מאמר שיטה

מודל דימום טרנסקציה של וריד זנב בהמופיליה מורדמת לחלוטין עכברים

DOI:

10.3791/62952

⸱

30 בספטמבר 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Global Drug Discovery, Novo Nordisk A/S, 2Department of Veterinary and Animal Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, 3Department of Biomedical Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, 4Independent consultant, 5Catalyst Biosciences, 6Værløse Dyreklinik

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודל הדימום של זנב זנב מעודן (TVT) בעכברים מורדמים הוא שיטת in vivo רגישה להערכת דימום המופילי. מודל דימום TVT ממוטב זה משתמש באובדן דם ובזמן דימום כנקודות קצה, תוך זיקוק מודלים אחרים והימנעות ממוות כנקודת קצה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודלים של דימום זנב הם כלים חשובים בחקר המופיליה, במיוחד להערכת השפעות פרו-קרישיות. מודל ההישרדות של טרנסקציה של ורידי זנב (TVT) הועדף במסגרות רבות בשל רגישות למינונים רלוונטיים מבחינה קלינית של FVIII, בעוד שמודלים מבוססים אחרים, כגון מודל קליפ הזנב, דורשים רמות גבוהות יותר של תרכובות פרוקו-קרישיות. כדי להימנע משימוש בהישרדות כנקודת קצה, פיתחנו מודל TVT המבסס איבוד דם וזמן דימום כנקודות קצה והרדמה מלאה במהלך הניסוי כולו. בקצרה, עכברים מורדמים ממוקמים כאשר הזנב שקוע במי מלח ממוזגים (37 מעלות צלזיוס) ומנונים עם תרכובת הבדיקה בווריד הזנב הצדדי הימני. לאחר 5 דקות, וריד הזנב הצדדי השמאלי עובר טרנסקט באמצעות מדריך תבנית, הזנב מוחזר למלח, וכל פרקי הדימום מנוטרים ומתועדים במשך 40 דקות תוך כדי איסוף הדם. אם לא מתרחש דימום במשך 10 דקות, 20 דקות או 30 דקות לאחר הפציעה, הקריש מאותגר בעדינות על ידי ניגוב החתך פעמיים עם ספוגית גזה רטובה. לאחר 40 דקות, איבוד הדם מכמת על ידי כמות המוגלובין שמדמם לתוך המלח. הליך מהיר ופשוט יחסית זה גורם לדימומים עקביים הניתנים לשחזור. בהשוואה למודל ההישרדות של TVT, הוא משתמש בהליך הומני יותר מבלי לפגוע ברגישות להתערבות פרמקולוגית. יתר על כן, ניתן להשתמש בשני המינים, מה שמקטין את המספר הכולל של בעלי החיים שיש לגדל, תוך שמירה על עקרונות ה-3R's. מגבלה פוטנציאלית במודלים של דימום היא האופי הסטוכסטי של המוסטזיס, אשר יכול להפחית את יכולת השכפול של המודל. כדי להתמודד עם זה, הפרעה ידנית לקריש מוודאת שהקריש מאותגר במהלך הניטור, ומונעת מהמוסטזיס ראשוני (טסיות דם) לעצור את הדימום. תוספת זו לקטלוג מודלים של פציעה מדממת מספקת אפשרות לאפיין השפעות פרו-קרישיות באופן סטנדרטי והומני.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודלים של בעלי חיים חיוניים להבנת הפתוגנזה של המופיליה ולפיתוח ובדיקה של משטרי טיפול וטיפולים. עכבר הנוק-אאוט פקטור VIII (F8-KO) הוא מודל נפוץ לחקר המופיליה A 1,2. עכברים אלה מסכמים תכונות מרכזיות של המחלה ונמצאים בשימוש נרחב לפיתוח טיפולים, כגון מוצרי FVIII רקומביננטיים 3,4,5 ואסטרטגיות ריפויגנטי 6,7.

ישנם מודלים שונים של פציעת דימום להערכת ההשפעות הפרמקולוגיות של תרכובות המוסטטיות שונות in vivo. אחד ממודלים אלה של קרישה הוא מודל ההישרדות של טרנסאקציה של ורידי זנב בעכברים 8,9,10,11,12,13,14, המודד את יכולתם של עכברים המופיליים לשרוד אקסנגווינציה לאחר טרנסקציה של הזנב. שיטה זו הוצגה לפני יותר מארבעה עשורים לפני15 ועדיין נעשה בה שימוש 9,16,17. עם זאת, המודל מנצל את ההישרדות כנקודת קצה ודורש תצפית על בעלי החיים במשך תקופה של עד 24 שעות, שבמהלכה בעלי החיים בהכרה ולכן יכולים לחוות כאב ומצוקה.

מודלים של דימום של משך זמן קצר יותר ותחת הרדמה מלאה תוארו בעבר, כגון מודל קליפ הזנב (הידוע גם בשם קצה הזנב)8,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28 . עם זאת, לצורך נורמליזציה מלאה של אובדן הדם לאחר אתגר הדימום, מודלים אלה דורשים מינונים של תרכובות פרו-קרישיות (למשל, FVIII) גבוהות בהרבה מאלו שניתנו קלינית29. מודל פציעה אחר בהרדמה, שיטת הדימום של הווריד saphena, רגיש למינונים נמוכים יותר של תרכובות פרוקו-קרישיות30 אך דורש רמה גבוהה של התערבות נסיינית מכיוון שיש לשבש את הקרישים לעתים קרובות (בניגוד ל-3 פעמים במודל המוצג).

סטנדרטיזציה לקראת פרוטוקול משותף לבדיקת תרכובות פרוקו-קרישיות חדשות תקל מאוד על השוואת נתונים בין מעבדות 31,32,33. במודלים של TVT, אין עדיין הסכמה משותפת על נקודות קצה שנחקרו (איבוד דם 7,26, זמן דימום 9,34 ושיעור הישרדות35,36), ואורך הניסוי משתנה בין מחקרים13.

המטרה העיקרית שלנו היא לתאר ולאפיין מודל אופטימלי עם יכולת שכפול גבוהה, את האפשרות ללמוד לפי דרישה כמו גם טיפול מניעתי, רגישות להתערבות פרמקולוגית המקבילה למודל ההישרדות, אך לא להשתמש במוות או כמעט מוות כנקודות קצה. על מנת להפחית את הכאב והמצוקה, בעלי החיים לא צריכים להיות בהכרה במהלך הדימום ויש ליישם נקודת קצה אתית יותר37.

דגמי קליפס זנב נערכים בדרך כלל באחת משתי גרסאות, או קטיעת קצה הזנב, למשל, קטיעה של 1-5 מ"מ 18,19,20,20,21,23,24 או, בגרסה חמורה יותר, קטיעת קוטר זנב סביב 1-3 מ"מ 8,22,25 . זה גורם לדימום עורקי משולב, שכן הוורידים הצדדיים והגבריים והעורק הגחוני מנותקים בדרך כלל, ובאופן כללי, ככל שהקטיעה גדולה יותר, כך הרגישות לתרכובת פרוקו-קרישית נמוכה יותר. יתר על כן, מכיוון שקצה הזנב נקטע, הפגיעה העורקית נחשפת ללא כל רקמה מנוגדת; לכן, לפחות בתיאוריה, הוא שונה מהדימומים ההמופיליים הנפוצים ביותר.

כפי שהשם מרמז, רק הווריד נפגע במודלים של טרנסקציה של וריד זנב כמו המתואר במאמר זה, וכתוצאה מכך נוצר דימום ורידי בלבד. מכיוון שהכלי אינו מנותק לחלוטין, הפציעה צפויה להיות קטנה יותר מאשר במודלי הקטיעה, והרקמה סביב החתך, שקריש עשוי לדבוק בה, נשמרת. בנוסף, יש לחץ דם נמוך יותר בווריד לעומת העורק. גורמים אלה תורמים לרגישות מוגברת ביחס למודלים של קטיעה, כך שניתן להשיג נורמליזציה של דימום עם מינונים רלוונטיים מבחינה קלינית של טיפול חלופי, למשל, עם rFVIII בהמופיליה A, אשר שימושי להערכת הגודל והעמידות של ההשפעות של טיפול פרוקו-קרישי 26,38,39.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים המתוארים בפרוטוקול זה אושרו על ידי הגוף לרווחת בעלי חיים ב- Novo Nordisk A/S, והפיקוח הדני על ניסויים בבעלי חיים, משרד המזון, החקלאות והדיג הדני. שיטת 40 הדקות הממוטבת כוללת הרדמה וזמן מינון בתכנון (איור 1). עכברים המופיליים משני המינים בין 10-16 שבועות נדרשים להליך זה.

1. הכנות לפני המחקר

  1. הכן את פתרונות המינון בריכוזים הנכונים.
  2. התחילו את אמבט המים וחממו עד 37 מעלות צלזיוס. מלאו את צינורות הצנטריפוגה של 15 מ"ל לאיסוף דם במי מלח (0.9% NaCl).
  3. מניחים את צינורות המלח של 15 מ"ל בחורים בלוח הבסיס המחומם לפחות 15 דקות לפני תחילת הניסוי.
  4. זהה את העכברים ותעד את משקלם. הימנעו מטיפול בעכברים יותר מהנדרש מכיוון שהדבר עלול לגרום ללחץ ולהשפיע על המחקר.
  5. הכינו את תחנת העבודה במכסה האדים לפני שתמשיכו כך שהכל יהיה בהישג יד: מפיות, מחזיק זנב, גזה, מזרקים, אזמלים, שעוני עצר ונייר סימון זרימת דם.
  6. מניחים את סימן הזנב וחותכים בלוקים על צלחת החימום - בלוקים קרים יגרמו לוורידים להתכווץ ובכך להשפיע על הדימום.

2. הרדמה

  1. לבצע את הליך ההרדמה איזופלורן בתוך מכסה אדים.
  2. הגדר את מכשיר אידוי הגז ל-5% איזופלורן בתחילה ב-30% O2/70% N2O בתא ההרדמה עם זרימה של 1 ליטר לדקה. אפשר מספיק זמן עד שתא ההרדמה יתמלא (כ-5 דקות בהתאם לנפח התא ולקצב זרימת הגז). הקפידו על אינדוקציה מהירה (פחות מדקה אחת).
  3. מניחים את העכברים בתא ההרדמה עד שהם מאבדים את הכרתם.
    הערה: זה אמור להתרחש תוך דקה או פחות אם החדר מלא מספיק.
  4. הבטיחו הרדמה נכונה על ידי היעדר תגובה כואבת לרפלקס הדוושה (צביטה חזקה בבוהן).
  5. הניחו את העכברים על צלחת החימום, וודאו שהאף נמצא בקונוס האף.
  6. הפחיתו את ההרדמה לרמת תחזוקה של 2% איזופלורן ב-30% O2/70% N2O והניחו כיסוי פלסטיק מעל העכברים כדי להפחית את אובדן החום. יש למרוח משחה מתאימה לעיניים כדי למנוע יובש בהרדמה.
  7. סמן את הזנב בקוטר של 2.5 מ"מ באמצעות בלוק סימן הזנב. אל תכריחו את הזנב לתוך החריץ שבגוש - הוא חייב להתאים בנוחות (איור משלים 1)
  8. מניחים את הזנב בצינור המלוח למשך 5 דקות לפחות כדי להבטיח וריד זנב חם האופטימלי למינון תוך ורידי (כלומר).

3. מינון של פתרון בדיקה

  1. מניחים עכבר אחד במחזיק הזנב עם האף במסכת הרדמה.
  2. מנה את החיה עם תרכובת העניין (במקרה זה, rFVIII) ומיד להפעיל את שעון העצר (t = 0).
  3. הניחו את העכבר בחזרה על צלחת החימום עם הזנב בצינור המלוח. חזור על ההליך עם העכברים האחרים.

4. ביצוע טרנסקציה של ורידים בזנב

  1. בצע את הטרנסקציה של וריד הזנב בדיוק 5 דקות לאחר המינון. מניחים את הזנב בבלוק החיתוך ומסובבים 90° כדי לחשוף את הווריד (איור משלים 2).
  2. בצעו את החתך בצד הנגדי/וריד שממנו הונחה תמיסת הבדיקה.
  3. ציירו את להב האזמל מספר 11 דרך החריץ של גוש החיתוך המחזיק את הזנב כדי ליצור דימום. אפס את שעון העצר והחזיר את הזנב מיד למלח.

5. זמן תצפית ואתגרים

  1. שימו לב לדימום וביארו את ההתחלה והעצירה של הדימום במשך 40 דקות; לבאר אותו על נייר סימון זרימת הדם.
    הערה: הערכה חזותית זו של דימום עשויה להשתנות מעט עקב הסובייקטיביות.
  2. הדימום הראשוני חייב להיפסק תוך 3 דקות לאחר ביצוע החתך. אם זה לא המקרה, לפסול את העכבר, להרדים ולהחליף (אי עצירת הדימום הראשוני יכול להצביע על פציעה חמורה מדי או היעדר המוסטזיס ראשוני, כמו בעכברי vWF KO).
  3. אם אין דימום ב-10 דקות, 20 דקות ו-30 דקות לאחר הפציעה, קראו תיגר על חתך הזנב כמתואר בשלבים 4-5.
  4. השתמשו במטוש גזה ספוג במי מלח חמים מצינור נפרד שנשמר באמבט המים. הרימו את הזנב מתוך המלוח ונגבו ברכות פעמיים עם הגזה הרטובה בכיוון דיסטלי מעל חתך הזנב.
  5. לאחר כל אתגר, מיד להטביע מחדש את הזנב לתוך צינור מלוח שוב.
  6. בשעה 40 דקות, עצרו את איסוף הדם על ידי הסרת הזנב מהצינור המלוח.

6. דגימת דם

  1. לאחר t = 40 דקות, קבל דגימות דם מהווריד הסופראורביטלי.

7. המתת חסד

  1. להרדים את העכברים על ידי נקע צוואר הרחם בעודם עדיין בהרדמה מלאה.

8. טיפול בדגימות

  1. צנטריפוגה צינורות איסוף הדם 15 מ"ל עם מלח ב 4000 x g במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
  2. השליכו את הסופרנאטנט מצינורות ה-15 מ"ל, החזירו את הכדור ב-2-14 מ"ל של תמיסת ליסינג אריתרוציטים (RBC), ואז דיללו אותה עד שתגיע לצבע קפה בהיר.
  3. שים לב לנפח הכולל (נפח הדם + נפח של אריתרוציטים (RBC) תמיסת שינון שנוספו באמצעות סימני הסיום על הצינור).
  4. מעבירים 2 מ"ל של הדילול לצינור המוגלובין ומכניסים אותו למקרר עד לניתוח ההמוגלובין.
  5. קבע את אובדן הדם על ידי מדידת ריכוז ההמוגלובין במי מלח. מדוד את הספיגה ב- 550 ננומטר על קורא מיקרו-פלטה (טבלת חומרים).
  6. המר את הספיגה להמוגלובין nmol באמצעות עקומה סטנדרטית שהוכנה מהמוגלובין אנושי (טבלת חומרים) ונכונה לדילול עם תמיסת ליסינג RBC.

9. ניתוחים סטטיסטיים

  1. נתח את הנתונים באמצעות תוכנה מתאימה. כאן נעשה שימוש בתוכנת פריזמה GraphPad. על פני מגוון מחקרים, השיטות הסטטיסטיות הבאות נמצאו כבעלות ביצועים טובים.
    הערה: כדי לנתח אובדן דם, זמן דימום, חשיפה, ספירת טסיות דם והמטוקריט; נעשה שימוש במבחן בראון-פורסייט ו-ANOVA וולש, (מכיוון שהנתונים היו רציפים אך ללא הומוגניות שונות של השאריות) תוך יישום המבחן של דאנט כדי להתאים את עצמו להשוואות מרובות. בדיקה של פירסון שימשה לבדיקת קורלציות בין זמן הדימום, איבוד הדם והמינונים. כדי לקבוע ערכי ED50 , משוואת תגובה של ארבעה פרמטרים של יומן הפוך (מינון) הותאמה לנתוני דימום ואיבוד דם. כדי לנתח את האפקט המגדרי, נעשה שימוש במבחן ANOVA דו-כיווני, תוך יישום תיקון בונפרוני כדי להתאים את עצמו להשוואות מרובות. רמת המובהקות הוגדרה כ-P < 0.05. הנתונים מוצגים כאמצעים ± SEM.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי להעריך את הישימות של המודל הממוטב, בוצע מחקר בעכברי F8-KO (רקע גנטי C57BL) שניתנו עם טיפול חלופי של גורם רקומביננטי VIII הזמין מסחרית (rFVIII); נבדקו ארבעה מינונים שונים: 1 IU/kg, 5 IU/kg, 10 IU/kg ו-20 IU/kg. יתר על כן, בדקנו את בקרת הרכב המתאימה (שלילית) בעכברי F8-KO ובקבוצות מסוג פרא (WT) תוך שימוש בעכברי C57BL כקבוצת ביקורת חיובית כדי להעריך את טווח התגובה בדגם.

בעקבות הפרוטוקול הממוטב, חלה ירידה משמעותית באיבוד הדם עבור קבוצות טיפול rFVIII בהשוואה לקבוצת הרכב. בנוסף, נצפתה ירידה בזמן ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לשיטה אופטימלית זו של טרנסקציה של ורידי זנב (TVT) יש מספר יתרונות בהשוואה לשיטת ההישרדות של TVT. בעלי החיים מורדמים לחלוטין במשך כל משך המחקר, מה שהופך את הטיפול בעכברים לקל יותר ומגביר את רווחת בעלי החיים. יתר על כן, בניגוד למודל ההישרדות של TVT, אין צורך בתצפית לילה, ומודל מותאם זה מציע את האפשרות למדוד את איבוד הדם ולצפות בזמן הדימום המדויק במשך 40 דקות. כמו כן, תקופות ארוכות יותר של דימום בבעלי חיים בהכרה עלולות לגרום למוות על ידי אקסנגווינציה, מה שמוביל לכאב ולמצוקה אצל בעלי החיים וכנראה ללחץ, מה שעלול לגרום לעלייה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים הם או היו עובדים ו /או בעלי מניות של נובו נורדיסק A/S בזמן ביצוע מחקר זה.