הידרוקסיל חריע צהוב A (HSYA) מקל על דלקת מפרקים ניוונית בברך על ידי שיפור האוטופגיה וההתפשטות של כונדרוציטים תוך דיכוי אפופטוזיס ודלקת באמצעות עיכוב מסלול HIF-1α/BNIP3.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר מחקר
הידרוקסיל חריע צהוב A (HSYA) מקל על דלקת מפרקים ניוונית בברך על ידי שיפור האוטופגיה וההתפשטות של כונדרוציטים תוך דיכוי אפופטוזיס ודלקת באמצעות עיכוב מסלול HIF-1α/BNIP3.
הפחתת האוטופגיה ברקמת הסחוס קשורה קשר הדוק להתפתחות דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA), אך המנגנונים שבאמצעותם הידרוקסיל חריע צהוב A (HSYA) מפעיל השפעות הגנה נותרו לא מובנים לחלוטין. במחקר זה, כונדרוציטים אנושיים של KOA בודדו והוקצו לקבוצות טיפול שונות, כולל ביקורת רגילה, מודל ריק, HSYA, מעכב גורם השראת היפוקסיה-1α (HIF-1α), משרה אוטופגיה, HSYA בשילוב עם מעכב HIF-1α ו-HSYA בשילוב עם משרה אוטופגיה. ציטוקינים פרו-דלקתיים (IL-1β, TNF-α, IL-6) כומתו על ידי ELISA, ביטוי חלבון של HIF-1α, BNIP3 וסמנים הקשורים לאוטופגיה נבדק על ידי Western Blotting, ושלפוחיות אוטופאגיות במיטוכונדריה הוערכו באמצעות צביעת מונודנסילקדברין ומיקרוסקופ אלקטרונים הולכה. בהשוואה לקבוצת הביקורת הרגילה, קבוצת המודל הריק הראתה רמות מוגברות משמעותית של IL-1β, TNF-α, IL-6 ו-HIF-1α, מלוות בשיעורי אפופטוזיס גבוהים יותר, התפשטות מופחתת והפחתת ויסות של חלבונים הקשורים לאוטופגיה (P < 0.05). טיפול ב-HSYA, מעכב HIF-1α או משרה אוטופגיה הגביר משמעותית את ביטוי החלבון הקשור לאוטופגיה והפחית את רמות הציטוקינים הדלקתיים. יתר על כן, HSYA בשילוב עם מעכב HIF-1α או משרה אוטופגיה יצר את ההשפעות הבולטות ביותר, עם הפחתה ניכרת בשחרור ציטוקינים ואפופטוזיס, יחד עם התפשטות כונדרוציטים מוגברת והיווצרות שלפוחית אוטופאגית מיטוכונדריאלית (P < 0.05). ממצאים אלה מדגימים כי HSYA מפעיל השפעות כונדרו-פרוטקטיביות ב-KOA, לפחות בחלקן, באמצעות עיכוב מסלול HIF-1α/BNIP3, ובכך מקדם אוטופגיה ומחליש פגיעה דלקתית בכונדרוציטים.
כמצב אורטופדי כרוני נפוץ, דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA) משפיעה על אנשים בגיל העמידה וקשישים, ומשפיעה באופן משמעותי על איכות חייהם 1,2. למרות הופעתו הנרחבת, האטיולוגיה המדויקת והמנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס KOA נותרו לא מובנים לחלוטין. יתר על כן, הן למניעה והן לטיפול מרפא מדגיש את הדחיפות לחשוף את היסודות הפתולוגיים המורכבים של מצב זה. תחום אחד של עניין מתעורר הוא תפקידה של אוטופגיה בהומאוסטזיס סחוס, עם עדויות מצטברות המצביעות על כך שאוטופגיה מופחתת בתוך רקמת הסחוס תורמת לניוון שלה ב-KOA 3,4.
לאוטופגיה, תהליך פירוק תאים החיוני לשמירה על הומאוסטזיס תאי, יש חשיבות רבה בתחזוקה ותיקון של סחוס. במיקרו-סביבה ההיפוקסית הנפוצה בתוך סחוס מפרקי, מסלול האיתות של גורם היפוקסיה 1α (HIF-1α)/אדנו-וירוס E1B 19 kDa אינטראקציה חלבון 3 (BNIP3) מתגלה כמווסת מרכזי של אוטופגיה. ביטוי מוגבר של HIF-1α נצפה בחולי KOA, מה שמצביע על כך שחוסר ויסות של מסלול זה עשוי לתרום לפגיעה באוטופגיה ולניוון הסחוס לאחר מכן 5,6,7.
