הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

במבחנה עיכול תחליבים בטיפה אחת באמצעות החלפה רב-פאזית של נוזלי מערכת העיכול המדומים

3.3K צפיות

DOI:

10.3791/64158

18 בנובמבר 2022

במאמר זה

סיכום

איזון יריעת פני השטח של התליון המיושם עם החלפה מרובת תת-פאזות, המכונה OCTOPUS, מאפשר לחקות את תנאי העיכול על ידי החלפת תת-פאזה רציפה של התמיסה המקורית בתפזורת עם נוזלים מדומים במערכת העיכול. העיכול המדומה במבחנה מנוטר על ידי רישום באתרו של המתח הבין-פאזי של השכבה הבין-מרחבית המעוכלת.

תקציר

תחליבים משמשים כיום כדי לתמצת ולספק חומרים מזינים ותרופות כדי להתמודד עם מצבים שונים במערכת העיכול כגון השמנת יתר, העשרת חומרים מזינים, אלרגיות למזון ומחלות עיכול. היכולת של תחליב לספק את הפונקציונליות הרצויה, כלומר, להגיע לאתר מסוים במערכת העיכול, לעכב / מעכב ליפוליזה, או להקל על העיכול, בסופו של דבר תלוי ברגישות שלו לפירוק אנזימטי במערכת העיכול. בתחליבי שמן במים, טיפות השומנים מוקפות בשכבות בין-אישיות, שבהן המתחלבים מייצבים את התחליב ומגנים על התרכובת העטופה. השגת יכולת עיכול מותאמת אישית של תחליבים תלויה בהרכב הראשוני שלהם, אך דורשת גם מעקב אחר האבולוציה של אותן שכבות בין-פאזיות מכיוון שהן נתונות לשלבים שונים של עיכול במערכת העיכול. איזון סרט שטח של טיפת תליון המיושם עם החלפה מרובת תת-פאזות מאפשר לדמות את העיכול במבחנה של תחליבים בטיפה מימית אחת השקועה בשמן על ידי יישום מודל עיכול סטטי מותאם אישית. המעבר דרך מערכת העיכול מחוקה על ידי החלפת תת-פאזה של תמיסת התפזורת המקורית של הטיפות עם מדיה מלאכותית, המחקה את התנאים הפיזיולוגיים של כל תא/שלב במערכת העיכול. האבולוציה הדינמית של המתח הבין-תאי נרשמת באתרה לאורך כל העיכול המדומה של מערכת העיכול. התכונות המכניות של ממשקים מעוכלים, כגון גמישות מורחבת בין-פאזית וצמיגות, נמדדות לאחר כל שלב עיכול (דרך הפה, הקיבה, המעי הדק). ניתן לכוונן את ההרכב של כל מדיה במערכת העיכול כדי להסביר את המאפיינים של תנאי העיכול, כולל פתולוגיות במערכת העיכול ומדיה העיכול של התינוק. המנגנונים הבין-פאזיים הספציפיים המשפיעים על פרוטאוליזה וליפוליזה מזוהים, ומספקים כלים לווסת את העיכול על ידי הנדסה בין-פאזית של תחליבים. ניתן לתמרן את התוצאות המתקבלות לתכנון מטריצות מזון חדשניות עם פונקציות מותאמות אישית כגון אלרגניות נמוכה, צריכת אנרגיה מבוקרת וירידה בעיכול.

מבוא

הבנת אופן העיכול של שומן, הכוללת עיכול תחליבים, חשובה לתכנון רציונלי של מוצרים עם פונקציונליות מותאמת אישית1. המצע לעיכול שומן הוא תחליב שכן השומן מתחלב עם הצריכה על ידי פעולה מכנית וערבוב עם חומרים פעילי שטח ביולוגיים בפה ובקיבה. כמו כן, רוב השומן הנצרך על ידי בני אדם כבר מתחלב (כגון מוצרי חלב), ובמקרה של תינוקות או כמה קשישים, זוהי צורת הצריכה היחידה. לפיכך, העיצוב של מוצרים מבוססי תחליב עם פרופילי עיכול ספציפיים חשוב מאוד בתזונה1. יתר על כן, תחליבים יכולים לעטוף ולספק חומרים מזינים, תרופות או פעילות ביולוגית ליפופילית2 כדי להתמודד עם מצבים שונים במערכת העיכול כגון השמנת יתר3

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. רצף ניקוי לכל כלי הזכוכית המשמשים בניסויים מדעיים על פני השטח

  1. קרצפו את כלי הזכוכית בתמיסת ניקוי מרוכזת (ראו טבלת חומרים) מדוללת במים (10%).
  2. יש לשטוף היטב עם רצף של מי ברז, פרופנול, מים מזוקקים ומים אולטרה-טהורים. יש לייבש בתא ולאחסן בארון סגור עד לשימוש.

