מאמר זה מתאר הליך שלב אחר שלב ליצירת מודל של איסכמיה/רפרפוזיה של האשכים לייצור מודל ניתן לשחזור של פיתול האשכים בחקר המנגנונים הפתולוגיים של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה באשכים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מאמר זה מתאר הליך שלב אחר שלב ליצירת מודל של איסכמיה/רפרפוזיה של האשכים לייצור מודל ניתן לשחזור של פיתול האשכים בחקר המנגנונים הפתולוגיים של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה באשכים.
פציעות איסכמיה-רפרפוזיה (IR) קשורות למספר פתולוגיות, כולל פגיעה באשכים. מודלים מוקדמים יותר של בעלי חיים של IR אשכים, הכוללים פיתול חוט הזרע כדי להשיג איסכמיה, רצופים קשיים טכניים רבים המביאים לחוסר יכולת לשחזר את המודל באופן עקבי. לפיכך, אנו מציגים שיטה פשוטה להשראת IR אשכים במודל חולדה שניתן לשכפל בקלות.
שיטה זו כוללת הפרדת הגוברנקולום מהאשך, יצירת כיס שק האשכים, סיבוב האשך ב-720 מעלות בכיוון השעון בקוטב התחתון שלו ועיגון האשך לבסיס שק האשכים. מודל זה מכווץ ביעילות את כלי האשכים וגורם לאיסכמיה באשכים. לאחר שעה אחת של איסכמיה, מסירים את תפר העיגון והאשך לא מסובב. החבל והכלים הנלווים לו נבדקים כדי להבטיח סבלנות. לאחר IR, האשך נאסף ונחתך להערכה היסטופתולוגית.
היסטולוגיה של האשכים נבדקה עבור נגעים דימומיים מוקדיים, גודש בכלי הדם, מרחב אינטרסטיציאלי מורחב וחדירת תאים דלקתיים. יתר על כן, נבדקו סמנים של עקה חמצונית (מלונדיאלדהיד, גלוטתיון מופחת, קטלאז וסופראוקסיד דיסמוטאז), דלקת (MPO, TNF-α, IL-1β) ואפופטוזיס (ביטוי קספאז 3). שיטה זו מספקת מודל פשוט יותר וניתן לשחזור בקלות לחקר הפתופיזיולוגיה של פגיעה ב-IR באשכים. יתרה מכך, מודל זה פותח צוהר לבחינת סוכנים טיפוליים פוטנציאליים בניהול פגיעה ב-IR באשכים.
פיתול האשך (TT) הוא מצב חירום אורולוגי חריף בו חוט הזרע, יחד עם כלי הדם הנלווים אליו, מתפתל, וכתוצאה מכך איסכמיה של האשך. הוא מאופיין בכאבי בטן עזים, בחילות והקאות1. האיסכמיה, אם אינה נפתרת על ידי עיוות בזמן, גורמת לנמק ולאובדן האשך המדובר2. עם זאת, התערבות כירורגית בזמן על ידי התרת פיתול ושיקום זרימת הדם לאשך מביאה לפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה (IRI), מה שגורם לשיבוש היסטולוגי וביוכימי של האשך ותפקודיו 3,4.
מודלים של TT בבעלי חיים שימשו באופן נרחב כדי לחקור את המנגנונים של IRI, הנובעים תמיד מניסיונות למנוע מ-TT להתקדם לנמק 5,6. ישנם שני דגמים של TT, הידוק חוט זרע ופיתול חוט. שניהם מבוצעים בתנאים סטריליים ובהרדמה מספקת. חומרי הרדמה נפוצים בשימוש כוללים קטמין לבד או בשילוב עם קסילזין7. חומרי הרדמה נפוצים אחרים הם אורטן ונתרן תיופנטל, הניתנים בדרךכלל תוך צפק. עם זאת, לשני הדגמים יש מגבלות.
בעוד שהידוק ישיר של עורק האשכים עם קליפסים מיקרו-וסקולריים 8,9 שימש כאמצעי לגרימת איסכמיה למשך זמן מוגדר (בדרך כלל שעה) לפני השראת רפרפוזיה על ידי הסרת המהדקים, השיטה אינה מחקה במדויק את המראה הקליני של פיתול האשך10. יתר על כן, למרות שפיתול כירורגי של חוט הזרע להשגת איסכמיה11,12 מייצג יותר את ההצגה הקלינית, הוא טומן בחובו קשיים טכניים רבים שלא טופלו על ידי התיאורים הקצרים שנתקלו בהם בפרק השיטות של מאמרים בנושא.
קושי טכני מובהק שנתקל בו לעתים קרובות הוא זה של החזרת ועיגון האשך לרצפת שק האשכים כדי למנוע התפרקות בתקופת האיסכמיה. בעוד שחלק מהחוקרים אינם מזכירים את עיגון האשך לדופן שק האשכים13,14, אחרים רושמים עיגון האשך לדופן שק האשכים על ידי תפירת הטוניקה אלבוגינאה אליו 15,16,17. התיאורים של תהליך עיגון האשך לדופן שק האשכים היו, בדרך כלל, קצרים מאוד ולא מפורשים 7,18. ניסיונות לשכפל את ההליכים המתוארים בסעיפי השיטות של מאמרים קודמים נתקלו אפוא בקשיים מעשיים חמורים, כגון פגיעה באשך על ידי ניקוב הטוניקה אלבוגינאה, ואי יכולת להחזיר את האשך לשק האשכים מבלי להפעיל לחץ מיותר. יתר על כן, מבחינה מעשית, החזרת האשך לשק האשכים לאחר גרימת פיתול הייתה אתגר גדול בניסיונותינו לגרום ל-TT ניסיוני בניתוח. קשיים טכניים כאלה הביאו אפוא לחוסר היכולת לשחזר את המודל באופן עקבי בין חוקרים שונים.