דיקור, מוקה, צמחי מרפא ועיסוי הן ארבע שיטות קלאסיות של הרפואה הסינית המסורתית לטיפול בדלקת מפרקים בברך. הטיפולים הנוכחיים, כגון תרופות נוגדות דלקת שאינן סטרואידיות, זריקות חומצה היאלורונית וניתוח מפרקים, הוכחו כמועילים אך קשורים גםלתופעות לוואי מסוימות. יתר על כן, אין טיפול שגרתי מומלץ לדלקת מפרקים ניוונית בברך. עם הזמן, כטיפול משלים נפוץ ל-KOA, הרפואה הסינית המסורתית (TCM) פיתחה תרופות צמחיות רבות המבטיחות בטיפול ב-KOA9. בין אלה, הידרוקסיל חריע צהוב A זכה לתשומת לב משמעותית בשל תכונותיו האנטי דלקתיות ומווסתות האוטופגיה10,11. עם זאת, המנגנונים המדויקים שבאמצעותם HSYA מפעיל את השפעתו הטיפולית על דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA), במיוחד במונחים של ויסות אוטופגיה דרך מסלול HIF-1α/BNIP3, נותרו לא ברורים. לכן, אנו חוקרים את מנגנון ההשפעות הטיפוליות של HSYA ב-KOA על ידי התמקדות בהשפעתו על אוטופגיה של כונדרוציטים והאינטראקציה שלו עם מסלול HIF-1α/BNIP3. אנו משערים כי HSYA מפחית דלקת מפרקים ניוונית בברך על ידי שיפור האוטופגיה וההתפשטות של כונדרוציטים תוך דיכוי אפופטוזיס ודלקת באמצעות עיכוב מסלול HIF-1α/BNIP3.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים הכוללים דגימות אנושיות אושרו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העממי המרכזי של ג'נג'יאנג (אישור מס. KY-YS-2021-09). הסכמה מדעת בכתב התקבלה מכל המשתתפים לפני איסוף הדגימה. הריאגנטים והציוד המשמש מפורטים בטבלת החומרים.
1. מטופלים ועיצוב המחקר
גויסו שלושים חולים שאובחנו עם דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA) ועברו ניתוח מפרק ברך מלא. הקבוצה כללה 14 גברים ו-16 נשים, בגילאי 52-75 שנים (ממוצע ± SD: 64.3 ± 12.6 שנים), כולם עומדים בקריטריונים של הקולג' האמריקאי לראומטולוגיהKOA 12. מטופלים לא נכללו אם קיבלו תרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות או סטרואידים תוך שבועיים לפני הניתוח או זריקות תוך מפרקיות תוך חודש אחד.
2. תרבית כונדרוציטים ראשונית
הסחוס המפרקי נאסף בתנאים סטריליים מיד לאחר הניתוח והוכנס ל-PBS קר. באמצעות אזמלים סטריליים, הסחוס נחתך לשברים של ~1 מ"מ מעוקב על לוח זכוכית קר כקרח והועבר לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל המכיל 10 מ"ל של 0.25% טריפסין-EDTA. הצינור הודגר באמבט מים רועד של 37 מעלות צלזיוס ב-80 סל"ד למשך 30 דקות והפך בעדינות כל 5 דקות כדי להקל על העיכול. הסופרנטנט נשאב, וכדור הרקמה נשטף פעם אחת עם PBS וצנטריפוגה ב-200 × גרם למשך 5 דקות. לאחר מכן הכדור הושעה מחדש ב-10 מ"ל של 0.02% קולגנאז מסוג II ועוכל ב-37 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות עם טלטול. המתלים הועברו למעלה ולמטה כל 30 דקות כדי לקדם דיסוציאציה, הועברו דרך מסננת של 70 מיקרומטר, וצנטריפוגה שוב ב-200 × גרם למשך 5 דקות. הגלולה שהתקבלה הושעתה מחדש ב-DMEM בתוספת 10% FBS, 100 U/mL פניצילין ו-100 מיקרוגרם/מ"ל סטרפטומיצין ונזרעה לתוך צלוחיות T25. התאים הודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2, המדיום הוחלף כל 2-3 ימים, ותאים ממעברים 1-2 שימשו לניסויים. קבוצות הניסוי כללו בקרה תקינה, מודל ריק, HSYA (100 מיקרומול/ליטר), מעכב HIF-1α YC-1 (10 מיקרומול/ליטר), רפמיצין (10 ננומול/ליטר), HSYA + YC-1 ו-HSYA + רפמיצין.
3. נוקדאון HIF-lα בתיווך siRNA, BNIP3
כונדרוציטים ראשוניים נזרעו בצלחות של 6 בארות ב-2-5 ×-105 תאים לבאר ותורבו ב-37 מעלות צלזיוס עד שהגיעו למפגש של 30%-50%. עבור כל באר, 5 מיקרוליטר של 20 מיקרומטר siRNA דולל ב-250 מיקרוליטר Opti-MEM, ו-5 מיקרוליטר של מגיב טרנספקציה מבוסס ליפידים דולל בנפרד ב-250 מיקרוליטר Opti-MEM. שתי התמיסות עורבבו בעדינות והודגרו בטמפרטורת החדר למשך 15-20 דקות ליצירת קומפלקסים. מדיום התרבית הוחלף ב-1.5 מ"ל DMEM טרי עם 10% FBS, וקומפלקס ה-siRNA-ליפידים (500 מיקרוליטר) נוסף טיפה לאורך דופן הבאר עם מערבולת עדינה. התאים הודגרו במשך 6 שעות, המדיום הוחלף במדיום שלם, והתרבית נמשכה 48-72 שעות. יעילות הנוקדאון אומתה על ידי qRT-PCR וכתם מערבי לפני טיפולים נוספים.
4. אליסה
סופרנטנטים של תרבית תאים נאספו, צנטריפוגה ב-200 × גרם למשך 5 דקות, ודוללו 1:2 במאגר הבדיקה בעת הצורך. ערכות ELISA עבור IL-1β, TNF-α ו-IL-6 שימשו על פי פרוטוקול היצרן. תקנים, ריקים ודוגמאות הופעלו בשלוש עותקים. לאחר תגובת המצע, הספיגה נמדדה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות תוך 15 דקות.
5. בדיקת MTT
כונדרוציטים נזרעו לתוך צלחות של 96 בארות ב-5,000 תאים/באר ב-100 מיקרוליטר של מדיום שלם והודגרו במשך 0 שעות, 24 שעות, 48 שעות או 72 שעות. בכל נקודת זמן, 20 מיקרוליטר של תמיסת MTT (5 מ"ג/מ"ל ב-PBS) נוספו ישירות לכל באר, והצלחות הודגרו ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות עד שגבישי פורמאזאן סגולים נראו בתחתית הבארות. הסופרנטנט נשאף בזהירות מבלי להפריע לגבישים, 150 מיקרוליטר של DMSO נוספו לכל באר, והצלחות הונחו על שייקר ב-100 סל"ד למשך 10 דקות כדי להמיס את הגבישים לחלוטין. הספיגה נמדדה ב-490 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות. זמן הדגירה הקצר נבחר כדי למנוע רוויית אותות בתאים פעילים מאוד מבחינה מטבולית.
6. ציטומטריית זרימה
התאים נקטפו על ידי טריפסיניזציה, צנטריפוגה ב-200 × גרם למשך 5 דקות, ונשטפו פעמיים עם PBS קר. הם הושעו מחדש ב-500 מיקרוליטר של מאגר קשירה ב-~1 ×-106 תאים/מ"ל, ונוספו 5 מיקרוליטר Annexin V-FITC ו-5 מיקרוליטר PI. לאחר ערבוב עדין, התאים הודגרו במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר בחושך. הדגימות נותחו על ציטומטר זרימה, עם לפחות 10,000 אירועים שנאספו לכל דגימה (עירור 488 ננומטר, פליטה FITC 530/30 ננומטר, PI > 600 ננומטר). תאים אפופטוטיים כומתו באמצעות תוכנה סטנדרטית.
7. כתמים מערביים
התאים נשטפו פעמיים עם PBS קר ועברו ליזה במאגר RIPA של 200 מיקרוליטר המכיל מעכבי פרוטאז על קרח למשך 30 דקות. התאים גורדו עם מגרד פלסטיק, צנרתו למעלה ולמטה כדי להפחית את הצמיגות, וצנטריפוגה ב-12,000 × גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. סופרנטנטים נאספו, וריכוזי החלבון נמדדו באמצעות בדיקת BCA. כמויות שוות של חלבון (30 מיקרוגרם) עורבבו עם 5× מאגר העמסה, חוממו ב-95 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות, והופרדו על ג'ל 10%-12% SDS-PAGE. אלקטרופורזה הופעלה ב-80 וולט לערימה ו-120 וולט להפרדה, וחלבונים הועברו לממברנות PVDF ב-300 mA למשך 90 דקות. הממברנות נחסמו בחלב דל שומן 5% למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר והודגרו למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס עם נוגדנים ראשוניים (1:1,000). לאחר שלוש שטיפות עם TBST, הממברנות הודגרו עם נוגדנים משניים מצומדים ל-HRP (1:5,000) למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. רצועות החלבון הודגמו עם מצע ECL וצולמו באמצעות מערכת זיהוי כימילומינסנציה עם חשיפה של 30-120 שניות. עוצמות הלהקה כומתו באמצעות ImageJ, ו-GAPDH שימש כבקרת הטעינה.
8. צביעת Monodansylcadaverine (MDC)
פתרון עבודה של 50 מיקרומטר MDC הוכן מתמיסת המלאי מיד לפני השימוש. התאים קובעו עם 1 מ"ל של 4% פרפורמלדהיד למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר, נשטפו פעמיים עם PBS והודגרו עם תמיסת עבודה של 500 מיקרוליטר MDC למשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס בחושך. לאחר שתי כביסות עם PBS, הכיסויים הותקנו עם מדיום הרכבה נגד דהייה ונצפו תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי (עירור 355 ננומטר, פליטה 512 ננומטר).
9. מיקרוסקופ אלקטרונים שידור (TEM)
התאים נקצרו ונאספו על ידי צנטריפוגה ב-200 × גרם למשך 5 דקות, ולאחר מכן קובעו ב-2% גלוטרלדהיד ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. הדגימות נשטפו שלוש פעמים עם PBS למשך 5 דקות כל אחת וקובעו לאחר מכן בטטרוקסיד אוסמיום 1% למשך שעה אחת ב-4 מעלות צלזיוס במכסה אדים. ההתייבשות בוצעה באמצעות סדרת אצטון מדורגת של 30%, 50%, 70%, 90% ו-100% למשך 10 דקות כל אחת. הדגימות הוחדרו עם שרף אצטון/אפוקסי 1:1 למשך שעה ולאחר מכן עם שרף טהור למשך הלילה. ההטבעה בוצעה בשרף טרי ופולימריזציה בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות. קטעים אולטרה-דקים של 50-70 ננומטר נחתכו עם אולטרה-מיקרוטום, הורכבו על רשתות נחושת של 200 רשת, הוכתמו ב-2% אורניל אצטט למשך 30 דקות ולאחר מכן ציטראט עופרת למשך 15 דקות, נשטפו במים מזוקקים, יובשו באוויר ונבדקו תחת מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה ב-80 קילו-וולט. כהערת בטיחות, גלוטראלדהיד ואוסמיום טטרוקסיד הם רעילים ונדיפים ויש לטפל בהם רק במכסה אדים עם כפפות ומשקפי מגן. יש להשליך פסולת למיכלים מסוכנים ייעודיים בהתאם לפרוטוקולי הבטיחות המוסדיים.
10. ניתוח סטטיסטי
כל הניסויים בוצעו בשלושה עותקים. הנתונים מבוטאים כממוצע ± SD. המובהקות הסטטיסטית הוערכה באמצעות ANOVA חד כיווני ואחריו מבחן פוסט-הוק LSD, כאשר P < 0.05 נחשב מובהק.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
השפעת HSYA על ביטוי ציטוקינים פרו-דלקתיים של כונדרוציטים (IL-1β, TNF-α, IL-6)
בהשוואה לקבוצת הביקורת הרגילה, כל הקבוצות האחרות הראו רמות גבוהות משמעותית של ציטוקינים מעודדי דלקת (IL-1β, TNF-α ו-IL-6) (P < 0.05, טבלה 1, איור 1A-G). טיפול ב-HSYA, מעכב HIF-1α, משרה אוטופגיה, מעכב HSYA + HIF-1α, או HSYA + משרה אוטופגיה הפחית משמעותית את רמות הציטוקינים ביחס לקבוצת המודל הריק (P < 0.05). בין אלה, הטיפולים המשולבים (מעכב ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דלקת מפרקים ניוונית (OA), מחלה כרונית נפוצה, פוגעת באופן משמעותי באיכות החיים של החולים. מבין תת-הסוגים השונים של דלקת מפרקים ניוונית, KOA הוא הנפוץ ביותר, התורם לנטל המחלות העולמי. למרות השכיחות הגבוהה שלו, האטיולוגיה המדויקת והמנגנונים הפתופיזיולוגיים הבסיסיים של KOA נותרו חמקמקים. יחסי הגומלין המורכבים בין תהליכים מכניים וביוכימיים בתוך הסחוס המפרקי, במיוחד ויסות תפקוד הכונדרוציטים, הם חיוניים בפתוגנזה של KOA. יש לציין כי ירידה ניכרת בפעילות האוטופגיה התגלתה כגורם מרכזי בהתחלה והתקדמו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.