2. הכנת דוגמאות

  1. הכינו מדיית עיכול מלאכותית בהתאם לפרוטוקולים המתוקנניםשל INFOGEST 11,20 (ראו טבלת חומרים). לפרטים, ראו טבלה 1 וכללו התאמות קטנות לדרישות העבודה הבין-פאזית למניעת זיהום פעיל של פני השטח ודילול דג....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

חלק זה מציג דוגמאות שונות לפרופילי עיכול שנמדדו באמצעות התמנון. המראה הכללי של התאמות פרופיל העיכול המדומה מוצג באיור 4B. המתח הבין-אישי מיוצג בדרך כלל כנגד הזמן בפרופיל העיכול. שלבי הפאזה/עיכול השונים הנחשבים מיוצגים בצבעים שונים. השלב הראשון יוצר את השכבה הראשונית ומתאים לשלב הספיחה של המתחלב או החלבון/פעילי השטח/הפולימר, בהתאם לכל מקרה. לאחר מכן, נוזלי העיכול השונים מוזרקים על ידי חילופי תת-פאזה לתמיסה בתפזורת המכילה את המדיה החדשה. תת-השלב החדש מייצר שינויים במתח הבין-פאזי של שכבת התחליב.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מאמר זה מתאר פרוטוקול כללי למדידת עיכול במבחנה של שכבות בין-מרחביות באמצעות ציוד להטלת תליון. ניתן להתאים את הפרוטוקול לדרישות הספציפיות של הניסוי על ידי כוונון הרכב מאגרי העיכול, המבוססים על פרוטוקול INFOGEST11,20 הרמוני כדי להקל על ההשוואה לספרות. ניתן להוסיף את אנזימי העיכול והחומרים פעילי השטח בנפרד, ברצף או ביחד. אפשרות אחרונה זו צריכה להתבצע בזהירות שכן הרוויה של השכבה הבין-פאזית תעכב את התופעות השונות על ידי מתן מתח בין-תאי נמוך מאוד ועלולה לגרום .......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי לא ידוע להם על אינטרסים כלכליים מתחרים או על קשרים אישיים שיכלו להשפיע על העבודה המדווחת במאמר זה.

תודות

מחקר זה מומן על ידי פרויקטים RTI2018-101309-B-C21 ו- PID2020-631-116615RAI00, במימון MCIN/AEI/10.13039/501100011033 ועל ידי "ERDF דרך ליצור את אירופה". עבודה זו נתמכה (חלקית) על ידי הקבוצה לפיזיקה ביוקולואידית וזורמים (ref. PAI-FQM115) של אוניברסיטת גרנדה (ספרד).

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלפא-כימוטריפסין מלבלב בקרסיגמא-אולדריץ'C4129אנזים
בטא-לקטוגלובוליןסיגמא-אולדריץ'L0130מתחלב
בקר סרום אלבומיןסיגמא-אולדריץ'9048-46-8מתחלב
CaCl2Sigma-Aldrich10043-52-4
צנטריפוגתקרונטון מכשיריםCentrikon T-124להפרדת שמן ושרפים
פקטין הדריםסיגמא-אולדריץ'P9135מתחלב
קו-ליפאז מלבלב חזירסיגמאC3028אנזים
CONTACTOאוניברסיטת גרנדה (UGR)https://core.ugr.es/dinaten/, גישה אחרונה: 18/07/2022
DINATENאוניברסיטת גרנדה (UGR)https://core.ugr.es/dinaten/, גישה אחרונה: 18/07/2022
ליפאז קיבהLipolytechRGE15-1Gאנזים
סרום אנושי אלבומיןסיגמא-אולדריץ'70024-90-7מתחלב
INFOGESThttp://www.proteomics.ch/IVD/
ליפאז מלבלב חזיר, סוג IIסיגמא-אולדריץ' L33126אנזים
מגנזיום מטסיליקט שרפיםFluka1343-88-0שרפים לטיהור שמן
Micro 90מוצרים בינלאומייםM-9051-04מנקה
NaClSigma7647-14-5אלקטרוליט
NaH2PO4Scharlau10049-21-5להכנת מאגר
OCTOPUSProducciones Cientí ficas y Té cnicas S.L. (Gó צנצנת, ספרד)ציוד טיפת פנדנט מיושם עם החלפת תת-פאזה מרובת שמן
זיתשמן זית סיגמא-אולדריץ'1514
לבלב מלבלב חזירסיגמאP7545-25 גרםאנזים
פפסיןסיגמא-אולדריץ'P6887אנזים
פלורוני F127סיגמאP2443מתחלב
פלורוני F68סיגמאP1300מתחלב
נתרן דאוקסיכולאטסיגמאמלחי מרה
נתרן גליקודוקסיקולאטסיגמאC9910מלחי מרה
נתרן טאורוכולטסיגמא86339מלחי מרה
מסנן מזרקMillex-DPSLGP033R  מסנן מזרק 0.22 ומיקרו; m גודל נקבוביות פוליאתרסולפון
טריפסיןסיגמא-אולדריץ'T1426אנזים
אלקטרוליטים

מקורות

  1. McClements, D. J. The biophysics of digestion: Lipids. Current Opinion in Food Science. 21, 1-6 (2018).
  2. McClements, D. J., Li, Y. Structured emulsion-based delivery systems: Controlling the digestion and release of lipo....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות