מדיה בצינור חרוטי 50 מ"ל. יש לאטום את החלק העליון עם קרום סיליקון ולהשתמש בפיפטה מעוקרת כדי לנקב חור. צור חור נוסף, הפעם משאיר את פיפטה שקועה כ 2/3 לתוך התקשורת.
  2. לשטוף את המדיה עם גז היפוקסי (0.0125% O2, 5% CO2, 94.99% N2) במשך 5 דקות בקצב זרימה של 30 ליטר / דקה. פעולה זו ממזערת O2 מומס במדיה כאשר היפוקסיה מתחילה (שלב 2.5).
  3. השלך את המדיה של 24-well-wells או תוספות תרבות המכילות תאים מצורפים ולשטוף עם 100 μL / היטב של 10% תמיסת מלח מאגר פוספט (PBS) בעדינות רבה. לאחר מכן, להוסיף 500 μL של מדיה היפוקסית טרי מוכן לכל באר של הצלחות או מוסיף.
    הערה: היפוקסיה במדיה מופרעת בקצרה ככל האפשר במהלך שלב זה לפני היפוקסיה אמיתית עבור תאים ומדיה מתחילה בשלב 2.5.
    1. בקבוצת הביקורת הנורמוקסית, החלף את המדיה המקורית במדיה רגילה ורעננה המכילה גלוקוז וסרום.
  4. לחות את תא היפוקסיה על ידי הצבת צלחת פטרי מלא מים סטריליים בתוך החדר. לאחר מכן, מניחים את הצלחות המרכיבות את הקבוצות ההיפוקסיות לתוך התא.
  5. לשטוף את תא היפוקסיה עם גז היפוקסי (0.0125% O2, 5% CO2, 94.99% N2) במשך 5 דקות בזרימה של 30 ליטר / דקה. מניחים את התא באינקובטור 37 °C (37 °F) במשך 24 שעות.
  6. לאחר היפוקסיה, לטפח CMs ו- ECs בתנאים רגילים. לשם כך, השליכו את המדיה הישנה של הלוחות/תוספות, החליפו אותה במדיה רגילה (המכילה גלוקוז וסרום; 500 μL של כל באר/הוספה) ואחסנו אותה באינקובטור בתנאי תרבות רגילים (21% O2, 5% CO2, 74% N2, 37 °C (37 °C) למשך 2 שעות כדי לחקות רפורמציה.
  7. כדי לשלוט בהשפעות כלשהן של החלפת מדיה, שנה את המדיה של תאים נורמוקסיים בו-זמנית עם שינוי המדיה ההיפוקסית.
    הערה: איור 2 מספק סקירה סכמטית של פרוטוקול זה.

3. הערכת נקודות קצה

  1. העבר את מדיית תרבית התאים מלוחית 24 הבאר לצלחת של 96 בארות. השתמש 200 μL של מדיה מכל באר של צלחת 24-well ולהפיץ באותה מידה לארבע בארות של צלחת 96-well, בהתאם. השתמש צלחת אחת כל אחד לנורמוקסיה לעומת היפוקסיה לעומת משאבי אנוש.
  2. לקבוע את מידת הפגיעה התאית, למשל, על ידי מדידת ספיגה עבור LDH באמצעות ערכת בדיקת ציטוטוקסיות בהתאם להוראות היצרן. בצע את הבדיקה בלוחית 96-well כפי שהונחה בפרוטוקול הבדיקה.

4. סטטיסטיקה

  1. הצג את הנתונים הפרמטריים כסטיית תקן/ממוצעת ונתונים שאינם פרמטריים כהתווי תיבות עם טווח חציון/בין-שוויוני. בדיקות השוואות פרמטריות נאותות לעומת בדיקות השוואות מרובות שאינן פרמטריות עם בדיקות פוסט-הוק מקובלות כדי להקטין את הסיכוי לשגיאה מסוג 1 יש לבצע. המשמעות מוגדרת בדרך כלל באלפא של 0.05 (דו-זנבי).
  2. עבור כל הניסויים שבוצעו במחקר הנוכחי, לבצע לפחות שלושה משתכפל היטב בתוך ניסוי אחד. היו שלוש עד שש חזרות על כל ניסוי ששימשו לניתוח סטטיסטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל שלושת סוגי התוספות (A, B, C) המשמשים בניסוי זה הם בעלי גודל נקבוביות זהה של 0.4 מיקרומטר. ההבדל היחיד ביניהם הוא גובה ההוספה לבסיס, המאפשר למרחקים בין שתי שכבות התאים בתרבית משותפת להיות 0.5, 1.0 ו-2.0 מ"מ, בהתאמה, (איור 3) ושהם מספקים שונים (לפרטים ראו טבלת חומרים).