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אסתר בלום ותומס ניגארד מוכרים כתומכים במדידות של FVIII בפלזמה. בו אלסטד מוכר בזכות ציור ועיבוד שבבי של התבנית וחיתוך בלוקים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
#11 להב אזמלSwann-Morton503
צינורות צנטריפוגה 15 מ"לGreiner Bio-One, אוסטריה188271
מחטים 30 גרם המחוברות ל-300 ומיקרו; L מזרקים מדויקים (אינסולין) למינוןBD Micro-Fine + U-100 מזרק אינסולין320830
AdvateTakeda, יפןטיפול תחליפי רקומביננטי בפקטור VIII (rFVIII)
רפידות אלכוהול 70% אתנולהרטמן, רך זלין999 979
צנטריפוגהאומניפוגה 2.0 RS, תבנית חיתוך Heraus Sepatech
(נירוסטה)בייצור עצמי, אתה מוזמן ליצור קשר עם המחברים לקבלת השרטוטים המדויקיםאיור משלים 2: מפרט גודל: 20 מ"מ x 40 מ"מ x 10 מ"מ (L x B x H). חריץ: עומק 3 מ"מ ורוחב 3 מ"מ; רדיוס 1.5 מ"מ
תמיסת ליזינג אריתרוציטים (RBC)Lysebio, ABX Diagnostics906012
מנתח המטולוגיגזה
מנורת חימום על מעמדפיליפסIR250
כרית חימום עם תרמוסטטCMAדגם 150
תקנים ובקרות המוגלובין - 8.81 מילימול / ליטר HemoCue תלוי אצווה,דנמרק כיול HemoCue, 707037תקנים ובקרות עשויים מ-2 כוסות שונות של כיול HemoCue. הערך נקבע כנגד שיטת הייחוס הבינלאומית להמוגלובין (ICSH).
מערכת הרדמה איזופלואורן עם צינורות, מסכות וקופסת אינדוקציהסיגמא דלתא דמקה
איזופלורןבקסטר26675-46-7
זכוכית מגדלת עם אורותשל אשנבאך
(אלומיניום)בייצור עצמי, אתם מוזמנים ליצור קשר עם המחברים לקבלת הציורים המדויקיםאיור משלים 1: מפרטי גודל: 20 מ"מ x 40 מ"מ x 10 מ"מ (L x B x H). חריץ: עומק 2.5 מ"מ ורוחב 2.5 מ"מ; רדיוס 1.25 מ"מ
מיקרופיפטות + טיפיםFinnpipette
PhotometerMolecular Devices Corporation, CA, ארה"בSpectraMax 340 פוטומטר
פריזמה תוכנהGraphPad, סן דייגו, קליפורניה, ארה"בגרסה 9.0.1
מי מלח 0.9%NaCl Fresenius Kabi, שוודיה883264
בלוק סמן זנב מיוחד לחיתוךזנב TVT
זנב
יניקת נוזל ואקוםנוחות ואקו-בטוחה, אמבט מים IBS
ותרמוסטטTYP 3/8 Julabo
Sysmex CT-2000iv תבנית מדידה מחזיק