לפיכך, ההליך המתואר במחקר זה ליצירת מודל TT בחולדות מזהה את הקשיים הטכניים שנתקלו בהם במודלים קודמים ומציע להם פתרונות. מודל זה מספק טכניקה פשוטה הניתנת לשחזור בקלות ומחקה את החוויה האנושית. המודל הוא, אם כן, נקודת התחלה אמינה וניתנת לשחזור בחקר המנגנונים הפתולוגיים הנובעים מ-IRI.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחקר אושר על ידי ועדת סקירת האתיקה של הפקולטה למדעי הרפואה הבסיסיים, האוניברסיטה הטכנולוגית לדוק אקינטולה, אוגבומוסו, מדינת אויו, ניגריה (ERCFBMSLAUTECH:033/05/2024). למחקר זה נעשה שימוש ב-20 חולדות לבקניות בגילאי 10-12 שבועות ובמשקל 180 ±-10 גרם. הם התאקלמו במשך שבועיים ולאחר מכן, הוקצו באופן אקראי לקבוצה המופעלת על ידי דמה (SO) או לקבוצת פיתול/עיוות (T/D) (n = 10 חולדות לקבוצה). חולדות ה-SO עברו ניתוח דומה, בדיוק כמו חולדות T/D, אך האשכים לא היו מעוותים או מעוגנים כדי לגרום ל-T/D.
1. הכנה והרדמה לפני הניתוח
2. אינדוקציה של איסכמיה של האשך
3. חקירות ביוכימיות והיסטופתולוגיות
הערה: ודא שהחוקרים המבצעים את הבדיקות הביוכימיות והבדיקות ההיסטופתולוגיות עיוורים לפרוטוקול המחקר.
4. ניתוח סטטיסטי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פעילות XO, רמת MDA ופעילויות של SOD, קטלאז ו-GPx באשכים שימשו כסמנים של עקה חמצונית. פיתול/עיוות (T/D) הגדיל באופן ניכר את פעילות ה-XO ואת רמות ה-MDA והפחית את פעילות האשכים של SOD, קטלאז ו-GPx בחולדות T/D בהשוואה לחולדות שעברו ניתוח דמה (איור 1), המתאר את תפקיד העקה החמצונית בפגיעה הנגרמת על ידי T/D.
יתר על כן, TNF-α, מתווך דלקת, ו-MPO, אינדקס של חדירת נויטרופילים, שימשו כסמנים לדלקת. T/D גרם לעליי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה והסרטון הנלווה נותנים תיאור מפורט שלב אחר שלב של האינדוקציה הכירורגית של TT לחקר IRI האשכים באמצעות גישת העיגון. השיטה שימושית במיוחד בכך שהיא מונעת את ההחצנה הממושכת של האשך הנגרמת על ידי טכניקות הידוק7 ובמקביל, מדגמת באופן הדוק יותר את ההצגה הקלינית של TT בבני אדם10,12.
כאשר איסכמיה נקבעה לפרק הזמן שנקבע, מבוצע רפרפוזיה על ידי הסרת תפר חוט הארנק כדי לקבל גישה לאשכים, ה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.
אנו מודים בזאת לעזרתו של מר אוג'נירן, ראש היחידה האודיו-ויזואלית של המכללה למדעי הבריאות, שסייע בצילום ובעריכה של ההליך.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1 cc syringes | לא חל | לא חל | לצורך הרדמה |
| 2-0 chromic suture | לא חל | לא חל | לצורך ניתוח |
| Bard Parker knife handle | לא חל | לא חל | לצורך ניתוח |
| Curved Mosquito artery forceps | לא חל | לא חל | לצורך ניתוח |
| Dissecting scissors | לא חל | לא חל | לצורך ניתוח |
| GraphPad Prism (version 8.0.2) | |||
| Ketamine injection | Swiss Parenterals LTD Gujarat India | 2321154 | הרדמה |
| Paracetamol injection | Shanxi Zhongbao Pharmaceuticals, China | 220637 | משכך כאבים |
| Povidone | JAWA International limited Nigeria | 135S | שטיפה חיטוי |
| Procaine penicillin powder | Anhui Chengshi Pharmaceutical Co Ltd China | 201906 | לצורך ניתוח |
| Surgical blade | לא חל | לא חל | לצורך ניתוח |
| Surgical gloves | Zhenjiang huayang latex products China | 210325 | |
| Stitch scissors | לא חל | לא חל | לצורך ניתוח |
| Toothed dissecting forceps | לא חל | לא חל | לצורך ניתוח |
| Xylazine injection | Bioveta Czech Republic | 396228A | הרדמה |
| Light Microscope | Novel Microscope, China | לא חל | להערכה היסטופתולוגית |
| Digital Camera | Hayear, China | לא חל | להערכה היסטופתולוגית |
| TNF-α kit | Elabscience, USA | E-EL-H0109 | לצורך מבחן |
| Thermo Fischer kit (anti-mouse caspase 3 monoclonal for caspase 3 expression ) | Thermo Fischer Scientific Inc., USA | לא חל | להעברת אימונוהיסטוכימיה (caspase 3) |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.