עבודה זו נתמכה על ידי הלשכה לרפואה סינית מסורתית של מחוז גואנגדונג
(מענק מס' 20221446).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1% טטרוקסיד אוסמיום | מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים | 19150 | תיקונים נוספים ודגימות צבע לניתוח TEM |
| 2% גלוטראלדהיד | סיגמא-אלדריץ' | G5882 | מתקן תאים להכנת דגימת TEM |
| 4% פאראפורמלדהיד | סרוויסביו | G1101 | מתקן תאים לצביעת MDC והכנת דגימות TEM |
| AG1478 | חברת סלק | S1005 | הזרקה תוך-ורידית של 20 מ"ג/ק"ג, מעכב קינאז של קולטני ErbB במודל חולדה |
| ערכת גילוי אפופטוזיס Annexin V-FITC/PI | ביצה ביולוגית | BS3030 | צביעת תאים אפופטוטיים לזיהוי ציטומטריית זרימה |
| מעורר אוטופגיה (RAPA) | תאגיד סיגמא | R0395 | רפמיצין, משרה אוטופגיה, בשימוש ב-10 ננומול לליטר בניסויים בכונדרוציטים |
| נוגדן בקלין1 | ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז | SC-48341 | נוגדן ראשי לזיהוי כתם מערבי של חלבון הקשור לאוטופגיה Beclin1 |
| נוגדן BNIP3 | ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז | SC-517348 | נוגדן ראשי לזיהוי ווסטרן בלוט של BNIP3 |
| חממת פחמן דו-חמצני | ייהנג | BPN-150CW | לתרבית תאים |
| דימתיל סולפוקסיד (DMSO) | סיגמא-אלדריץ' | D2650 | ממיס גבישי פורמזן במבחן MTT |
| DMEM | ביוטיים | C0001 | מדיום תרבית תאים, בתוספת 10% FBS לתרבות כונדרוציטים |
| קורא מיקרופלט ELISA | תרמו פישר סיינטיפיק | מולטיסקאן FC | מודד ערכי OD במבחני ELISA ו-MTT |
| תגובת כימילומינסנציה משופרת (ECL) | תרמו פישר סיינטיפיק | 32106 | המחשה של רצועות חלבון ב-Western Blot |
| שרף אפוקסי (EPON812) | מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים | 14120 | הטמעת דגימות לחתך TEM |
| FBS | ביוטיים | C0205 | סרום בקר עוברי, נוסף ל-DMEM לתזונה של כונדרוציטים |
| ציטומטר זרימה | בקמן (הוזכר בגלל אפופטוזיס) | CytoFLEX S | מזהה קצב אפופטוזיס של כונדרוציטים וסמנים תאיים |
| מיקרוסקופ פלואורסצנציה | אולימפוס | IX73 | צופה בוזיקולות אוטופגיות מוכתמות ב-MDC |
| מערכת הדמיית ג'ל | ביו-ראד | ChemiDoc XRS+ | לוכד ומכמת רצועות חלבון מ-Western Blot |
| HIF-1 ו-alpha; נוגדן | ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז | SC-13515 | נוגדן ראשי לזיהוי ווסטרן בלוט של HIF-1α |
| HIF-1 ו-alpha; מעכב (YC-1) | חברת סלק | S1047 | HIF-1 ו-alpha; מעכב מסלולים, בשימוש ב-10 & MU; mol/L בניסויים בתא |
| צנטריפוגה מקוררת מהירה | אפנדורף | 5430R | משמש להפרדת רכיבים |
| נוגדן משני מצורף ל-HRP | Jackson ImmunoResearch | 115-035-003 | קושר נוגדנים ראשוניים להגברת אות ב-Western Blot |
| IL-1 ובטא; ערכת אליסה | ביולוגיה של שנגונג | C5236 | כימות IL-1 ובטא; רמות בסופרנטנטים של תאים באמצעות ELISA |