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bi, L., et al. Targeted disruption of the mouse factor VIII gene produces a model of haemophilia A. Nature Genetics. 10 (1), 119-121 (1995).
  2. Bi, L., et al. Further characterization of factor VIII-deficient mice created by gene targeting: RNA and protein studies. Blood. 88 (9), 3446-3450 (1996).
  3. Stennicke, H. R., et al. A novel B-domain O-glycoPEGylated FVIII (N8-GP) demonstrates full efficacy and prolonged effect in hemophilic mice models. Blood. 121 (11), 2108-2116 (2013).
  4. Shapiro, A. D. Anti-hemophilic factor (recombinant), plasma/albumin-free method (octocog-alpha; ADVATE) in the management of hemophilia A. Vascular Health and Risk Management. 3 (5), 555-565 (2007).
  5. Recht, M., et al. Clinical evaluation of moroctocog alfa (AF-CC), a new generation of B-domain deleted recombinant factor VIII (BDDrFVIII) for treatment of haemophilia A: demonstration of safety, efficacy, and pharmacokinetic equivalence to full-length recombinant factor VIII. Haemophilia. 15 (4), 869-880 (2009).
  6. Miao, C. H., et al. CD4+FOXP3+ regulatory T cells confer long-term regulation of factor VIII-specific immune responses in plasmid-mediated gene therapy-treated hemophilia mice. Blood. 114 (19), 4034-4044 (2009).
  7. Milanov, P., et al. Engineered factor IX variants bypass FVIII and correct hemophilia A phenotype in mice. Blood. 119 (2), 602-611 (2012).
  8. Dumont, J. A., et al. Prolonged activity of a recombinant factor VIII-Fc fusion protein in hemophilia A mice and dogs. Blood. 119 (13), 3024-3030 (2012).
  9. Pan, J., et al. Enhanced efficacy of recombinant FVIII in noncovalent complex with PEGylated liposome in hemophilia A mice. Blood. 114 (13), 2802-2811 (2009).
  10. Liu, T., et al. Improved coagulation in bleeding disorders by Non-Anticoagulant Sulfated Polysaccharides (NASP). Journal of Thrombosis and Haemostasis. 95 (1), 68-76 (2006).
  11. Brooks, A. R., et al. Glycoengineered factor IX variants with improved pharmacokinetics and subcutaneous efficacy. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 11 (9), 1699-1706 (2013).
  12. Baru, M., et al. Factor VIII efficient and specific non-covalent binding to PEGylated liposomes enables prolongation of its circulation time and haemostatic efficacy. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 93 (6), 1061-1068 (2005).
  13. Molina, E. S., Fujita, A., Sogayar, M. C., Demasi, M. A. A quantitative and humane tail bleeding assay for efficacy evaluation of antihaemophilic factors in haemophilia A mice. Haemophilia. 20 (6), 392-398 (2014).
  14. Broze, G. J., Yin, Z. F., Lasky, N. A tail vein bleeding time model and delayed bleeding in hemophiliac mice. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 85 (4), 747-748 (2001).
  15. Dejana, E., Callioni, A., Quintana, A., de Gaetano, G. Bleeding time in laboratory animals. II - A comparison of different assay conditions in rats. Thrombosis Research. 15 (1-2), 191-197 (1979).
  16. Girard, T. J., Lasky, N. M., Grunz, K., Broze, G. J. Suppressing protein Z-dependent inhibition of factor Xa improves coagulation in hemophilia A. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 17 (1), 149-156 (2019).
  17. Zhang, J. P., et al. Curing hemophilia A by NHEJ-mediated ectopic F8 insertion in the mouse. Genome Biology. 20 (1), 276(2019).
  18. Sambrano, G. R., Weiss, E. J., Zheng, Y. W., Huang, W., Coughlin, S. R. Role of thrombin signalling in platelets in haemostasis and thrombosis. Nature. 413 (6851), 74-78 (2001).
  19. Tranholm, M., et al. Improved hemostasis with superactive analogs of factor VIIa in a mouse model of hemophilia A. Blood. 102 (10), 3615-3620 (2003).
  20. Mei, B., et al. Rational design of a fully active, long-acting PEGylated factor VIII for hemophilia A treatment. Blood. 116 (2), 270-279 (2010).
  21. Karpf, D. M., et al. Prolonged half-life of glycoPEGylated rFVIIa variants compared to native rFVIIa. Thrombosis Research. 128 (2), 191-195 (2011).
  22. Ivanciu, L., et al. A zymogen-like factor Xa variant corrects the coagulation defect in hemophilia. Nature Biotechnology. 29 (11), 1028-1033 (2011).
  23. Ostergaard, H., et al. Prolonged half-life and preserved enzymatic properties of factor IX selectively PEGylated on native N-glycans in the activation peptide. Blood. 118 (8), 2333-2341 (2011).
  24. Maroney, S. A., et al. Absence of hematopoietic tissue factor pathway inhibitor mitigates bleeding in mice with hemophilia. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (10), 3927-3931 (2012).
  25. Holmberg, H. L., Lauritzen, B., Tranholm, M., Ezban, M. Faster onset of effect and greater efficacy of NN1731 compared with rFVIIa, aPCC and FVIII in tail bleeding in hemophilic mice. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 7 (9), 1517-1522 (2009).