כדי ליצור מודל של תרבות משותפת במבחנה עם שכבות נפרדות של שני קווי תאים העוברים משאבי אנוש כדי לדמות פגיעה ב- IR, בדקנו את שלמות קרום התא של CMs בתרבית משותפת עם או בלי ECs...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שלבים קריטיים בפרוטוקול
מודלים של תרבות משותפת של תאים שימשו לחקר מנגנונים תאיים של cardioprotection. כיצד ליצור שתי שכבות נפרדות עם מרחק משמעותי ביניהן הוא, אם כן, חיוני לפיתוח מודל תרבות משותפת מתאים. אתגר בחקר IR מדומה, כלומר, משאבי אנוש, פגיעה הוא כי לא רק איסכמיה (היפוקסיה) עצמה, אלא גם רפרפוזיה (reoxygenation) מחמיר תפקוד תאי. לכן, מודל מציאותי צריך לשקף מאפיינים אלה על ידי, למשל, הפגנת פגיעה מוגברת מספיק על ידי reoxygenation בעקבות היפוקסיה לעומת היפוקסיה לבד, אבל עדיין מאפשר הנחתה של פגיעה עם ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין ניגודי עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה, בין היתר, על ידי המחלקה האמריקאית לענייני יוצאי צבא שירות מו"פ מעבדה ביו-רפואית (I01 BX003482) ועל ידי קרנות מוסדיות ל- M.L.R.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
קרדיומיוציטים של עכברים בוגרים (CMs)Celprogen Inc11041-14מבודד מרקמת לב של עכבר C57BL/6J בוגר
מונה תאים אוטומטי Countess IIInvitrogenA27977ספירת תאים לחישוב מספרי תאים
ארון בטיחות ביולוגיתNuaireNU425400תרבית תאים מכסה מנוע סטרילי
תרבית תאים הקפאתתאים בינוניים ביולוגיים בע"מ6916משמש להקפאת תאים לאחסון קו תאים לטווח ארוך
חממת תרבית תאיםNuaireNu-5500כדי לספק תנאי חיים תקינים של תאים (21%O2, 5% CO2, 74%N2, 37° C, לח
חממת תרבית תאים מיכל גזAGL גזים דחוסיםUN1013גז הדרוש לחממת תרבית תאים 
מוסיף תרבית תאים A (0.5 מ"מ)Corning Inc353095משמש לתרבית משותפת EC-CM
מוסיף תרבית תאים B (1.0 מ"מ)Millicell MilliporePIHP01250משמש לתרבית משותפת EC-CM
מוסיף תרבית תאים C (2.0 מ"מ)Greiner Bio-One662640משמש לצנטריפוגה EC-CM קו-קולקציה
Anstel Enterprises Inc4235לציפוי ומעבר תרבית תאים
צלוחיות תרבית תאים CMs T25Celprogen IncE11041-14משמש לתרבית רגילה של CMs, מצופה על ידי היצרן
CMs תרבית תאים בינונית שלמהCelprogen IncM11041-14Sתרבית CMs מדיום שלם
CMs תרבית תאים בינונית שלמה ללא פנולCelprogen IncM11041-14PNמדיום תרבית CMs ללא פנול אדום בשימוש במהלך מדידת LDH
CMs צלחות תרבית תאים 96 ובכןCelprogen IncE11041-14-96wellמשמש לניסויים של מדידת LDH, מצופה על ידי היצרן
CMs תרבית תאי היפוקסיה בינוניCelprogen IncM11041-14GFPNCMs תרבית תאים במצב היפוקסי (ללא גלוקוז וסרום)
שקופיות תא ספירת תאיםשל רוזנת InvitrogenC10283שקופיות ספירת המשמשות לערכת
ציטוטוקסיות LDHתרמו סיינטיפיק C20301ערכת מדידת LDH
ECs צלוחיות תרבית תאים T25פישר סיינטיפיק FB012935משמש לתרבית רגילה
ECs תרבית תאים בינונית שלמהתאים ביולוגיים בע"מM1168תרבית ECs מדיום שלם
ECs תרבית תאים בינונית שלמה ללא פנולתאים ביולוגיים בע"מM1168PFמדיום תרבית ECs ללא פנול אדום בשימוש במהלך מדידת LDH
ECs צלחות תרבית תאים 96 בארפישר סיינטיפיק (קוסטאר)3370משמש לניסויים של LDH מדידה
ECs תרבית תמיסת ציפוי מבוססת ג'לטיןCell Biologics Inc6950משמשת לציפוי צלוחיות וצלחות עבור ECs
ECs תרבית תאי היפוקסיה MediumCell Biologics IncGPF1168ECs תרבית תאים בתנאים היפוקסיים (ללא גלוקוז וסרום)
סרום בקר עוברי (FBS)Fisher ScientificMT35011CVFBS-HI USDA מאושר לתרבית תאים ותחזוקה
HypoxiaChamber StemCell Technologies27310ליצירת מצב היפוקסי עם סביבה של 0.01% O2
מד זרימה של תא היפוקסיהStemCell Technologies27311לחיבור עם מיכל גז היפוקסי למהירות זרימת גז עקבית
מיכל גז היפוקסי (0.01% O2 צילינדר)AG גזים דחוסיםUN1956משמש לשטיפת תווך ותא היפוקסיים (0.01%O2/5% CO2/94.99N2)
מיקרוסקופ NikonTMSלצפייה במצב התא
תאי אנדותל עורק כלילי ראשוני של עכבר (ECs)Cell Biologics IncC57-6093מבודד מעורק כלילי של עכברי C57BL/6
NUNC 15ML CONICL TubesFisher Scientific12565269לתהליך תרבית תאים, ניסויים, הכנת תמיסה וכו'.
NUNC 50 מ"ל צינורות CONICLפישר סיינטיפיק12565271לתהליך תרבית תאים, ניסויים, הכנת תמיסה וכו'.
מלח פוספט חוצץ (PBS)Sigma-AldrichD8662משמש לשטיפת תאים במהלך תרבית או ניסויים
קורא צלחותBioTek Instrument11120533קריאת צלחות קולורימטרית או פלואורומטרית
תגובה 96 Well Palte (שקוף ללא מכסה)Fisher Scientific12565226משמש לקריאת לוחות מדידת LDH
Trypsin/EDTA עבור CMsCelprogen IncT1509-0141 x מסוננים סטריליים ותרבית רקמות נבדקו
Trypsin/EDTA עבור ECsCell Biologics Inc6914/06190.25%, נבדק חיתוך תאים
) של מונה תאים