| IL-6 אליסה קיט | ביולוגיה של שנגונג | C5237 | כימות רמות IL-6 בסופרנטנטים של תאים באמצעות ELISA |
| נוגדן LC3 | ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז | SC-398822 | נוגדן ראשי לזיהוי ווסטרן בלוט של חלבון הקשור לאוטופגיה LC3 |
| מגיב ליפופקטמין 3000 | תרמו פישר סיינטיפיק | L3000001 | תגובת טרנספקציה מבוססת ליפידים לטנספקציה |
| מונודנסילקדברין (MDC) | סיגמא-אלדריץ' | D4008 | 0.05 mol/L, צביעת וזיקולות אוטופגיות למיקרוסקופיה פלואורסצנטית |
| MTT Reagent | ביוטיים | C0009 | 0.5 מ"ג/מ"ל, בשימוש בבדיקת MTT להערכת התרבות כונדרוציטים |
| ננודרופ 2000 | תרמו פישר סיינטיפיק | ND-1000 | קבעו את ריכוז ה-RNA |
| ערכת אליסה NRG1 | אבקאם (בריטניה) | ab213961 | מודד ריכוז NRG1 ברקמות הלב באמצעות ELISA |
| נוגדן P62 | ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז | SC-28359 | נוגדן ראשי לזיהוי ווסטרן בלוט של חלבון הקשור לאוטופגיה P62 |
| נוגדן ErbB4 מזרחן (p-ErbB4) | זיקה | AF3445 | נוגדן ראשי לזיהוי ווסטרן בלוט של ErbB4 מופעל |
| ערכת ריאגנט PrimeScript RT | טאקארה | RR047A | שעתוק הפוך של RNA כדי לספק תבניות לניסוי qPCR |
| מערכת PCR כמותית בזמן אמת | ביו-ראד | CFX96 | לזיהוי RT-PCR |
| NRG1 רקומביננטי אנושי (rh-NRG1) | R& D Systems | 396-HB | הזרקה תוך-ורידית של 5 מ"ג/ק"ג להפעלת מסלול NRG1/ErbB4 במודל עכברוש |
| RIPA Buffer | מיילונביו | MA0151 | בופר ליזיס עם מעכבי פרוטאז/פוספטאז להפקת חלבון |
| פרח צהוב A (HSYA) | חברת צ'נגדו מנסיט ביוטכנולוגיה בע"מ. | חובב-160601 | רכיב ביואקטיבי מ-Carthamus tinctorius L., בשימוש ב-100 & mu; mol/L לטיפול בכונדרוציטים |
| ציוד SDS-PAGE | ביו-ראד | טטרה מיני-פרוטיאן | מפריד חלבונים לפי משקל מולקולרי ב-Western Blot |
| TB Green Premix Ex Taq II | טאקארה | RR820A | לניסוי qPCR |
| TNF-α ערכת אליסה | ביולוגיה של שנגונג | C5238 | כימות TNF-ו-alpha; רמות בסופרנטנטים של תאים באמצעות ELISA |
| נוגדן ErbB4 כולל | פרויטנטק | 19943-1-AP | נוגדן ראשי לגילוי Western Blot של ErbB4 הכולל |
| מיקרוסקופ אלקטרונים להעברת חשמל (TEM) | היטאצ'י (מוזכר עבור וזיקולות אוטופגיות) | H-7650 | מתבונן בוזיקולות אוטופגיות במיטוכונדריה ברמה אולטרסטרוקטורלית |
| ריאגנט טריזול | תרמו פישר סיינטיפיק | 15596026 | להפקת RNA |
| טריפסין-אדטה | גיבקו (תרמו פישר) | 25200056 | משמש לעיכול אנזימטי של סחוס מפרקי לבידוד כונדרוציטים |
| קולגנאז סוג II (0.02%) | וורת'ינגטון ביוכימיק | CLS-2 | מעכל רקמת סחוס לצורך בידוד כונדרוציטים |
| נוגדן β-catenin | ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז | SC-7963 | נוגדן ייחוס פנימי לנירמול ווסטרן בלוט |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.