  26. Johansen, P. B., Tranholm, M., Haaning, J., Knudsen, T. Development of a tail vein transection bleeding model in fully anaesthetized haemophilia A mice - characterization of two novel FVIII molecules. Haemophilia. 22 (4), 625-631 (2016).
  27. Ferrière, S., et al. A hemophilia A mouse model for the in vivo assessment of emicizumab function. Blood. 136 (6), 740-748 (2020).
  28. Elm, T., et al. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of a new recombinant FVIII (N8) in haemophilia A mice. Haemophilia. 18 (1), 139-145 (2012).
  29. Björkman, S. Prophylactic dosing of factor VIII and factor IX from a clinical pharmacokinetic perspective. Haemophilia. 9, Suppl 1 101-108 (2003).
  30. Pastoft, A. E., et al. A sensitive venous bleeding model in haemophilia A mice: effects of two recombinant FVIII products (N8 and Advate). Haemophilia. 18 (5), 782-788 (2012).
  31. Saito, M. S., et al. New approaches in tail-bleeding assay in mice: improving an important method for designing new anti-thrombotic agents. International Journal of Experimental Pathology. 97 (3), 285-292 (2016).
  32. Liu, Y., Jennings, N. L., Dart, A. M., Du, X. J. Standardizing a simpler, more sensitive and accurate tail bleeding assay in mice. World Journal of Experimental Medicine. 2 (2), 30-36 (2012).
  33. Greene, T. K., et al. Towards a standardization of the murine tail bleeding model. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 8 (12), 2820-2822 (2010).
  34. Cerullo, V., et al. Correction of murine hemophilia A and immunological differences of factor VIII variants delivered by helper-dependent adenoviral vectors. Molecular Therapy. 15 (12), 2080-2087 (2007).
  35. Shi, Q., et al. Factor VIII ectopically targeted to platelets is therapeutic in hemophilia A with high-titer inhibitory antibodies. Journal of Clinical Investigation. 116 (7), 1974-1982 (2006).
  36. Parker, E. T., Lollar, P. A quantitative measure of the efficacy of factor VIII in hemophilia A mice. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 89 (3), 480-485 (2003).
  37. Stokes, W. S. Reducing Unrelieved Pain and Distress in Laboratory Animals Using Humane Endpoints. ILAR Journal. 41 (2), 59-61 (2000).
  38. Stagaard, R., et al. Abrogating fibrinolysis does not improve bleeding or rFVIIa/rFVIII treatment in a non-mucosal venous injury model in haemophilic rodents. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 16 (7), 1369-1382 (2018).
  39. Stagaard, R., et al. Absence of functional compensation between coagulation factor VIII and plasminogen in double-knockout mice. Blood Advances. 2 (22), 3126-3136 (2018).
  40. Bolton-Maggs, P. H., Pasi, K. J. Haemophilias A and B. Lancet. 361 (9371), 1801-1809 (2003).
  41. Lloyd Jones, M., Wight, J., Paisley, S., Knight, C. Control of bleeding in patients with haemophilia A with inhibitors: a systematic review. Haemophilia. 9 (4), 464-520 (2003).
  42. Sixma, J. J., vanden Berg, A. The haemostatic plug in haemophilia A: a morphological study of haemostatic plug formation in bleeding time skin wounds of patients with severe haemophilia A. British Journal of Haematology. 58 (4), 741-753 (1984).
  43. Proulle, V., et al. Recombinant activated factor VII-induced correction of bleeding tendency in genetically engineered von Willebrand disease type 2B mice evaluated using new tail transection bleeding models. International Society on Thrombosis and Haemostasis Congress. , (2017).
  44. Rode, F., et al. Preclinical pharmacokinetics and biodistribution of subcutaneously administered glycoPEGylated recombinant factor VIII (N8-GP) and development of a human pharmacokinetic prediction model. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 16 (6), 1141-1152 (2018).
  45. Holmberg, H., et al. GlycoPEGylated rFVIIa (N7-GP) has a prolonged hemostatic effect in hemophilic mice compared with rFVIIa. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 9 (5), 1070-1072 (2011).
  46. Kawecki, C., et al. Posters Abstracts - Thrombin-mediated Activation of Factor VIII is Insufficient to Produce All Necessary Cofactor Activity in vivo. Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 3, 1(2019).
  47. Johansen, P., et al. In vivo effect of recombinant FVIIA (NOVOSEVEN®) and RFIX in a refined tail vein transection bleeding model in mice with haemophilia A and B: PO147-MON. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 13, (2015).
  48. Enoksson, M., et al. Enhanced potency of recombinant factor VIIa with increased affinity to activated platelets. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 18 (1), 104-113 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

VIII

מאמרים קשורים