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hausenloy, D. J., et al. Ischaemic conditioning and targeting reperfusion injury: a 30 year voyage of discovery. Basic Research in Cardiology. 111 (6), 70(2016).
  2. Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. Myocardial ischemia-reperfusion injury: a neglected therapeutic target. The Journal of Clinical Investigation. 123 (1), 92-100 (2013).
  3. Gottlieb, R. A. Cell death pathways in acute ischemia/reperfusion injury. Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 16 (3-4), 233-238 (2011).
  4. Colliva, A., Braga, L., Giacca, M., Zacchigna, S. Endothelial cell-cardiomyocyte crosstalk in heart development and disease. The Journal of Physiology. 598 (14), 2923-2939 (2020).
  5. Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. Studying cell-cell communication in co-culture. Biotechnology Journal. 8 (4), 395-396 (2013).
  6. Salzman, M. M., Bartos, J. A., Yannopoulos, D., Riess, M. L. Poloxamer 188 protects isolated adult mouse cardiomyocytes from reoxygenation injury. Pharmacology Research & Perspectives. 8 (6), 00639(2020).
  7. Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. Cell biology of ischemia/reperfusion injury. International Review of Cell and Molecular Biology. 298, 229-317 (2012).
  8. Martindale, J. J., Metzger, J. M. Uncoupling of increased cellular oxidative stress and myocardial ischemia reperfusion injury by directed sarcolemma stabilization. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 67, 26-37 (2014).
  9. vander Meer, A. D., Orlova, V. V., ten Dijke, P., vanden Berg, A., Mummery, C. L. Three-dimensional co-cultures of human endothelial cells and embryonic stem cell-derived pericytes inside a microfluidic device. Lab on a Chip. 13, 3562-3568 (2013).
  10. Bidarra, S. J., et al. Phenotypic and proliferative modulation of human mesenchymal stem cells via crosstalk with endothelial cells. Stem Cell Research. 7, 186-197 (2011).
  11. Campbell, J. J., Davidenko, N., Caffarel, M. M., Cameron, R. E., Watson, C. J. A multifunctional 3D co-culture system for studies of mammary tissue morphogenesis and stem cell biology. PloS One. 6, 25661(2011).
  12. Mehes, E., Mones, E., Nemeth, V., Vicsek, T. Collective motion of cells mediates segregation and pattern formation in co-cultures. PloS One. 7, 31711(2012).
  13. Miki, Y., et al. The advantages of co-culture over mono cell culture in simulating in vivo environment. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 131 (3-5), 68-75 (2012).
  14. Moraes, C., Mehta, G., Lesher-Perez, S. C., Takayama, S. Organs-on-a-chip: a focus on compartmentalized microdevices. Annals of Biomedical Engineering. 40 (6), 1211-1227 (2012).
  15. Campbell, J., Davidenko, N., Caffarel, M., Cameron, R., Watson, C. A multifunctional 3D co-culture system for studies of mammary tissue morphogenesis and stem cell biology. PLoS One. 6, 25661(2011).
  16. Wu, M. H., Huang, S. B., Lee, G. B. Microfluidic cell culture systems for drug research. Lab on a Chip. 10, 939-956 (2010).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

LDHIn Vitro

מאמרים קשורים